联合应用腹水DNA含量测定鉴别腹水性质的诊断价值

武金宝 慧 妍 孟宪梅 党 彤*

包头医学院第二附属医院内蒙古消化病研究所（014030）

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取包头医学院第二附属医院2008年11月至2009年11月入院进行治疗的腹水患者25例，其中男性患者16例，女性患者9例，患者年龄在18～81岁，中位年龄为56岁。其中恶性腹水患者12例，并且有6例患者胃癌腹膜转移，有3例患者为原发性肝癌，有2例结肠癌腹膜转移，有1例卵巢癌腹膜转移。剩下的为13例良性腹水患者，其中有6例为肝硬化腹水，有6例为结核性腹膜炎，有1例为细菌性腹膜炎。恶性腹水的诊断依据：腹水中发现恶性肿瘤原发灶，在腹水中找到恶性肿瘤细胞挥着呗腹腔镜证实有腹膜发生转移。良性腹水的诊断依据：在各项检查中均未发现有恶性肿瘤现象，并且患者自身有明确的病因。

1.2 方法

运用行腹腔穿刺技术在患者体内抽取腹水100～500mL，对其进行腹水DNA含量的测定，并且运用腹水细胞学、癌胚抗原以及糖抗原19-9等技术对其进行检查。运用流式细胞检测法对腹水DNA含量进行测定与鉴别。在仪器方面选择美国COULTER公司生产的EPTCS XLMCL流式细胞仪，以及DNA-PREP REAGENTS KIT试剂盒。每次检测前要将变异系数调制3%以内，操作时必须要使用健康人新鲜外周血淋巴细胞校准仪器进行调制。然后按照以下步骤进行操作，首先进行DNA荧光染色取经抗凝以及细胞悬液制备的腹水操作，然后进行离心，并且在离心操作完成后对脱落细胞进行收集，再进行PBS洗涤操作。操作时，将细胞数调节至每升的规定数据之间，然后取100μL的细胞悬液，并在里面加入打孔液以及固定液100μL，加入含有Rnase的PI 100μL，最后对其染色30min。

1.3 统计学处理

采用COULTER公司的MCYCLE软件进行分析，以JANET为参照标准，正常人淋巴细胞DNA含量为对照标准进行二倍体与异倍体的判断。

2 结 果

FCM检测出非整体为阳性，将其与CEA、CA19-9阳性率进行比较得出，腹水FCM的敏感性为91.7%，明显的高于其他方法。FCM的假阳性率为7.7%，CEA与CA19-9的假阳性率分别为23.1%和15.4%，经过统计学处理后发现，各种检测方法之间无显著性差异，而运用腹水细胞学技术进行检查时，虽然特异性为100%，但是敏感性却比较低，仅为41.7%。

3 讨 论

临床上对良、恶性腹水的鉴别诊断仍然是一个比较棘手的问题，检测者如果由于检测方法或自身因素而误把良性腹水诊断为恶性腹水，对患者来说，无疑会对他们的精神和肉体带来严重伤害。而检测者如果由于检测方法或自身因素误把恶性腹水诊断为良性腹水，则会延误患者的治疗时机，因此当前医学上急需解决的重要课题就是如何能提高腹水的诊断准确率。

DNA含量的增多是肿瘤无限制迅速增长的物质基础，而DNA的含量异常，且异倍体的存在则是恶性肿瘤的一个重要标志。本研究发现，腹水的细胞学检查、腹水CEA以及CA19-9测定等检测技术的阳性检出率明显低于FCM检测技术的阳性检出率。腹水DNA的敏感性指数低，仅为41.7%，虽然腹水DNA检测技术的特异性指数高达100%，但是在腹水细胞学不典型时，诊断仍然会比较困难。而运用流式细胞检测技术，敏感性指数为91.7%，明显增高。如果将CEA或者CA19-9检测技术并行联合，敏感性指数则分别为95.2%和95.8%。因此，除常规检测腹水脱落细胞、CEA、CA19-9等，在临床工作中，还应积极开展对腹水DNA含量的测定工作，对于恶性腹水可能性较大的患者更应该如此，以此来对诊断的准确率进行提高[1-3]。

虽然在对腹水DNA含量进行测定时，会有一些不可控的因素产生，如一过性标本制备不当及数据分析误差。但是对腹水DNA含量进行检测相比其他方法有很多优点，标本容易收集，无创性，其次标本也易处理，值得在临床推广使用。

[1] 汤钊猷.现代肿瘤学[M].上海:上海医科大学出版社,2003:124-125.

[2] 王强,吴清明.端粒酶对良、恶性腹水的鉴别诊断价值[J].中国实验诊断学,2009,13(6):45-46.

[3] 孔超美,陈平南.癌标志物联合检测鉴别良、恶性腹水的价值[J].江苏医药,1995,21(4):242-243.