低分子肝素药物的质量标准综述

张利赟

山东大学，山东 济南 250100

肝素是临床常用的抗凝血药，但在临床使用中暴露出很多缺点，如：剂量个体差异大，自发性出血倾向，停药后血栓易复发等，还有可引起血小板减少症，长期应用可产生暂时性脱发、骨质疏松和自发性骨折等不良反应[1]。

随着对肝素的深入研究，特别是对以往认为无活性的低分子组分对Xa因子和凝血酶（thrombin）的作用差异的认识，为开发LMWH的提供了理论依据，20世纪70年代末，LMWH进入临床。

低分子量肝素（low-molecular-weight heparin，LMWH）是未分级肝素（unfractionated heparin，UFH）中具有较低分子量的组分或片段，具有与UFH相同的母体结构。UFH是一种高度硫酸化的糖胺聚糖，分子量范围为3000～30000。LMWH是近20年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，是采用适当方法将肝素分级或降解得到的具有较低分子量的肝素组分或片段3000～8000。在临床使用中，与肝素比较，LMWH抗血栓作用强，抗凝血作用弱于肝素，且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小，按体重给药，抗凝效果可以预测等优点[2]，目前已逐步取代肝素应用于临床。国外已有超低分子肝素研究[3]，其平均分子量为2000～3000，抗FXa/FIIa>30，已经进入III期临床研究。

1 国内外几种LMWH的质量标准综述

目前，国外LMWH商品约有十多种，我国进口的有6种，国内仿制的四类新药生产企业约有十几家。我国有低分子肝素钠部颁标准。

1.1 LMWH质量标准的一般要求

表1 6种LMWH来源及结构特征

总的来说，LMWH的重要指标要求重均分子量小于8000，分子量小于8000 的组分含量不得低于60%，按干燥品计算，抗Xa效价≥ 70IU/mg，抗Xa/抗IIa≥1.5。除以上重要的鉴别指标外，还应包括钠盐与钙盐的鉴别，13C的核磁共振鉴别。检查项中应包括酸碱度、溶液的颜色等常规检查；微生物限度、细菌内毒素等安全性检查；重金属的限量、核酸类杂质、杂蛋白、总氮含量的测定等检查[4]。

我国LMWH卫生部标准（WS-196（X-169）-97），其要求相当于BP总则，基本上只要求产品满足LMWH的两个最基本的特性，即重均分子量在8000以下，小于8000的级分不少于60%；每1mg的抗Xa因子效价不得少于70国际单位，抗Xa因子与抗IIa因子活性比不小于1.5，对杂质的控制也不是很严格，检测方法不够专属灵敏。

1.2 不同LMWH之间的差异

LMWH的结构复杂，其中组成LMWH的单糖有10余种，各种单糖的糖环上还有硫酸基、乙酰基等不同的取代基，各种单糖之间的连接方式不同，及取代基的不同或者取代基但取代的位置不同，导致LMWH具有不同的生物活性[5]。

不同的LMWH品种，由于生产工艺的不同，其分子量分布、生物活性、抗Xa/抗II活性比、硫酸化程度和末端结构等方面存在差异。6种产品分子量的指标不同，除汀肝素钠外，各种产品重均分子量在3000～6000之间，峰位分子量在4500～6000之间，汀肝素钠重均分子量、峰位分子量与其它几个产品相比，差异明显，达肝素钠和汀肝素钠分子量大于8000的组分明显高于其它几个品种。抗Xa/抗II活性比指标也有明显差异，依诺肝素和瑞肝素钠相近，达肝素钠、帕肝素钠、汀肝素钠相近，但与前两者有明显差异。

表2 6种LMWH活性比较

2 生产工艺 [6，7]

LMWH的制备是以肝素为原料（BP要求为从猪肠黏膜来源的肝素），用物理、化学或生物的方法将其分级或降解，得到的具有较低分子量的组分或片段。目前多采用的是化学或生物降解方法，主要有以下几种：亚硝酸降解，β-消除降解法，过氧化物降解法和肝素酶降解法，此外也有利用氧化降解法和季铵碱降解等方法降解，再利用有机溶剂分级沉淀、层析和超滤等手段进行处理。

3 适应症

LMWH主要用于预防和治疗各种药栓性疾病，不同的LMWH由于分子量、分子结构、抗Xa/抗II活性比等方面的不同，适应症和临床使用也不完全相同[9]。

国外学者过去几年来陆续发现LMWH新的用途，2007年，美国FDA又新批准了将依诺肝素钠用于治疗急性ST心肌梗死症的新适应症[4]；我国临床医生首创将低分子肝素与中药三七提取物血塞通配伍治疗，发现其治疗不稳定心绞痛的效果奇佳[10]。

4 讨论

英国药典（BP）从1993年版的1994年增补本中开始收载LMWH，目前BP收载了5种LMWH，分别是达肝素钠、依诺肝素钠、纳肝素钙、帕肝素钠、汀肝素钠，欧洲药典（EP）收载的LMWH内容与BP相同，美国药典（USP）在32版收录了依诺肝素钠。这5种LMWH的制备工艺不同，因而它们的分子量及分子量分布、硫酸化程度、抗凝活性、末端结构等均不相同，BP对它们的特点均有详细的描述。近年来，随着对LMWH结构研究的不断深入，不断增补对LMWH末端结构的描述，其中USP32版依诺肝素就加入了1.6-脱水结构的要求。

肝素类药物，特别是LMWH销售额增长迅猛，近年来以年均20%以上的速度增长。由于“疯牛病”的泛滥，欧美各国已不再从牛羊副产品中提取而改用猪肠为原料提肝素，我国是仅次于美国的世界第二生猪饲养大国，肝素钠原料来源丰富，是肝素生产大国，但我国目前的状况是原料出口，而制剂进口，在高端市场竞争力低下。目前，我国已有国产的LMWH上市，但我国申报的低分子肝素没有分级，基本上只能满足BP总则的要求，对杂质的控制也不是很严格，检测方法不够专属灵敏。目前，我国还有多个企业在仿制上述制剂的原料，为了提高国内企业产品质量，增加市场竞争力，除符合国际通用药典的要求外，应根据生产工艺对LMWH进行分类，并针对不同工艺重点关注分子量及其分布和活性方面的不同，以及工艺中引入的特殊杂质，防止多硫酸软骨素类似事件的发生；筛选快速、灵敏、适合我国国情的杂质检测方法，制订更为严格的质量标准，以更好地保障人们用药安全有效，增强国产LMWH的市场竞争力。

[1]王威，甘露.肝素的副作用及防治措施.临床医学杂志，2001(10)：39-40.

[2]曹苹，张麟生.中国医院药学杂志，2001，21(5).

[3]李京，范慧红.低分子肝素药用现状及质量标准概况[J].中国生化药物杂志，2004(1)：53-55.

[4]英国药典.6.0版.

[5]石峰，姬胜利，迟延青，等.低分子肝素的制备方法及其结构与生物活性的关系[J].中国生化药物杂志，2003，24(2)：101-104.

[6]张万忠，胡晓东.低分子肝素的制备与纯化.沈阳化工学院学报，2003(6)：114-117.

[7]于广利，管华诗.低分子量肝素的制备及其结构与活性差异[J].青岛海洋大学学报，2001(3)：673-680.

[8]何奇明.中国医药导刊，2007(3)：230-230.

[9]刘小伟.低分子肝素钙配伍血塞通治疗短暂脑缺血45例疗效观察[J].陕西医学杂志，2005，34(12).

[10]美国药典.32版.