绒毛染色体异常在胚胎停育中的细胞遗传学分析

田丽 王玉新 张石岭 郭文潮

胚胎停育是妇科的常见病之一。合子内在的缺陷是引起胚胎早死及胚胎停育的重要原因。本文对 69例胚胎停育绒毛进行染色体分析,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 69例绒毛来自因有自然流产先兆,前来河北省人民医院妇科门诊、三优门诊就诊以及在妇科病房住院的患者,均 B型超声(B超)检查提示：“胚胎停育”或“难免流产”,而行清宫术。流产胚胎在孕 37～80 d,孕妇年龄 20～40岁。

1.2 绒毛染色体的直接制备法 在无菌负压吸宫术中获得绒毛组织,选出优质绒毛组织约 10mg左右,直接放入预温 37℃低渗液(1%枸橼酸钠内含秋水仙素 0.1～0.4μg/ml)5 ml,混匀。低渗 30 min。预固定加甲醇冰醋酸 =(3∶1)1 ml,混匀5min。更换新鲜固定液室温固定 30m in。然后弃去固定液,顺管壁加入 60%冰醋酸 1m l,1～2m in,由管底部缓缓加入甲醇3ml,然后轻轻混匀,10 min(在固定 5min时用滴管把绒毛挑出)然后离心 5m in去上清液。在加入新鲜固定液 2～3滴,轻轻混匀,以冰片进行滴片,立即放入 60℃烤箱 16～24h或 37℃放置 72 h。自然令却后即可显带,核型分析 3个,计数 20个以上[1]。结构异常或嵌合体增加计数及分析。同时对 69例夫妇进行外周血染色体分析。

2 结果

在对 69例绒毛染色体进行核型分析中,正常核型 33例,异常核型 36例,异常率为 52.17%。绒毛染色体异常核型见表1。

3 讨论

孕早期胚胎染色体异常是胚胎停育最重要的原因之一。自然流产胚胎染色体畸变者约占流产胚胎的 42%[2]。国内外文献均有报道：自然流产中胚胎染色体异常约占 50%左右。本文结果显示胚胎染色体异常率 52.17%与报道相近。大约70%的人类胚胎都在着床前后死亡,染色体的非整倍体被认为是造成人类胚胎这种低着床率和早期丢失的一个重要原因。这种染色体数目畸变的主要发生源自双亲之一方的配子形成时或妊娠初期受精卵卵裂时出现染色体不分离,则导致该染色体增多或减少一条,亦即导致三体性或单体性。21-三体在活产儿中最常见,13-三体、18-三体也常可见,而其它常染色体三体的罕见大多导致流产。性染色体的三体在活产女婴中有见,性染色体的单体性不仅见子流产儿,也见于儿童或成人。在本文流产绒毛染色体分析中,常染色体三体是最多见的数目畸变,检出 32例,占异常核型的88.9%(32/36),它涉及 2、3、7、8、13、14、16、21、和 22号染色体。 性染色体单体数目畸变,本文 4例,占异常核型的 11.0%(4/36),45,x,这种畸变,除减数分裂时性染色体不分离,导致减少一条性染色休外,其中大约 3/4是父系性染色体丢失[3]。

表 1 绒毛染色体异常核型

三倍体在流产儿中也十分常见。本文 2例,占 5.6%(2/36),这种染色体的数目异常可源自新的突变,或源自双亲之一方配子形成中的异常有丝分裂或源自精母细胞或卵母细胞减数分裂中的异常,也可源自双受精等。这类染色体异常一般在孕 8周以前流产,曾有极少数纯三倍体的活婴报告[4]在流产绒毛染色体分析中,染色体结构异常本文检出 4例(常染色体结构异常 3例,性染色体结构异常 1例)。例 1：染色体核型：13-三体,双亲外周血染色体检查均正常,异常染色体来自新的突变。例 2：染色体核型：46;XY,-13,+der(13)t(5;13)(5q22;13p 13),双亲外周血染色体检查,父亲核型正常,母亲核型为 46,XX,t(5;13)(q22;p 13)。异常染色体来自母亲相互易位的染色体配子,在减速分裂中,通过同源染色休间的配对、交换和分离,形成 18种类型的配子,其中一种异常配子与正常配予结合,即形成为 5号染色体长臂部分,13号染色体短臂部分单体的衍生染色体胚胎导致流产。例 3：46,XY,inv(9)/46,inv(9),-7,+der(7)t(7;13)(7q35;I3q13),双亲外周血染色体检查,父亲核型正常,母亲核型为 46,XX,inv(9)的9号染色体臂间倒位,属于多态变异,它在人群中的发生率为1%[5]。多态现象通常没有不良的临床后果。但目前许多资料都倾向于多态现象与异常妊娠有关。9号染色体臂间倒位的遗传主要决定于重复的或缺失片断的长短及其所含基因的致死效应[6]。本文出现的嵌合型染色体异常,是否与之相关,尚待进一步研究。本文另一例 9号染色体臂间倒位者,其绒毛染色体核型为：47,XY,inv(9),+21。例 4：46,xy(y≥18),父亲核型为 46,XY(y≥18),母有二次胚胎停育史,之后,随访生育一正常女孩。Y染色体大小差异亦属于多态变异,大Y异染色质中 DNA过多重复在某些方面可能造成有丝分裂发生错误或影响基因调节及细胞分化紊乱[7],从而导致不良妊娠结局。染色体异常是导致胚胎停育的重要因素之一。进行染色体检查,对胚胎停育的病因、诊断及再次妊娠具有重要的指导意义。

1 朱俊真,左一鹏主编.产前实验室诊断.第 1版.石家庄：河北科学技术出版社,1992.31.

2 夏家辉,李麓芸主编.染色体病.第 1版.北京：科学出版社,1989.269.

3 夏家辉,李麓芸主编.染色体病.第 1版.北京：科学出版,1989.226.

4 周焕庚,夏家辉,李麓芸主编.人类染色体.第 1版.北京：科学出版社,1987.249.

5 夏家辉,李麓芸主编.染色体病.第 1版.北京：科学出版社,1989.273.

6 郭小宝,阮永铭,李文典,等.9号染色体臂间倒位的遗传效应分析.中华医学遗传学杂志 ,2006,23：365.

7 巫新春,曹云霞,从林,等.50对胚胎停育夫妇染色体分析.中华医学遗传学杂志,2006,23：112.