IGFBP-rP1在原发性肝细胞肝癌中的表达及意义

吕宏娜 王要军

(1辽宁医学院济南军区总医院研究生培养基地;2中国人民解放军济南军区总医院消化科,济南250031)

IGFBP-rP1是目前生长抑制因子中的研究热点,参与细胞衰老、程序性凋亡等多种生理过程,因此IGFBP-rP1可能是潜在的肿瘤抑制因子[1]。小鼠HCC能够表达IGFBP-rP1[2],人类组织的研究尚未见报道。

材料和方法

1.标 本

收集2003年-2008年济南军区总医院病理科HBsAg阳性的 HCC石蜡标本43例,32例癌旁肝组织 (距癌边缘组织>1.5cm)和9例 HBsAg阴性的正常肝组织。术前均未行任何抗癌治疗,具有完整临床及病理资料。

2.试 剂

浓缩型羊抗人 IGFBP-rP1多克隆抗体,购自美国Santa Cruz公司。二步法山羊免疫组化检测试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

3.方 法

石蜡标本常规切片进行 IGFBP-rP1免疫组化二步法染色:切片脱蜡至水,高温修复,阻断内源性过氧化物酶,滴加羊抗人 IGFBP-rP1抗体 (1:1000)4℃孵育过夜,滴加 Goat Enhancer二抗孵育,滴加poly-HRP anti-Goat IgG,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封片。用PBS替代抗 IGFBP-rP1抗体作阴性对照。

4.结 果判定

IGFBP-rP1阳性判定参照文献[3]稍做改进后采用半定量积分法,以细胞浆染成黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞,每张切片根据阳性细胞染色强度及细胞百分数的多少进行分级:染色强度0分 (不着色),1分 (弱),2分 (中),3分 (强),细胞数记分:<5%为0分,5%-25%为1分,26%-50%为2分,51%-75%为3分,>75%为4分;组织化学积分 (两记分的乘积):≤1为阴性,>1为阳性 (2-4分为弱阳性,6-8分为阳性,9-12分为强阳性)。

5.统 计学分析

用SPSS l3.0软件包作统计学处理。IGFBP-rP1在 HCC组织、癌旁组织、正常肝组织的表达情况的差异用 Kruskal-Wallis H检验,在 HCC组织中与临床病理因素的关系用Pearson Chi-Square及Fisher’s Exact Test检验,与 HCC的分化程度的相关性用Spearman秩相关分析;P<0.05有统计学意义。

表1 IGFBP-rP1在 HCC的表达与临床病理因素的关系Table 1 The relationship of IGFBP-rP1 expression and cliniopathological factors in HCC

结 果

1.IGFBP-rP1在 HCC、癌旁组织和正常肝组织中的表达

43例肝癌组织IGFBP-rP1表达阳性22例,21例表达阴性 (图1),其中强阳性0例 (0%),阳性12例 (27.9%),弱阳性10例 (23.3%),阴性21例 (48.8%);32例癌旁肝组织IGFBP-rP1表达阳性31例 (图2),其中强阳性5例 (15.6%),阳性18例 (56.3%),弱阳性6例 (18.8%),阴性2例(6.3%),9例正常肝组织 IGFBP-rP1均表达阳性(图3),其中强阳性 3例 (33.3%),阳性 2例(22.2%),弱阳性4例 (44.4%),阴性0例(0%),IGFBP-rP1在HCC的表达显著低于癌旁肝组织 (P<0.01)及正常肝组织 (P<0.01),但正常肝组织和癌旁肝组织IGFBP-rP1的表达无明显差异 (P>0.05)。

2.IGFBP-rP1表达与肿瘤生物学行为的关系

在HCC组织中IGFBP-rP1的表达与性别、年龄、肝硬化有无、血清甲胎蛋白水平、肝功能Child分级、肿瘤数目、肿瘤直径、肝内转移、门静脉癌栓及临床分期无关 (P>0.05),与 Edmondson分级、包膜完整性有关。在 Edmondson分级中Ⅲ-Ⅳ级和包膜不完整的 HCC组织中 IGFBP-rP1的表达阳性率明显低于 Ⅰ-Ⅱ级 (P<0.05)和包膜完整 (P<0.05),差异有统计学意义 (表1)。IGFBP-rP1表达与分化程度的相关性分析显示两者呈正相关 (r=0.4000,P<0.01)

讨 论

IGFBP-rP1是第一个低亲和力 IGFBP家族成员,又名 mac25、肿瘤源性粘附分子 (tumor-derived adhesion factor,TAF)、前列环素刺激因子(prostacyclin-stimulating factor,PSF)、胰岛素样生长因子结合蛋白 7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7),除与其他 IGFBP相同的结合、携带、保护、转运IGFs,影响IGF受体下游的信号转导功能,IGFBP-rP1还是一种生长抑制因子,参与细胞衰老与诱导细胞程序性凋亡等多种生理过程[3]。目前认为细胞衰老和肿瘤抑制之间有紧密的联系,肿瘤抑制基因可能通过促进细胞衰老起作用[4]。因此 IGFBP-rP1可能是潜在的肿瘤抑制基因。有研究[5-6]认为肿瘤中 IGFBP-rP1存在DNA超甲基化现象,使IGFBP-rP1基因静默,从而影响转录过程,使 IGFBP-rP1表达减少,并且甲基化的程度与 IGFBP-rP1的表达呈负相关。Tamura K[7]认为IGFBP-rP1能够阻止血管上皮细胞生长因子诱导的血管形成从而抑制肿瘤的血管形成。

虽然IGFBP-rP1在大部分体外培养的肿瘤细胞中表达减低,并且转染到肿瘤细胞株上,细胞的生长减慢[8-9],但是在不同肿瘤组织中 IGFBP-rP1的表达报道却相差较大[2,10]。因此我们用免疫组化检测人 HCC中 IGFBP-rP1的表达,发现 IGFBP-rP1在HCC中的表达显著低于癌旁肝组织及正常肝组织,并且 IGFBP-rP1低表达或无表达与肿瘤低分化及包膜完整性破坏等恶性生物学行为有关,与 Ye F[3]在人大肠癌组织中对 IGFBP-rP1表达的研究相一致。IGFBP-rP1表达越低,HCC分化程度越低,且包膜不完整 (P<0.01),其机制可能是IGFBP-rP1表达的下调减弱了其抑癌功能,从而导致HCC的进展。因此我们认为IGFBP-rP1能够抑制 HCC的部分恶性生物学行为,IGFBP-rP1表达下调可促进HCC的进展。

总之,IGFBP-rP1在肝细胞癌的进展中起重要作用,能否通过控制IGFBP-rP1表达防治 HCC尚需进一步研究。

〔1〕Ma Y,Lu B,Ruan W,et al.Tumor suppressor gene insulin-like growth factor binding protein-related protein 1(IGFBP-rP1)induces senescence-like growth arrest in colorectal cancer cells.Exp Mol Pathol,2008,85(2):141-145

〔2〕Komatsu S,Okazaki Y,Tateno M,et al.Methylation and Downregulated Expression ofmac25/Insulin-like Growth Factor Binding Protein-7 Is Associated with Liver Tumorigenesis in SV40T/t Antigen Transgenic Mice,Screened by Restriction Landmark Genomic Scanning for Methylation(RL GS-M).Biochem Biophys ResCommun,2000,267(1):109-117

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〔4〕Wajapeyee N,Serra RW,Zhu X,et al.Oncogenic BRAF Induces Senescence and Apoptosis through Pathways Mediated by the Secreted Protein IGFBP7.Cell,2008,132(3):363-374

〔5〕Ruan WJ,Lin J,Xu EP,et al.IGFBP7 plays a potential tumor suppressor role against colorectal carcinogenesis with its expression associated with DNA hypomethylation of exon 1＊.J Zhejiang Univ Sci B,2006,7(11):929-932

〔6〕Lin J,Lai M,Huang Q,et al.Methylation patterns of IGFBP7 in colon cancer cell lines are associated with levels of gene expression.J Pathol,2007,212(1):83-90

〔7〕Tamura K,Hashimoto K,Suzuki K,et al.Insulin-like growth factor binding protein-7(IGFBP7)blocks vascu-lar endothelial cell growth factor(VEGF)-induced angiogenesis in human vascular endothelial cells. Eur J Pharmacol,2009,610(1-3):61-67

〔8〕Ruan W,Xu E,Xu F,et al.IGFBP7 Plays a Potential Tumor Suppressor Role in Colorectal Carcinogenesis.Cancer Biol Ther,2007,6(3):354-359

〔9〕Lin J,Lai M,Huang Q,et al.Reactivation of IGFBP7 by DNA demethylation inhibits human colon cancer cell growth in vitro.Cancer Biol Ther,2008,7(12):1896-1900

〔10〕Bièche I,Lerebours F,Tozlu S,et al.Molecular profiling of inflammatory breast cancer:identification of a poor-prognosis gene expression signature.Clin Cancer Res,2004,10(20):6789-6795

图 版 说 明

图1 IGFBP-rP1在 HCC中无表达。PV6003二步法 ×400

图2 IGFBP-rP1在癌旁肝组织肝细胞胞质呈片状表达。PV6003二步法 ×400

图3 IGFBP-rP1在正常肝细胞胞质呈片状表达。PV6003二步法 ×400

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Negative expression of IGFBP-rP1 in HCCs.PV6003 method×400

Fig2 The expression of IGFBP-rP1 in the cytoplasm of hepatocytes in liver tissues beside HCC,the positive cells distributed with patchy.PV6003 method×400

Fig3 The expression of IGFBP-rP1 in the cytoplasm of hepatocytes in normal liver tissues.,the positive cells distributed with patchy.PV6003 method×400