紫外分光光度法测定川射干总黄酮的含量

张潇 李蓉 唐斌

(1.泸州医学院化学教研室,2.泸州医学院药理毒理学研究室,四川 泸州 646000)

本品为鸢尾科植物鸢尾(Iris tectorum Maxim)的干燥根茎,苦,寒,入肺、肝经。主产广东、广西和四川,具有消热解毒,消痰利咽的功效,用于咽喉肿痛,痰咳气喘[1]。现代药学研究表明,川射干含有射干苷、鸢尾苷、野鸢尾苷、鸢尾甲苷A、点地梅双糖苷、鸢尾苷元、鸢尾甲黄素A、染料木素等多种物质[2]。本文以射干苷为对照品,采用紫外分光光度法,建立了川射干总黄酮的含量测定方法。本试验所用的仪器设备操作简单,适于普及,可用于川射干药材的质量控制,为其开发利用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

UV-2100双光束紫外/可见光分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);XR205SM-DR型电子天平(瑞士Precisa);CQX25-06型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司,功率250W,频率25kHz)。

1.1.2 药品

射干苷标准品：购自中国药品生物制品检定所,在选定色谱条件分离后按面积归一化法计算含量为98.88%,符合含量限度要求,故以含量为100%计算;川射干饮片：购自泸州市圣杰药房,经泸州医学院药学院张春博士鉴定为鸢尾科植物鸢尾的干燥根茎,即川射干;乙醇为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 供试品溶液的配制

精确称取川射干粉末约1g(过三号筛),置于100ml的具塞锥形瓶中,加入70%乙醇约50mL,超声处理(功率250W,频率50kHz)1h,放冷,摇匀,减压过滤,用少量 70%乙醇分多次洗涤滤渣,将滤液转入100ml容量瓶中,用70%乙醇定容,精确量取滤液0.2mL,置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇定容,摇匀,即得。

1.2.2 射干苷对照品溶液的制备

精确称取射干苷标准品适量,用70%乙醇制成浓度为0.1 mg◦mL-1的溶液,即得。

1.2.3 测定波长的确定[3]

取射干苷对照品及供试品溶液各适量,以70%乙醇为空白试剂,分别于紫外可见光分光光度计200～600nm波长范围内进行波长扫描。

1.2.4 线性关系考察

精确量取射干苷对照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分别置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇稀释溶解至刻度,摇匀,以70%乙醇为空白试剂,于266nm波长处测定吸光度。

1.2.5 精密度试验

取上述供试品溶液,连续测定5次。

1.2.6 稳定性试验

取对照品及供试品溶液于室温分别放置 0、2、4、6、8、10、12h后,测定吸光度。

1.2.7 重现性考察

取上述药材样品,按1.2.1方法制备供试品溶液,平行制备5份,分别测定吸光度。

1.2.8 回收率试验

取已知射干苷含量(4.12%)的川射干药材粉末 6份 ,每份约0.5g,分成 3组,每组 2份,分别精密添加对照品溶液(0.1 mg◦mL-1)2、3、4ml,按1.2.1方法制备溶液并按1.2.9方法测定,计算回收率。

1.2.9 样品的含量测定

取3个批次的川射干药材粉末各约1g(过三号筛),按1.2.1方法制备供试品溶液,以70%乙醇为空白试剂,于紫外分光光度计266nm波长处测定吸光度,分别计算其含量。

2 结果

2.1 检测波长

川射干提取液与射干苷对照品溶液均在266nm处有最大吸收,故确定266nm为检测波长。

2.2 线性关系

以吸光度(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标绘制标准曲线,得到回归方程为Y=0.692X-0.0085,r=0.9991。射干苷浓度在0.002～0.010 mg◦mL-1范围内线性关系良好。

2.3 精密度

计算得5次吸光度的RSD为0.53%,表明本方法精密度良好。

2.4 稳定性

计算得7个时间点吸光度的RSD为0.25%,表明对照品及供试溶液在12h内稳定。

2.5 重现性

试验测得5份川射干药材中总黄酮的平均值为4.12%,RSD值为0.76%(n=5),表明方法重现性良好。

2.6 回收率

结果表明加样回收率的平均值为97.45%;RSD=0.65%(n=6),符合规定(见表1)。

2.7 样品的含量测定

测得3份样品中,川射干总黄酮的平均含量为4.17%(以射干苷计)(见表2)。

3 讨论

在供试品溶液制备时曾研究了川射干中总黄酮的提取溶剂,分别以水,50%甲醇、50%乙醇、70%乙醇作提取溶剂。结果显示,以70%乙醇为提取溶剂时,样品中总黄酮含量最高,因此,选用70%乙醇为样品提取溶剂。曾考察了超声处理时间(30、45、60、90min),结果提取60min和90min时提出液的浓度相差不大,但比45min时明显增高,考虑到超声90min时间太长,提取过程中产热严重可能会破坏某些成分,故选择超声处理60min。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

表2 样品中射干苷的含量测定结果

采用紫外分光光度法测定川射干中总黄酮的含量,仪器设备操作简单,适于普及,灵敏度高,检测结果准确可靠,具有良好的重现性和回收率,故该方法可用于川射干药材的质量控制。

1 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版一部[S].北京：化学工业出版社,2005：28.

2 袁崇均.川射干化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2008,20(3)：444-446.

3 李国信.紫外分光光度法测定射干中总异黄酮的含量[J].辽宁中医杂志,2008,35(3)：428-429.