HPLC法测定愈风宁心软胶囊中葛根素的含量

河北省中医院 程 杰 刘 姣 杨旭杰 陈 哲 刘文辉 陈品英 （石家庄 050011）

愈风宁心软胶囊由葛根单味药材组成,具有解痉止痛,增强脑及冠脉血流量等作用。临床用于高血压头晕,头痛,颈项疼痛,冠心病,心绞痛,神经性头痛,早期突发性耳聋等症的治疗。本品为软胶囊剂,所含辅料成分复杂,干扰大,给含量测定带来了很大困难,本文采用高效液相色谱法对其所含主要成分葛根素进行了含量测定研究。

1 仪器、试药

LC-10ATvp高效液相色谱仪 （日本岛津）、SPD-10Avp型紫外检测器 （日本岛津）;色谱柱为 C 18柱 （250 mm×4.6mm迪马公司）、葛根素 （0752-200209）由中国药品生物制品检定所提供、愈风宁心软胶囊、乙腈 （色谱纯）、其余试剂均为分析纯。

2 实验方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil-C18（250mm×4.6 mm,5μm）、流动相 ∶乙腈 -0.1%磷酸溶液 （12∶88）、检测波长:250nm、流速:1m L/m in、进样量 20μL、理论塔板数以葛根素峰计应不低于 4 000。

2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物,混匀,取约0.15g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 70%甲醇溶液 20mL,精密称定。加热回流提取 30 min,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,精密量取续滤液1.0mL置10mL量瓶中,加 70%甲醇稀释至刻度,摇匀,离心 （5 000 r/min,5m in）,取上清液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量,精密称定,加 70%甲醇溶解并稀释至刻度,制备成浓度为100μg/m L溶液,作为对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 按软胶囊工艺要求制备,制成不含葛根的成品,按2.3项下方法操作,制得空白对照溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察:精密量取 2.4项下对照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL,加 70%甲醇定容于10mL量瓶中,摇匀。在上述色谱条件下,依次进样,每次 20μL。以葛根素对照品浓度为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算线性回归方程为Y=74 100.30X+23 402,r=0.999,结果表明葛根素在 0.2～2.0μg范围内,其峰面积与进样量有良好的线性关系。

2.5.2 空白试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性液各 20μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。结果阴性对照液在与葛根素对照品相同保留时间处未显色谱峰,故认为无干扰。

2.5.3 精密度试验:取对照品溶液 （40μg/mL）20 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,连续测定 6次。结果葛根素的 RSD为 1.40%（n=6）,表明仪器精密度良好。

2.5.4 稳定性试验:取供试品溶液,在 10 h内分别进样5次 （0,2,4,8,10 h）,结果葛根素进样的 RSD为1.21%,表明供试品溶液在 10 h内基本稳定。

2.5.5 重复性试验:按上述方法对批号为 090301的样品进行提取测定,共测定 6份。结果葛根素平均含量为31.38mg/粒,RSD为 1.52%,表明该方法重现性良好。

2.5.6 回收率试验:采用加样回收法,取批号为 090301的样品 （含量葛根素 62.7mg/g）加入葛根素对照品,按含量测定项下方法进行,计算回收率,结果见表1。

2.6 含量测定 制备 3批样品的供试品液,吸取对照品溶液、供试品溶液各 20μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,按外标法计算样品中葛根素的含量,结果见表 2。

3 讨论

3.1 本实验供试品溶液制备中对甲醇、50%甲醇、70%甲醇、乙醇、50%乙醇、70%乙醇 6种提取溶剂提取效果进行了比较;并且比较了 3种提取方法:振摇提取、超声提取和回流提取,同时对不同时间的提取效果进行了比较。因本品为软胶囊剂,其中辅料较多,对供试品溶液的制备带来不利影响,通过对以上项目的考察,结果证明以 70%甲醇为提取溶剂,样品经回流提取30min,葛根素即可提取完全,故样品采用 70%甲醇为提取溶剂,加热回流 30 min,制备供试品溶液。

表1 葛根素回收率试验考察结果

表2 样品中葛根素的含量 （n=3）

3.2 实验采用了甲醇 -0.5%磷酸溶液[1]、甲醇 -水[2]、乙腈-水[3]系统作为流动相均不能达到基线分离。本研究采用乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,得到分离效果较好。

3.3 以上试验结果表明,本文测定方法简便易行,结果准确,重现性好,可有效地控制该制剂的质量。

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（2010-01-25 收稿）