八月瓜籽中脂肪酸的超声提取及GC-MS分析

欧阳玉祝，李 勇，吴道宏，田向荣

(1.植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000；2.吉首大学食品科学研究所，湖南 吉首 416000)

八月瓜籽中脂肪酸的超声提取及GC-MS分析

欧阳玉祝1,2，李 勇2，吴道宏2，田向荣1

(1.植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室，湖南 吉首 416000；2.吉首大学食品科学研究所，湖南 吉首 416000)

以乙醇、乙酸乙酯、正丁醇和丙酮为溶剂，采用超声辅助提取法提取八月瓜籽油。用GC-MS分析八月瓜籽油中脂肪酸的组成和含量，并对4种提取物的组成进行比较。结果表明：乙醇和乙酸乙酯提取的油脂质量较好，油脂提取率分别为19.23%和35.69%，从八月瓜籽油中分别检出11种脂肪酸，其中不饱和脂肪酸主要为油酸和亚油酸，含量分别为71.97%和83.79%。

八月瓜；GC-MS；超声提取；脂肪酸

八月瓜是一种原生态无污染绿色水果，又称木通、羊开口、牛腰子果、八月扎、野人瓜等，是天然药食两用野生经济木质藤本半常绿缠绕植物，富含VC、有机酸、可溶性糖和人体必需的氨基酸等，是养颜美容、健身壮体、延年益寿不可多得的保健果王[1]。研究表明，八月瓜具有良好的解毒利尿、除湿镇痛、防癌抗癌，预防和治疗高血压、高血脂等效用[2-3]，目前主要作为药物用于临床。王晔[4]、高慧敏[5]等对三叶木通藤茎的化学成分进行了研究，其中含有大量的齐墩果酸。何仰清[6]、孙萍[7]等用LC-MS联用对不同木通进行鉴定，而八月瓜籽油的提取和化学成分分析研究的报道较少。气相色谱-质谱联用技术具有快速、高效、准确等优点，在油脂化学成分分析上得到了广泛的应用[8-12]。本实验采用超声提取法提取八月瓜籽油，用GC-MS对脂肪酸的化学成分进行分析比较，以期为八月瓜的开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

八月瓜籽采自于吉首市，将新鲜八月瓜去皮，并将果肉和籽核分离，籽核经洗净，晾干，于6 0℃、0.08MPa真空干燥，粉碎约30目得八月瓜籽粉末备用。

无水乙醇、正丁醇、丙酮和乙酸乙酯均为国产分析纯。

GCMS-QP2010型气相色谱-质谱联用仪(带NIST05. LIB标准库) 日本岛津公司；KQ-250E型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司；RE-85Z旋转蒸发仪 上海青沪仪器厂；SHB-T11循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司；FZ102型微型植物粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司；FA2104N电子分析天平 上海精密科学仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 八月瓜籽油的超声提取

准确称取20g干燥的八月瓜籽粉末于250mL圆底烧瓶中，加入200mL无水乙醇(乙酸乙酯、正丁醇、丙酮)，在70℃温度下超声提取120min，抽滤，滤液用旋转蒸发器去除溶剂，得八月瓜籽油，按下式计算油的提取率。

1.2.2 八月瓜籽油的甲酯化

称取八月瓜籽油0.5g于50mL圆底烧瓶中，加入浓硫酸-甲醇溶液(1:99，V/V)10mL[13-14]，于70℃水浴加热回流60min后，加入正己烷10mL，并加入蒸馏水至瓶颈，取出上清液，再用5mL正己烷洗涤1次，合并上清液，加入无水硫酸钠干燥，用GC-MS分析。

1.2.3 气相色谱-质谱联用分析条件

色谱条件：载气为氦气；汽化室温度250℃；进样量0.5μL；柱流量0.94mL/min；分流比20:1；色谱柱RTX-5MS(30m×0.25mm，0.25μm)；柱温250℃，程序温度：100℃保留2min，以10℃/min上升到250℃，保留5min。

质谱条件：电子轰击源(EI)，电子能量70eV；离子源温度200℃，接口温度230℃；扫描范围29～450u。

2 结果与分析

2.1 八月瓜籽油的提取

不同的提取溶剂对油脂的溶解能力和进入植物细胞的能力不同，油脂的提取率将不同。本实验选择无水乙醇、正丁醇、丙酮、乙酸乙酯为提取溶剂，以八月瓜籽油提取率为指标，取八月瓜籽粉末，在70℃条件下超声提取120min，考察不同溶剂中八月瓜籽油的提取率，结果见表1。

表1 不同溶剂中八月瓜籽油的提取率Table1 Effect of solvents on extraction yield of Akebia trifoliata seed oil

由表1可见，丙酮和乙酸乙酯为溶剂的提取率较高，但提取物中有白色沉淀物，油质差，且溶剂价格较高；正丁醇作为提取溶剂时，提取物的颜色较深，油的质量也不高；乙醇提取的得油率较低，但油脂颜色好，没有沉淀物，而且溶剂价格低，毒副作用小。

2.2 八月瓜籽油的脂肪酸组成及含量分析

2.2.1 乙醇提取油的脂肪酸含量分析

将乙醇提取的八月瓜籽油经甲酯化后，用GC-MS进行检测，用色谱工作站给出脂肪酸甲酯的总离子流图，结果见图1。

图1 八月瓜籽油中脂肪酸的总离子流图Fig.1 Total ion current chromatogram of methyl esterified fatty acids in Akebia trifoliata seed oil

结合NIST05.LIB标准库，将分析结果与标准图谱核对，解析出油的成分，并用峰面积归一法确定油中各种成分相对含量，结果如表2所示。

表2 乙醇提取八月瓜籽油的GC-MS成分分析Table2 GC-MS analytical results of fatty acid composition of ethanol extraction-derived Akebia trifoliata seed oil

由表2可以看出，乙醇提取的八月瓜籽油中主要成分有两类，即烷烃化合物和油脂；烷烃总含量仅占2.49%，油脂的相对含量高达97.52%。油脂中检出11种脂肪酸，其中不饱和脂肪酸4种，相对含量为72.43%；主要产物为油酸和亚油酸，相对含量分别为43.52%和28.45%，相对含量高达71.97%；饱和脂肪酸7种，相对含量为25.09%。研究发现，胆固醇必须与亚油酸结合才能在体内进行正常的运转和代谢；当人体缺乏亚油酸时，胆固醇与饱和脂肪酸结合将发生代谢上的障碍，并沉积在血管壁上，形成动脉粥样硬化，从而引发心脑血管疾病[15]。由于八月瓜籽油中富含油酸和亚油酸，因此，这种油产品有良好的降脂降压和防止动脉硬化等作用，具有较高的应用价值。

表3 4种溶剂提取的八月瓜籽油组成及含量Table3 Comparison of fatty acid composition among Akebia trifoliata seed oil extracted with different solvents

2.2.2 不同溶剂提取的八月瓜籽油成分比较

将4种溶剂提取的八月瓜籽油经甲酯化后，用GCMS检测，结合NIST05.LIB标准库，与标准图谱核对，解析出油脂的主要成分，通过峰面积归一法，确定油脂组成及含量，结果见表3。

表3结果表明：乙醇和乙酸乙酯两种溶剂提取的油脂中分别检出11种脂肪酸，正丁醇和丙酮提取的油脂中只检出8种和6种脂肪酸。油脂中主要产物为亚油酸和油酸类不饱和脂肪酸，其相对含量分别为：71.97%(乙醇提取)、83.79%(乙酸乙酯提取)、82.81%(正丁醇提取)和71.32%(丙酮提取)，丙酮提取物中不饱和脂肪酸只检出油酸，未检出亚油酸。从脂肪酸种类、出油率、油脂外观(颜色和白色沉淀物)综合考察4种溶剂提取的油脂，乙醇提取的油脂外观清亮透明，颜色较鲜，脂肪酸种类多，质量最好；其次是乙酸乙酯提取的油脂，出油率高，脂肪酸种类多，但油中有沉淀物；其余两种溶剂提取的油脂脂肪酸种类较少，有沉淀物或颜色较深，油质量较差。

3 结 论

以乙醇、正丁醇、丙酮和乙酸乙酯为溶剂，用超声波辅助提取法提取八月瓜籽油，油脂提取率分别为19.23%、20.4%、41.33%和35.69%。GC-MS分析表明：乙醇和乙酸乙酯提取的油脂中组分最多，分别检出11种不饱和脂肪酸，主要产物为油酸和亚油酸，相对含量分别为71.97%和83.79%。八月瓜籽油富含不饱和脂肪酸，有很高的营养保健价值和药疗功效，是制备营养性保健调和油的优质原料，具有良好的开发应用价值。

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Ultrasonic-aided Extraction and GC-MS Analysis of Fatty Acids from Akebia trifoliata Seed

OUYANG Yu-zhu1,2，LI Yong2，WU Dao-hong2，TIAN Xiang-rong1
(1. Key Laboratory of Plant Resource Conservation and Utilization(Jishou University), College of Hunan Province, Jishou 416000, China；2. Institute of Food Science, Jishou University, Jishou 416000, China)

The ultrasonic-aided extraction of Akebia trifoliata seed oil was achieved using alcohol, ethyl acetate, n-butanol or acetone as the extraction solvent. Along with this, the oils extracted with the four solvents were comparatively analyzed for their fatty acid composition by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Alcohol was found to be available for better sensory quality of oil, and ethyl acetate for higher oil yield, and the resultant oil yields were 19.23% and 35.69%, respectively. There were 11 fatty acids detected in Akebia trifoliata seed oil, and the major unsaturated fatty acids were oleic acid and linoleic acid, occupying 71.97% and 83.79%, respectively.

Akebia trifoliata；GC-MS；ultrasoni-aided extraction；fatty acids

TS225.1

A

1002-6630(2010)20-0322-03

2010-06-29

湖南省科技厅科技计划项目(2008FJ3077)；植物资源保护与利用湖南省高校重点实验室开放基金项目(JSK201001)

欧阳玉祝(1956—)，男，教授，硕士，主要从事天然产物开发和功能性食品研究。E-mail：ouyang1227@126.com