子痫前期患者胎盘组织中 PDGF-A的表达及意义

高学印 薛瑞敏 郑秀玲 郭影 吉增良

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder comp licating pregnancy,HDCP)是妊娠期一种严重的并发症,国内发病率约为7%～12%[1]。HDCP是围产期母婴死亡的重要原因之一。有研究认为：子宫螺旋动脉的重铸不良导致胎盘缺血,释放某些因子入血引起母体广泛的内皮细胞损伤和功能紊乱是 HDCP发病的、中心环节[2]。血小板源性生长因子-A(platelet-derived growth factor,PDGF-A)是一种结缔组织源性细胞的重要促有丝分裂剂,具有强烈的血管收缩作用,能进一步诱导血小板聚集、激活,继而巨噬细胞移行并活化,导致妊娠患者的胎盘蜕膜螺旋动脉发生急性粥样硬化。HDCP患者体内释放过多的白介素-6(B cell differentiation factor-6,IL-6),刺激 PDGF-A产生,使动脉壁对低密度脂蛋白(low density lipop rotein,LDL)反应性增高及血管收缩,从而引起血管损伤及血压升高。LDL对增殖活跃期的血管内皮细胞毒性作用很强,促进其老化,导致细胞功能失调[3]。本研究通过HE染色观察胎盘组织学特征并检测正常晚孕女性与妊娠期高血压疾病患者胎盘PDGF-A的变化,旨在探讨 PDGF-A与妊娠期高血压疾病发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择 2006年 3月至 2007年 10月在河北医科大学第三医院妇产科剖宫产分娩的产妇 59例,其中正常妊娠组 20例,年龄 22～30岁,平均年龄 26岁;孕周 36～41周,平均38周;为同期住院的无妊娠合并症及并发症的正常孕妇,均因胎位、产道异常或社会因素等行剖宫产分娩。轻度子痫前期组21例年龄 22～33岁,平均年龄 28岁;孕周 35～41周,平均 37周;重度子痫前期组 18例,年龄 22～35岁,平均年龄 29岁;孕周 37～40周,平均 37周;无产科其它并发症及妊娠合并症,无高血压及妊娠期高血压疾病家族史。按参考文献[4]诊断及分类。3组孕妇年龄、孕周差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 试剂：兔抗 PDHF-A多克隆抗体、DAB显色剂等均购自北京奥博森生物技术有限公司。

1.2.2 胎盘标本采集与制备：3组孕妇在剖宫产术中胎盘娩出后,从胎盘母体面中央(避开明显纤维化、钙化区)切取胎盘组织 1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm,充分漂洗,置 10%甲醛溶液中固定 24 h以上,石蜡包埋,连续切片,厚度 2μm,HE染色观察胎盘组织学特征,再进行免疫组化染色。PDGF-A工作浓度均为1∶400。

1.2.3 免疫组化判定标准：以细胞胞浆有棕褐色颗粒沉着为阳性细胞,计数每个视野所含细胞数,计数其中阳性细胞数及着色强度。根据阳性细胞所占比例及着色强度综合制定免疫组化半定量记分标准：①阳性细胞记分：无阳性细胞为 0分;＜25%为 1分;25%～50%为 2分;＞50%为 3分。②着色强度记分：细胞内无染色或染色与背景一致为 0分;细胞浆内可见少量淡黄色颗粒,明显高于背景为 1分;细胞浆内可见较多深棕色颗粒为 2分;细胞浆内可见大量深棕色或褐色颗粒为 3分。两个分值相加为最终判定结果：0～2分(-),3～4分(+),5～6分(++)。

1.3 统计学分析 应用 SPSS 12.0统计软件,计量资料以±s表示,采用单因素方差分析,等级资料采用秩和检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE染色观察胎盘组织学特征 正常孕足月胎盘绒毛和轻度子痫前期胎盘绒毛中滋养细胞以合体滋养细胞为主,细胞滋养细胞比较少见,胎盘蜕膜纤维化不明显(图 1、2),而重度子痫前期胎盘绒毛中,细胞滋养细胞明显增生,滋养细胞下基底膜增厚,绒毛间质纤维蛋白沉积,合体细胞结节增多,合体细胞出芽,发生纤维素样坏死的绒毛增多,绒毛血管增多,绒毛大部分不成熟,胎盘蜕膜间质细胞呈大小不等块状、杆状,蜕膜血管内皮细胞纤维化,蜕膜纤维素性坏死也明显增多(图 3)。2.2 胎盘组织中 PDGF-A的定位及表达 PDGF-A表达主要定位于细胞浆,阳性细胞着色呈棕色、褐色,主要分布于胎盘细胞滋养细胞,在蜕膜间质细胞和血管内皮细胞也有少量表达。正常妊娠组 PDGF-A表达为弱阳性(图 4、5);轻度子痫前期组PDGF-A表达为阳性(图 6、7);重度子痫前期组 PDGF-A表达为强阳性(图 8、9)。正常妊娠组PDGF-A表达水平低于轻度子痫前期组,但差异无统计学意义(P＞0.05);轻度子痫前期组和重度子痫前期组中 PDGF-A表达水平比较差异有统计学意义(P＜0.05)。见表 1。本研究发现,HDCP患者胎盘蜕膜间质细胞呈大小不等块状、杆状,蜕膜血管内皮细胞纤维化,且在该处组织中 PDGF-A呈阳性表达。

表 1 3组 PDGF-A不同程度阳性表达情况比较 例

3 讨论

HDCP是妊娠期特有的疾病,妊娠终止后多数病理变化可以逆转,说明胎盘这一器官可能在 HDCP发病中起到重要的作用。近年来研究表明,重度子痫前期患者在胎盘形成过程中存在着螺旋小动脉血管重铸异常的现象,其滋养细胞侵蚀能力下降,侵蚀范围缩小,浸润仅达蜕膜段,子宫螺旋动脉未经历正常妊娠时的变化却保持着相对狭窄的管径和对缩血管物质的反应,从而造成胎盘缺血[5]。本研究显示：重度子痫前期胎盘绒毛中,细胞滋养细胞明显增生,滋养细胞下基底膜增厚,绒毛间质纤维蛋白沉积,合体细胞结节增多,合体细胞出芽,发生纤维素样坏死的绒毛增多,绒毛血管增多,绒毛大部分不成熟,胎盘蜕膜间质细胞呈大小不等块状、杆状,蜕膜血管内皮细胞纤维化,蜕膜纤维素性坏死也明显增多。与胎盘缺血血氧所致的一系列病理变化相一致。

研究表明,胎盘的胎儿面血管内皮层及滋养层均有 PDGF及其受体表达,且在重度子痫前期患者组织的闭塞性动脉炎处阳性细胞染色更深[6]。HDCP患者血循环中 TNF-α、血栓素等升高,刺激内皮细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板,使之活化,血小板 α-颗粒中的PDGF-A释放增多,从而使胎盘病变血管局部,产生PDGF-A等血管活性物质增多[7]。胎盘浅着床,局部缺血缺氧,缺氧激活原癌基因 sis促进PDGF-A过量表达,致使螺旋动脉在多种生长因子共同作用下呈现粥样硬化改变[6]。本研究表明,重度子痫前期胎盘细胞滋养细胞、蜕膜间质细胞和血管内皮细胞表达 PDGF-A的强度明显高于对照组,并且随着 HDCP的病情加重,PDGF-A表达增高,提示胎盘中 PDGF-A表达增高,可能阻碍了 HDCP胎盘母体面螺旋动脉血管重塑,导致病变血管强烈收缩,局部缺血缺氧,细胞毒性因子释放增多,形成恶性循环。

图1 正常妊娠组胎盘绒毛滋养细胞(HE×400)

图 2 轻度子痫前期组绒毛滋养细胞(HE×400)

图 3 重度子痫前期组绒毛滋养细胞(HE×400)

图 4 正常妊娠组胎盘绒毛PDGF-A的弱阳性表达(×400)

图9 重度子痫前期组胎盘蜕膜滋养细胞PDGF-A的强阳性表达(×400)

图5正常妊娠组胎盘蜕膜PDGF-A的弱阳性表达(×400)

图 6轻度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞 PDGFA的阳性表达(×400)

图 7轻度子痫前期组胎盘蜕膜滋养细胞 PDGF-A的阳性表达(×400)

图 8重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞 PDGF-A的强阳性表达(×400)

PDGF-A对蜕膜间质细胞、成纤维细胞具有强大趋化作用。Kimatrai等[8]研究发现,蜕膜的主要成分蜕膜间质细胞在结构及功能上都与具有收缩活性的成纤维细胞相似,PDGF-A不但能诱导成纤维细胞收缩也能诱导蜕膜间质细胞收缩。本研究发现,重度子痫前期胎盘绒毛中,细胞滋养细胞明显增生,滋养细胞下基底膜增厚,绒毛间质纤维蛋白沉积,合体细胞结节增多,胎盘蜕膜间质细胞呈大小不等块状、杆状,蜕膜血管内皮细胞纤维化,且在该处组织中 PDGF-A呈阳性表达,提示胎盘有不规则的纤维化,表明HDCP患者胎盘蜕膜PDGF-A表达的增高加速了蜕膜纤维化,促进蜕膜间质细胞收缩,从另一个方面加重了胎盘缺血缺氧。Mendoza等[9]研究表明,PDGF-A功能的表达具有剂量依赖性,低剂量能促进血管新生,高剂量促使毛细血管丰富的组织纤维化。胎盘是毛细血管丰富的组织,对PDGF-1的表达敏感。本研究结果显示正常晚孕组 PDGF-A表达水平低于轻度子痫前期组,但两者比较无显著差异,重度子痫前期组和轻度子痫前期组中 PDGF-A表达水平比较明显升高,提示随着PDGF-A水平升高,胎盘纤维化逐渐加重。

综上所述,PDGF-A在 HDCP的发生发展中的影响是多方面的,随着研究的不断深入,将对其作用机制有进一步的了解,为临床防治 HDCP提供更多的理论依据。

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5 刘棣临.全国妊高征及其并发症的诊断及处理学术研讨会纪要.中华妇产科杂志,1993,28：262-267.

6 Gurski Gurski MR,Gonzalez E,Brown EG,et al.Immunochem ical localization of platelet-derived growth factor in placenta and its possible role in pre-ec lampsia.J Investig Med,1999,47：128-133.

7 Parker SB,Dobrian AD,Wade SS,et al.AT(1)receptor inhibition does not reduce arterial wall hypertrophy or PDGF-A expression in renal hypertension.Am JPhysiol Heart Circ Physiol,2000,278：613-622.

8 Kimatrai M,Oliver C,Abadia-Molina AC,et al.Contractile activity of human decidual stromal cells.J Clin Endocrinol Metab,2003,88：844-849.

9 Mendoza AE,Young R,Orkin SH.Increased platelet-derived growth factor A-chain expression in human uterine smooth muscle cells during the physiologic hypertrophy of pregnancy.Proc Natl Acad Sci USA,1990,87：2177-2181.