香菇多糖对肝癌患者化疗栓塞前后T淋巴细胞亚群及IL-12、sIL-2R的影响及临床意义*

孟庆民 夏玉军

(1. 青岛大学医学院解剖学教研室，山东 青岛 266021；2. 泰山医学院附属泰山医院，山东 泰安 271000)

原发性肝癌(primary liver carcinomas, PLC)是原发于肝脏的恶性上皮细胞肿瘤，临床常见，病死率较高，且一经发现多为中晚期，失去手术机会，对放化疗耐受性低，疗效差。经导管肝动脉栓塞术(TACE)已成为PLC的首选非手术治疗方法。但TACE既杀伤恶性肿瘤细胞，也杀伤机体正常增殖和分化细胞，降低机体免疫。本研究通过检测正常人群、肝癌患者单纯TACE及TACE联合香菇多糖(Lentinan,LNT)治疗前后外周血T淋巴细胞亚群及IL-12和sIL-2R水平的变化，旨在探讨肝癌患者免疫功能的状态及LNT对肝癌TACE前后T淋巴细胞亚群，IL-12和sIL-2R的影响。

1 材料和方法

1.1 临床资料:

将2008年5月～2009年5月我院介入科经导管行肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗的原发性肝癌病人40例，其中包括男性30名，女性10名，年龄36～75岁，平均58岁，全部为初次治疗病例。所有治疗病例均经过B超、CT以及病理或细胞学证实为原发性肝癌，4周内未实行化学治疗或放射治疗，主要脏器(心、肺、肾) 无功能损害，所有入选病例均具备完整的临床以及影像学资料和完整的实验室检查指标。将40例患者随机分为两组(每组20例)，即单纯TACE组(A组)、TACE联合应用香菇多糖(B组)，并以查体中心正常查体人群20人作为正常对照组(C组)。

1.2 方法

采用Seldinger方法，经皮股动脉穿刺插管至腹腔干及肠系膜上动脉造影，明确肿瘤部位、大小、数目，确定肿瘤供血血管, 将导管选择至肝固有动脉、肝左或肝右动脉进行治疗，两组患者分别经导管灌注化疗药物及碘化油与化疗药物混悬液或乳剂。常用药物有5-氟尿嘧啶(5-FU 1. 0～1.25 g)或5-氟尿嘧啶脱氧核苷(5-FU 1. 0～1. 25g)，多柔比星(ADM 30～50 mg)或表柔比星(EPI30～50 mg)或吡柔比星(THP 30～50 mg)，丝裂霉素(MMC 8～10 mg)，顺铂(DDP 40～60 mg)，应用时多选择2～3种药物联合,然后经导管缓慢均匀推注碘化油10～20 ml与其中一种化疗药物混悬液或乳剂。联合化疗组同时应用香菇多糖2mg入500ml 5%葡萄糖，静滴，一周两次。分别取治疗前和治疗后2周病人外周血，采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群,包括: CD4+T细胞,CD8+T细胞, CD4+T/CD8+T比值。同时于治疗前和治疗后4周采用Elisa(酶联免疫吸附试验)对患者IL-12, sIL-2R进行检测比较。

1.3 统计学方法

应用SAS 8. 2进行统计学分析。比较各组CD4+T细胞, CD8+T细胞,及CD4+/CD8+比值，和IL-12、sIL-2R等计量资料时，选用ANOVA过程作方差分析，取α=0.05；各组均数间的多重比较采用SNK法。

2 结 果

单纯TACE组及TACE联合应用香菇多糖组与对照组各参数比较有统计学意义；单纯TACE组及TACE联合应用香菇多糖组各组治疗前后比较有统计学意义；TACE联合应用香菇多糖组与单纯TACE组治疗后各参数比较有统计学意义(P<0. 05)；TACE联合应用香菇多糖组与单纯TACE组治疗前比较无统计学意义(P>0. 05) (见表1)。

表1 外周血T淋巴细胞亚群及IL-12、sIL-2R的测定值的

3 讨 论

原发性肝癌患者免疫功能低下，已为一些实验或临床研究所证实[1]。其主要原因可能是肝癌细胞常分泌一些因子抑制机体免疫状态，导致免疫细胞处于抑制状态[2]。机体抗肿瘤免疫的主要方式是细胞免疫，其中T细胞亚群起主导作用。外周血T细胞主要为CD4+T细胞和CD8+T细胞两大类，CD4+T细胞(Th细胞)为免疫应答的主要反应细胞，活化增殖并分化后发挥强大的抗肿瘤效应。CD8+T细胞主要是抑制性T细胞(Ts细胞)，起免疫抑制作用。外周血T细胞亚群的数量比例，特别是CD4+/CD8+比值是反映细胞免疫平衡的敏感指标，有助于反映机体免疫功能的调节能力[3]。

IL-12(白细胞介素-12)又称细胞毒性淋巴细胞成熟因子、自然杀伤细胞(NK)刺激因子[4]。它是一种由单核巨噬细胞、B淋巴细胞等细胞产生的异二聚体的细胞因子。其对T细胞和NK细胞具有多种生物学活性：诱导细胞因子的转录和分泌；增强细胞毒性；诱导由其它刺激物活化的T淋巴细胞和NK细胞的增殖。目前认为IL-12是抗肿瘤治疗最有希望获得良好疗效的细胞因子。肝癌患者血清IL-12水平的升高有利于机体产生抗肿瘤免疫。sIL-2R(可溶性白细胞介素-2受体Soluble inter-leukin-2 receptor) ，可与膜白细胞介素2受体(membrane IL-2R, mIL-2R)竞争结合IL-2，从而间接抑制IL-2介导的各种免疫反应,现已成为某些恶性肿瘤诊断、预后和疗效监测的指标。原发性肝癌患者血清中sIL-2R水平的变化会导致NK细胞活性降低，杀伤力下降，免疫监视功能减弱,机体难以控制肿瘤的发展。

TACE作为一种重要的治疗手段在原发性肝癌(PLC)的治疗中具有举足轻重的意义。但化疗药物均为细胞毒性药物，在杀灭肿瘤细胞的同时也杀伤机体正常增殖和分化的细胞,包括免疫细胞。因此，Morikawa等[5]认为肿瘤的治疗过程中杀伤肿瘤细胞与保护机体的免疫功能具有同等重要作用。TACE的同时及早配合免疫治疗，尽快恢复机体的免疫功能，提高机体特异性抗肿瘤免疫应答；抑制残存病灶的复发与转移，在肝癌患者的治疗中有着重要的意义。

香菇多糖(lentinan, LNT) 是从香菇的实体中分离出来的多糖，分离纯化成6个多糖部分,其中活性最强的部分命名为香菇多糖。LNT是一种新型的兼有抑制肿瘤和提高免疫功能的可用做免疫治疗的多糖类生物反应调节剂。LNT无直接的细胞毒作用，主要是通过宿主增强诱导活化的巨噬细胞及杀伤T细胞，提高NK细胞活性和增强抗体依赖性巨噬细胞毒作用来发挥抗肿瘤作用。LNT对实体瘤有抑制作用,可提高宿主免疫力，抑制肿瘤的生长。香菇多糖+TACE联合治疗对原发性肝癌患者肝脏肿瘤缩小, AFP降低，明显优于单用TACE治疗(P< 0·01)，与日本村上等报告相同[6]。TACE对单个巨块型肝癌效果较好,可能是由于肿瘤体积较大,多有包膜,一旦瘤体内为碘油充盈且主要供血动脉被切断易发生缺血，肿瘤坏死，瘤体缩小明显[7-8]，而多发结节型和弥漫型肝癌常伴有肝硬化，肝功能较差,肝内门静脉癌栓多见,易发生肝内、外转移,故化疗栓塞治疗疗效较差。TACE与香菇多糖联合使用，香菇多糖具有增加原发性肝癌患者免疫功能及抗肿瘤活性的能力，它主要调节肿瘤患者外周血的NK细胞活性和Ic-Ⅱ活性，并可提高CD4活性[9]，从而增加肝癌患者的机体免疫功能，增加机体对肝癌细胞生长的抑制或/和对肿瘤抗原的识别能力。

本研究中，肝癌患者外周血CD4+T细胞数、CD4+/CD8+比值及IL-12水平显著低于正常对照组, CD8+T细胞数、sIL-2R水平显著高于正常对照组。说明肝癌患者体内的细胞免疫功能呈明显的抑制状态。单纯TACE组患者治疗后2周肝癌患者CD4+T细胞数、CD4+/CD8+比值及IL-12水平与TACE前1天相比有一定提高, CD8+T细胞数、sIL-2R水平有所下降 ,提示TACE治疗两周后患者免疫状态有所提高。联合组TACE后外周血CD4+T细胞数、CD4+/CD8+比值及IL-12水平有显著提高，CD8+T细胞数、sIL-2R水平显著降低，且联合组TACE后各组参数与单纯TACE组比较有统计学意义(P<0. 05), 提示香菇多糖联合TACE治疗肝癌，可使患者免疫状态明显提高，优于单纯TACE治疗。

综上所述，肝癌患者细胞免疫功能低下，TACE治疗两周后可使患者免疫状态有一定恢复。TACE联合香菇多糖治疗可明显改善患者免疫状态，促进免疫功能重建,减少治疗的毒副作用，此治疗方法较为理想、安全、可靠，值得临床推广应用。

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