HPLC测定小儿消积止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量

康四和， 周 锐， 聂 晶

(湖北省食品药品监督检验研究院，湖北武汉430064)

小儿消积止咳口服液由山楂、槟榔、枳实、枇杷叶等药味组成，具有清热理肺、消积止咳等作用，为山东鲁南厚普制药有限公司生产小儿用药，原标准采用HPLC法测定枳实中辛弗林的含量。据文献［1］报道，橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷等黄酮类成分是枳实中主要的活性成分，能抑制胃肠平滑肌收缩，缓解胃肠积滞。对枳实中橙皮苷、柚皮苷等成分研究文献有报道［2-4］，但同时测定本品种中多种黄酮类成分含量，文献尚未见报道。本实验建立了HPLC法测定小儿消积止咳口服液中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量。同时为了评价本品种不同批次样品质量差异，本实验对多批样品测定结果进行了比较，具体实验方法如下:

1 仪器与试药

戴安Ultimate-3000高效液相色谱仪;大连依利特Hypersil ODS2液相色谱柱(200 mm×4.6mm;5μm);柚皮苷、橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:柚皮苷 110722-200610，橙皮苷110721-200613)，新橙皮苷对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号:091225);乙腈为色谱纯，水为重蒸水;其他试剂为分析纯;小儿消积止咳口服液(山东鲁南厚普药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:大连依利特Hypersil ODS2色谱柱(200 mm×4.6 mm;5 μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80);检测波长:λ=283 nm;流速:1 mL/min;柱温:35℃。

2.2 测定波长的选择 取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解，在紫外检测仪上于200～600 nm波长范围内扫描，结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分别在283 nm、284 nm、284 nm波长处有最大吸收，依据参考文献［5］，选择 λ283 nm作为测定波长。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.4 mg、橙皮苷0.1 mg、新橙皮苷0.4 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品，精密吸取1 mL，加甲醇至10 mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 阴性干扰试验 取不含枳实的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定，结果阴性样品在柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰相应的位置上无吸收峰，表明其他药对测定无干扰。见图1。

图1 对照品、样品和阴性样品HPLC色谱图

2.5 线性关系考察 精密称取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含柚皮苷0.421 mg、橙皮苷0.102 2 mg、新橙皮苷0.440 mg的混合溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取1、3、5、8、10、20 μL，注入高效液相仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程:柚皮苷 Y=235.963 8X+4.603 7，r=0.999 0。橙皮苷 Y=321.514 1X+0.099 0，r=0.999 9。新橙皮苷 Y=272.508 4X+2.889 8，r=0.999 7。

结果表明柚皮苷对照品在0.042 1～0.842 μg、橙皮苷对照品在0.010 22～0.204 4 μg、新橙皮苷对照品在0.044 0～0.880 μg范围内呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取线性关系考察项下同一混合对照品溶液5 μL，重复进样6次，测定峰面积，结果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面积积分值RSD分别为0.52%、1.07%、0.27%，具有较好的精密度。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(批号09103025)，分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 各测定1次，结果柚皮苷RSD=1.00%，橙皮苷RSD=0.78%，新橙皮苷RSD=1.15%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.8 重复性试验 分别精密吸取同一批号(批号09103025)的样品6份，每份1 mL，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，结果样品中柚皮苷的平均含量为4.094 mg/mL，RSD=0.71%;橙皮苷的平均含量为0.680 mg/mL，RSD=0.67%;新橙皮苷的平均含量为4.194 mg/mL，RSD=0.76%。表明本法重复性良好。

2.9 回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号09103025)6份，每份0.5 mL，分别精密加入柚皮苷对照品(0.616 8 mg/mL)3 mL，橙皮苷对照品(0.157 0 mg/mL)2 mL，新橙皮苷对照品(0.754 4 mg/mL)3 mL，精密加入甲醇至10 mL，摇匀，依法测定，计算回收率，结果见表1～3。由表可知，本法具有较好的回收率。

2.10 样品含量测定 取样品，精密吸取1 mL，按2.3.2项制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，按2.1项色谱条件进行测定，测定结果见表4。

3 讨论

3.1 化学成分是治疗疾病的物质基础，本实验对该品种20批样品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷3种成分的含量进行了测定，结果柚皮苷、新橙皮苷含量相对较高，平均分别为4.882 mg/mL、4.843 mg/mL，橙皮苷含量较低，平均为0.656 mg/mL。但部分批次含量差别较大，有的甚至超出均值一倍以上，说明本品种在药材来源、生产工艺等方面有待加强控制，以保证产品质量的稳定。

表1 柚皮苷回收率试验结果

表2 橙皮苷回收率试验结果

表3 新橙皮苷回收率试验结果

表4 样品含量测定结果(n=3)

3.2 本实验曾采用甲醇—水系统作为流动相，结果样品分离效果不太好。后改用乙腈—水—磷酸系统，能显著的改善峰形，3种成分在同一色谱条件下较好地得到了分离，经对流动相比例进行调整，考虑到分离效果及出峰时间因素，最后确定流动相为乙腈—0.1%磷酸溶液(20∶80)。

3.3 小儿消积止咳口服液原标准含量测定方法为采用HPLC法测定枳实中辛弗林的含量，该方法操作较为复杂，测定成分单一，本实验建立了能够同时测定样品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷3种成分的含量测定方法，可以对本品种质量进行更全面的评价，体现了一法多测的分析理念。经研究柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷在所选用条件下分离较好，检测灵敏度高，测定专属性强，阴性无干扰，可以更好地控制和评价该品种的质量。

［1］张尚英.枳实、枳壳类药材质量分析的新进展［J］.海峡药学，2004，16(5):13-14.

［2］李秀玲，李 龙，肖红斌，等.反相高效液相法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮甙的含量［J］.色谱，2002，20(6):585-589.

［3］谢贞建，焦士蓉，李 恺，等.RP-HPLC法测定不同产地枳实中的柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷［J］.西华大学学报:自然科学版，2009，28(2):65-67.

［4］郭丽红，郑国钧，苗爱东，等.高效液相色谱法测定解表清肺丸中柚皮苷、橙皮苷、黄芩苷的含量［J］.药物分析杂志，2009，29(9):1493-1495.

［5］中国药典［S］.一部.2010:229.