5首解酒方对小鼠醉酒模型解酒效应的比较研究

杨 柱， 田维毅， 王文佳， 韩 洁

(贵阳中医学院，贵州贵阳550002)

过度饮酒已成为损害健康的重要因素之一，酒精对机体损害大致可分为急性酒精中毒(即醉酒)和慢性酒精损害。目前，对解酒制品的开发受到广泛重视，包括主要针对急性酒精中毒的醒酒防醉制品和主要针对慢性酒精损害的保肝等制品。醒酒防醉制品研发具有极其重要的社会适用价值，祖国医药在这方面积淀了丰富的理论基础和治法方药，具有较好的临床应用效果，但缺乏统一评价［1］。为了深入探索祖国医药防醉醒酒方剂的效果及其客观依据，本文就葛花解酲汤等5首常用经方验方醒酒、防醉、干预血乙醇含量等效应进行同等实验条件下的对比研究，为进一步研发和临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 清洁级昆明小鼠，♀♂各半，体重18～22 g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供［SCXK(沪)2007-0005］。

1.2 主要仪器 AB135-S型梅特勒托利多电子天平(梅特勒托利多上海公司);岛津GC-2010气相色谱仪(日本岛津公司)。

1.3 试剂与药材 56%(V/V)红星二锅头白酒(批号081215，北京红星股份有限公司);根据前期研究确定的用酒量(另文发表)，按0.15 mL/10 g体重灌胃，动物可明显致醉且无大量死亡。实验方剂包括葛花解酲汤(元·李东垣《脾胃论》)、藿香正气散(宋﹒太医局《太平惠民和剂局方》)、石膏汤(解酒验方:石膏12 g、葛根10 g、干姜6 g)、葛根散(金·张子和《儒门事亲》)和冲和汤(宋·杨倓《杨氏家藏方》)。组方药材购自上海同仁堂大药房，按原方比例制备水煎剂(生药浓度为1 g/mL)备用。根据动物药理实验用药折算方法，根据成人常规用药量，实验中统一按10 g生药/kg小鼠体重设计给药中剂量，其2倍量为大剂量、1/2量为小剂量。实验前用蒸馏水按0.25 mL(药液)/10 g(小鼠体重)给药体积调整水煎剂浓度。

1.4 翻正实验 参照文献方法［2］。实验小鼠按♀♂各半随机分组，每组10只，实验前禁食12 h。各给药组用相应水煎剂按0.25 mL/10 g体重灌服，另设对照组代以等体积蒸馏水。给药30 min后，各组均用56%(V/V)红星二锅头按0.15 mL/10 g体重灌服，随即记录各小鼠翻正反应消失时间(耐受时间)和消失持续时间。

1.5 醉酒睡眠实验 参照文献方法［3］。动物分组与处置方法同上，灌服白酒后随即观察小鼠活动情况。以小白鼠爬行不稳、后腹拖地、闭眼懒动为睡眠(醉酒)指标，以行动自如、四肢灵活、精神恢复为苏醒(醒酒)指标，记录小鼠入睡时间和苏醒时间，算出睡眠耐受时间(min)(从灌酒至入睡的时间)及持续时间(min)(从入睡到苏醒的时间)。

1.6 攀附实验 参照文献方法［3］。动物分组与处置方法同上，灌服白酒后随即将小鼠放在垂直的金属网上，记录各小鼠在网上的攀附时间(s)。

1.7 全血乙醇含量测定 参照文献方法［4］。动物分组与处置方法同上，分别于灌服白酒 30、60、90、120、150、180 min后，随机抽取各组小鼠8只，经眼球取血0.1 mL抗凝，内标法检测全血乙醇含量。检测方法参照《中华人民共和国药典》(2005版)乙醇量测定法。

1.8 统计分析各组计量资料以¯x±s表示，数据处理采用spss 13.0数据统计软件进行差异性比较，以P＜0.05及P＜0.01为显著性差异。

2 结果

由于本研究是对各方解酒效果的对比研究，所以在比较各项指标时，以各复方最佳效果浓度组作为参比组，有关实验结果对比如下。

2.1 翻正实验

小鼠翻正反应实验结果见表1。各方最佳效应组翻正反应消失时间(耐受时间)(min):葛根散＞石膏汤＞葛花解酲汤＞冲和汤＞藿香正气散，且葛根散与其他参试方剂比较，具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);葛根散、石膏汤、葛花解酲汤与对照组比较，具有显著性差异(P＜0.01);冲和汤、藿香正气散与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)。各方最佳效果组翻正反应消失持续时间(min):石膏汤＜葛根散＜葛花解酲汤＜冲和汤＜藿香正气散，石膏汤与葛根散比较无显著性差异(P＞0.05)、与其他参试方剂比较有显著性差异(P＜0.01);石膏汤、葛根散、葛花解酲汤与对照组比较，具有显著性差异(P＜0.01);冲和汤、藿香正气散与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)。

2.2 醉酒睡眠实验

小鼠醉酒睡眠实验结果见表1。各方最佳效应组醉酒睡眠潜伏时间(min):葛根散＞藿香正气散＞石膏汤＞葛花解酲汤＞冲和汤，葛根散与藿香正气散、石膏汤比较无显著性差异(P＞0.05)，葛根散与葛花解酲汤、冲和汤比较具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);各方与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。各方最佳效应组醉酒睡眠持续时间(min):石膏汤＜藿香正气散＜葛根散＜葛花解酲汤＜冲和汤，石膏汤与藿香正气散、葛根散比较无显著性差异(P＞0.05)，石膏汤与葛花解酲汤、冲和汤比较具有显著性差异(P＜0.01);各方与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。

2.3 攀附实验

小鼠攀附实验结果见表1。各方最佳效应组攀附时间(s):葛根散＞石膏汤＞葛花解酲汤＞冲和汤＞藿香正气散，葛根散与其他各方比较具有显著性差异(P＜0.01);各方与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。

2.4 血乙醇含量检测

小鼠全血乙醇含量检测结果见表2。各方实验动物均用其该时段血乙醇浓度最低组参与比较。对照组灌服白酒30 min后，其血乙醇即有明显升高，60～90 min达到高峰，之后开始下降。与对照组相比:葛根散、石膏汤最佳效应组实验动物各时段血乙醇浓度降低幅度显著(P＜0.01)，藿香正气散、冲和汤降低幅度不显著(P＞0.05)，葛花解酲汤不同时段降低幅度大小不等(P＞0.05或P＜0.05或P＜0.01)。除120 min时以石膏汤检测结果为最低外，其余时段均以葛根散为最低。与葛根散相比:各时段与其检测结果最接近者均为石膏汤(P＞0.05)，与其检测结果差异最大的是藿香正气散、冲和汤(P＜0.05或P＜0.01)，葛花解酲汤在30～90 min时段与之无显著差异(P＞0.05)、在120～180 min时段则差异显著(P＜0.01)。在180 min时段，藿香正气散、冲和汤各组实验动物血乙醇检测结果高于对照组，但差异无显著性(P＞0.05)。

表1 实验小鼠翻正反应/醉酒睡眠时间/攀附时间观察结果(±s)

表1 实验小鼠翻正反应/醉酒睡眠时间/攀附时间观察结果(±s)

注:表中n为除去实验过程中死亡和未醉动物之后纳入统计的数量;大剂量组为20 g生药/kg小鼠体重，中剂量组为10 g生药/kg小鼠体重，小剂量组为5 g生药/kg小鼠体重。▲本指标最佳效果方剂;△各方最佳效果浓度;与本指标效果最好方剂比较，﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01;与对照组比较，﹟P＜0.05，﹟﹟P＜0.01。

组别 翻正实验消失时间/min 消失持续时间/min醉酒睡眠实验睡眠潜伏时间/min 睡眠持续时间/min攀附实验攀附时间/s对照组 24.50±4.30(9) 202.11±10.35(9) 22.87±3.61(9) 235.90±11.68(9) 211.60±45.10(9)葛花解酲汤大剂量组 30.63±5.10(9) 165.50±8.35(9) 26.30±3.92(9) 195.28±9.63(9) 365.33±40.20(8)中剂量组 37.82±4.60(9)△*## 160.33±6.77(9)△**## 28.73±4.19(10) 197.19±10.07(10) 415.40±31.23(10)△**##小剂量组 32.22±4.14(10) 176.15±9.62(10) 33.40±3.91(10)△*## 176.50±9.32(10)△**## 380.70±47.24(10)藿香正气散大剂量组 25.29±3.76(9)△** 198.50±9.49(9)△** 38.10±5.79(9) 182.51±10.54(9) 291.33±41.85(8)中剂量组 24.90±4.18(10) 210.34±11.12(10) 38.72±4.14(9)△## 137.97±11.85(9)△## 294.36±36.72(10)△**#小剂量组 25.10±4.23(10) 199.75±10.71(10) 29.39±4.61(10) 195.50±9.86(10) 237.82±44.51(10)石膏汤大剂量组 37.16±3.20(10) 122.44±12.64(10) 37.91±5.04(10)△## 134.59±9.87(10)▲△## 525.90±31.88(9)△**##中剂量组 38.05±4.16(10)△*## 100.31±11.27(10)▲△## 33.47±4.11(9) 184.10±9.64(9) 475.61±42.58(9)小剂量组 35.20±4.03(9) 138.73±11.67(9) 31.50±4.08(9) 191.38±10.83(9) 346.69±45.11(10)葛根散大剂量组 46.55±4.21(8)▲△## 109.41±10.33(8)△## 40.99±4.18(9)▲△## 140.27±9.35(9)△## 549.91±47.82(9)中剂量组 43.30±4.81(9) 122.14±9.89(9) 38.68±3.51(10) 185.73±11.60(10) 611.45±41.63(10)▲△##小剂量组 33.86±3.10(10) 156.50±10.22(10) 34.30±4.91(8) 195.48±9.92(8) 471.29±42.11(8)冲和汤大剂量组 27.20±5.14(10) 188.69±9.21(10)△** 24.30±4.03(9) 221.40±9.88(9) 313.77±46.14(9)△**##中剂量组 26.20±4.70(9) 189.83±11.26(9) 28.73±4.69(10)△**# 216.44±9.92(10)△**# 297.38±38.73(10)小剂量组 28.00±5.23(8)△** 193.36±9.75(8) 27.61±4.77(9) 217.84±10.29(9) 264.86±43.63(10)

表2 实验小鼠血乙醇含量检测结果(μL/mL)(±s)

注:各组各时段随机抽取实验小鼠8只进行检测(死亡小鼠不检测)，最后时段不足8只则按实数计算;大剂量组为20 g生药/kg小鼠体重，中剂量组为10 g生药/kg小鼠体重，小剂量组为5 g生药/kg小鼠体重。▲本时段血乙醇含量最低的方剂;△各方本时段血乙醇含量最低组;与本时间段血乙醇含量最低的方剂比较，*P＜0.05，**P＜0.01;与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

组别(动物总数)小鼠血乙醇含量/(μL/mL)30 min 60 min 90 min 120 min 150 min 180 min对照组(52) 0.92±0.13 1.71±0.16 1.67±0.15 1.52±0.15 1.29±0.10 0.96±0.11葛花解酲汤大剂量组(52) 0.70±0.11△# 1.34±0.16△## 1.42±0.13 1.27±0.11△**## 1.15±0.11△** 0.77±0.09(7)△**#中剂量组(52) 0.74±0.13 1.38±0.14 1.41±0.10△## 1.32±0.14 1.16±0.13 0.89±0.10小剂量组(52) 0.82±0.10 1.57±0.14 1.56±0.11 1.38±0.12 1.19±0.09 0.91±0.12藿香正气散大剂量组(52) 0.89±0.14 1.56±0.11△* 1.52±0.14 1.39±0.10 1.15±0.13△** 1.04±0.12△**中剂量组(52) 0.84±0.11△* 1.64±0.14 1.51±0.12△* 1.37±0.12△** 1.19±0.11 1.12±0.10小剂量组(52) 0.87±0.13 1.67±0.10 1.59±0.14 1.44±0.15 1.20±0.11 1.17±0.14(7)石膏汤大剂量组(52) 0.69±0.10△## 1.29±0.14△## 1.33±0.10△## 0.71±0.14▲△## 0.68±0.09△## 0.62±0.10△##中剂量组(52) 0.73±0.12 1.36±0.12 1.38±0.11 0.88±0.11 0.82±0.11 0.78±0.12小剂量组(52) 0.81±0.11 1.45±0.10 1.51±0.13 0.99±0.15 0.92±0.14 0.82±0.08葛根散大剂量(52) 0.62±0.13▲△## 1.21±0.15▲△## 1.31±0.11▲△## 0.74±0.10△## 0.59±0.09▲△## 0.48±0.10▲△##中剂量(52) 0.69±0.11 1.35±0.11 1.32±0.14 0.77±0.10 0.69±0.10 0.59±0.08小剂量(52) 0.73±0.11 1.39±0.14 1.43±0.10 0.85±0.14 0.74±0.09 0.68±0.10冲和汤大剂量(52) 0.94±0.15 1.60±0.12 1.57±0.14 1.41±0.15△** 1.24±0.13 1.15±0.14(7)中剂量(52) 0.87±0.14△** 1.58±0.14△** 1.57±0.12△** 1.42±0.10 1.19±0.11△** 1.08±0.10△**小剂量(52) 0.88±0.11 1.67±0.11 1.60±0.15 1.46±0.11 1.26±0.14 1.19±0.12

3 讨论

醉酒大致可分为三个阶段，即兴奋期、共济失调期、昏睡期。现代研究醒酒防醉方药多从协调运动、醒神、控制血乙醇等方面入手，实验方法最常见的有翻正实验、醉酒睡眠实验(又称防醉实验)、攀附实验和血中乙醇含量检测等。本文探讨了祖国医药中葛花解酲汤等5首常用醒酒防醉方剂在同一实验条件的解酒效应，比较了上述指标的效应差异。

翻正实验结果显示(见表1)，与对照组比较，葛花解酲汤中剂量组、石膏汤中剂量组和葛根散大剂量组实验小鼠的翻正反应消失时间和消失持续时间均得到显著改善(P＜0.01);其中改善效果最明显的方剂分别为葛根散和石膏汤。

醉酒睡眠实验结果显示(见表1)，与对照组比较，葛花解酲汤小剂量组、藿香正气散中剂量组、石膏汤大剂量组、葛根散大剂量组和冲和汤中剂量组实验小鼠睡眠潜伏时间和睡眠持续时间均得到显著改善(P＜0.05或P＜0.01);其中藿香正气散中剂量组、石膏汤大剂量组和葛根散大剂量组效果尤为显著，与葛花解酲汤小剂量组和冲和汤中剂量组比较具有明显差异(P＜0.05或P＜0.01)。

攀附实验结果显示(见表1)，与对照组比较，葛花解酲汤中剂量组、藿香正气散中剂量组、石膏汤大剂量组、葛根散中剂量组和冲和汤大剂量组实验小鼠攀附时间明显延长(P＜0.05或P＜0.01);其中以葛花解酲汤中剂量组、石膏汤大剂量组、葛根散中剂量组效果尤为明显(P＜0.01)。

血乙醇含量检测结果显示(见表2)，与对照组比较，葛花解酲汤大剂量组、葛根散大剂量组、石膏汤大剂量组实验动物各检测时间段(其中葛花解酲汤90 min时间段为中剂量组)血乙醇含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01);其中以葛根散大剂量组、石膏汤大剂量组效果尤为明显，与其他参试方剂比较，具有明显差异(P＜0.05或P＜0.01)。

综合上述实验结果，提示在本研究所选解酒防醉观察指标中，5首方剂中的葛根散和石膏汤的作用效果更为明显和全面，葛花解酲汤效果稍弱但与对照组相比仍具有显著差异。在本研究中，藿香正气散和冲和汤的解酒防醉作用比较局限，对实验动物血乙醇没有明显降低作用，其临床解酒效应是否涉及其他途径，需进一步探索。

在本文实验中，我们采用目前常用的小鼠醉酒模型，因考虑灌服白酒致醉后影响服药的问题，所以本研究全部采用的是先给药、后灌酒。因此，本实验结果除了体现解酒效果外，很大程度上还体现防醉效果。同时，为了尽可能体现每个方剂的最佳效果，我们分三个浓度组进行观察(对比时用效果最好的浓度组数据)。另外，因动物数量限制，血乙醇含量检测每组用8只动物，但仍符合统计要求(最低6只)。当然，由于实验工作量较大，我们观察的方剂数量有限，观察的指标覆盖面主要限于基本药效学指标，要全面深入的研究各方剂的解酒效果，尚需进一步开展工作。

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