不鼻息肉中金葡菌及其毒素B测定临床意义

梁星 刘涛

(1山西医科大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科; 2.山西医科大学第一医院耳颈外科 山西太原 030001)

乳胶凝集法金黄色葡萄球菌试剂盒(法国生物梅里埃公司);人金黄

鼻息肉是鼻腔和鼻窦粘膜的常见慢性疾病。成人发病率1%～2%,术后易复发,复发率高达15%[1]。目前比较公认的是:鼻息肉的发病是一个涉及感染,变态反应,植物神经功能失调,代谢紊乱,气流动力改变等多因素,多步骤的过程[2]。近来研究发现,金黄色葡萄球菌及其产物与鼻息肉的发病或演变有关,金黄色葡萄球菌是最为常见的致病菌之一,由它产生的超抗原中金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)最常见,耐热且产毒量大,是近来研究热点,已经有许多临床研究发现,慢性鼻窦炎患者鼻腔或上鼻窦分泌物中有较高含量的SEB,在鼻息肉合并有鼻窦炎的病例中含量更高。并且在血清中可测到抗SEB抗体。

1 临床资料

1.1 标本来源

标本取自患有鼻息肉和患有肥厚性鼻炎及其他的住院患者各50例。年龄16～65岁,男女不限,入院前1个月明确无抗生素使用史,入院后未作任何治疗前及时取材。

1.2 主要试剂仪器

色葡萄球菌肠毒素B抗体酶联免疫分析(ELISA)(RD公司生产);全自动微生物药敏分析仪VITEK2compact(法国生物梅里埃公司);湖南湘仪TDZ4-WS台式低速离心机(湖南凯达科学仪器有限公司生产),恒温震荡培养箱(上海博迅SPX-250B-D型)。

2 方法

2.1 细菌培养

用鼻拭子于待测对象的鼻后孔深处取鼻腔分泌物,放入无菌试管中30min内送细菌培养室。在需氧环境下用接种环将分泌物分别接种于血平皿,巧克力平皿,麦康凯平皿中,33～35℃孵育24h。培养出的细菌菌落由全自动微生物分析仪VITEK2compact及乳胶凝集法金黄色葡萄球菌鉴定试剂盒进行鉴定。

2.2 ELISA测血清

设置空白对照孔和待测样品孔,之后将SEB标准品稀释至所需要浓度,加样于酶标板孔底部混匀,封板膜封板后37℃温育30m in。取出用稀释后的洗涤液洗五次,拍干。加入SEB酶标试剂(空白孔不加),置封板膜封板后37℃温育30min,再洗5次拍干。加入显色剂避光37℃显色15m in。以空白孔调零,450纳米波长处检测和采集数据。

3 结果及统计学分析

3.1 细菌培养结果及分析

50例鼻息肉标本经细菌培养后,21例培养出金葡菌菌落。对照组经细菌培养后,8例培养出金葡菌菌落。χ2检验得：χ2=8.207>χ20.05,1=3.84,P＜0.05。2组检出率不同,有统计学意义。

3.2 SEB的ELISA检测结果及分析

SEB抗体滴度测定采用t检验。经SPSS V 13.0软件分析,sig>5,得两样本服从正态分布,(t=4.377),查界值表得(P<0.05)(α=0.05)。两样本的差异有统计学意义。

4 讨论

鼻息肉的发病机制尚不明确,多年来认为与变态反应和感染关系密切,目前倾向于多因素的病因学,存在金黄色葡萄球菌超抗原假说和真菌变态反应假说[2]。文献报道,无论是否合并过敏性鼻炎的鼻息肉,感染因素都参与了致病。越来越多的研究发现金葡菌是呼吸道的常见致病菌之一,金葡菌的致病性一方面与其凝固酶密切相关,许多疾病是由于金葡菌直接侵袭所致,另一方面金葡菌还包括许多细胞抗原并可产生多种具有超抗原特性的毒素[3～4]。金葡菌肠毒素(staphylococcus aureus enterotoxins,SAEs)包括(SEA～SEP)可同时影响到免疫调节细胞和促炎细胞的活性,其中SEB最常见,耐热且产毒量大毒力强,属于超抗原,有强大的免疫调节功能,可直接激活5%～10%得T细胞增殖并释放细胞因子和炎性因子,加重局部炎症反应,因此SEB在慢性炎症性疾病的发病机制中起到极其重要的作用。

许多临床研究发现慢性鼻窦炎的鼻窦分泌物中有较高含量的SEB,在并发鼻息肉的病例更高,并在血清中可检测到抗SEB抗体[5]。国外学者对慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉(CRS/NP)患者鼻息肉表面分泌物进行研究,发现超半数患者鼻分泌物中有产生超抗原的金葡菌,并分离出SEB,从而认为鼻粘膜中最常见的细菌是金葡菌,通过产生毒素导致鼻腔侧壁粘膜的损伤[6]。对慢性鼻-鼻窦炎和鼻息肉的中鼻道拭子研究发现,与对照组(无鼻窦疾病的各体)相比,鼻息肉患者中鼻道寄居的凝固酶阳性的金葡菌菌株更常见。与对照组粘膜相比,鼻息肉组的免疫组化染色也显示上皮和上皮下纤维结合素表达增加。因此,鼻息肉中特异性炎症过程可以促进金葡菌定居上皮。

本实验通过收集鼻息肉和肥厚性鼻炎患者的分泌物进行培养,结果鼻息肉患者超半数培养出金葡菌,而同时进行的肥厚性鼻炎患者的检出率则相对小许多;以血清检测SEB抗体结果也发现,鼻息肉患者检出SEB抗体滴度的平均值要明显高于同时同法检测的肥厚性鼻炎患者。

基于以上理论和实验推测,鼻息肉尽管是多因素导致的常见病,高复发病。然而有相当一部分鼻息肉病人是以‘金葡菌’感染为‘扳机点’导致的‘多米诺骨牌’效应的最终结局。而目前对于鼻息肉的治疗临床上多用的是鼻内镜加抗生素的治疗,这相当程度上是对已经形成息肉病的事后补救。研究报道,由金葡菌产生超抗原SEB毒素也参与导致了许多免疫性疾病,如：溃疡性结肠炎等。由此提示,针对清除超抗原毒素的治疗,以截断和阻止超抗原引起的过度免疫和组织损伤,以期能够对息肉病的预防以及术后复发的预防提供一条新的治疗手段。这还有待今后无数次实验和不断的努力来证明。

[1]Moneret-Vautrin AD.Gastrointestinal allergy in adults [J].Eur J Gastroentero l Hepato l,2005,17:1293～1297.

[2]Cho SH,Strickland I,Boguniew icz M,et al.Fibronectin and fibrinogen contribute to the enhanced binding of Staphylococcus aureus to atopic skin [J].J A llergy Clin Immunol,2001,108(2): 269～274.

[3]BERNSTEIN J M,KANSAL R.Superanigen hypothesis for the early development.Of chronic hyperplastic sinusitis with massive nasal polyposis[J].Curr,Opin Otolaryngol Head Neck Surg,2005,13(1): 39～44.

[4]BalabanN,RasoolyA.Staphylococcal enterotoxins [J].Int J Food Microbiol,2000,61:1～10.

[5]Yarwood JM,McCorm ick JK,Schlievert PM.Identification of a novel two-component regulatory system that acts in global regulation of virulence factors of S.aureus[J].J Bacteriol,2001,183: 1113～1123.

[6]Suh YJ,Yoon SH,Sam pson AP,et at.Specific immunoglobulin E for staphy lococcal enterotoxins in nasal polyps from patients with aspirin-intolerant asthma[J].Clin Exp A llergy,2004,34:270-1275.

[7]Okano M,Hattori H,Yoshino T.et al.Nasal exposure to staphylococcal enterotoxins enhances the deve.lopment of allergic rhinitis in m ice[J].Clin Exp A llergy,2005 AApr,35(4):506～514.