分光光度法测定不同产地荷叶药材总黄酮的含量*

曹 娟 王福刚 陈 静 王彩燕

(1. 泰山医学院药学院，山东 泰安 271016；2. 泰山医学院药学院2006级制药工程专业,山东 泰安 271016)

荷叶Folium Nelumbinis为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶，味苦、性平，归肝、脾、胃经，具有清热解暑，升发清阳，凉血止血之功效[1]。《本草纲目》记载，“荷叶服之，令人瘦劣”、“生发元气，裨助脾胃”。现代药理研究表明，荷叶具有降脂减肥、抗氧化及抗衰老、抑制脂肪肝、抑菌等作用。1991年 11月中华人民共和国卫生部卫签发(1991)第 45号文件中，荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”名单，在食用及药用两方面均有较广泛的应用。荷叶分布广泛，我国南北均产，其主要活性成分为生物碱和黄酮类化合物[2]。荷叶黄酮对胰脂肪酶有显著抑制作用[3]，能降低血脂中的甘油三酯含量[4]。为了研究不同产地荷叶总黄酮含量的差异性，本实验测定了22批荷叶药材总黄酮的含量，为荷叶的进一步开发利用提供依据。

1 仪器与试药

S54紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；FA1004电子天平(上海兰科仪器有限公司)；KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707)；荷叶药材购于各地药材市场或药店，经本院中药学教研室鉴定均为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1芦丁对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品置50 ml量瓶中，加70%乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，得浓度为0.3607 mg.ml-1的对照品溶液。

2.2荷叶供试品溶液的制备 取荷叶药材粉末(过三号筛)0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %乙醇20 ml，称定重量，40 ℃超声20 min，放冷，补足减失的重量，摇匀过滤，取续滤液即得。

2.3测定波长的选择 取对照品和供试品溶液分别置25 ml量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min；以紫外-可见光分光光度法测定在200～700 nm区间扫描吸收曲线。供试品溶液在500 nm处有最大吸收，与芦丁对照品溶液吸收曲线相似，故选用500 nm为测定波长。见图1。

表1 荷叶总黄酮加样回收率实验

表2 不同产地荷叶中总黄酮的含量(n=3)

图1 芦丁对照品与供试品的光谱图 A-芦丁，B-荷叶供试品

2.3方法学考察

2.3.1线性关系的考察

精密量取芦丁对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置25 ml量瓶中，各加水至5 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。以第一份为空白，在500 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线，结果见图2。回归方程：A = 0.0114C - 0.0076，r=0.9995，线性范围为14.43～72.15 μg.ml-1。

图2 芦丁标准品吸光度-浓度标准曲线

2.3.2稳定性考察

精密吸取供试品溶液1 ml，按线性关系考察项下方法测定，在显色后15、20、30、40、50、60 min测定吸收度值，分别为0.682，0.680，0.644，0.620，0.618，0.604，吸收度值在20 min内稳定。

2.3.3精密度考察

取同一供试品溶液，按线性关系考察项下方法重复测定6次。吸收度值分别为0.698，0.702，0.690，0.704，0.680，0.692，平均值为0.694，RSD为1.28%。

2.3.4重复性考察

取荷叶药材(1号)，平行制备5份供试品溶液，按线性关系考察项下方法测定，计算含量。平均值为6.84%，RSD为1.4%。

2.3.5回收率考察

精密称取荷叶药材粉末(1号，总黄酮含量6.84%)0.4983 g，按“2.2”项下制成供试品溶液，精密量取0.5 ml，6份，置25 ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液1.5、1.5、2.0、2.0、2.5、2.5 ml, 按线性关系考察项下方法测定，计算回收率，结果见表1。

2.4样品含量测定

取不同产地的荷叶药材按“2.2”项下，同法制成供试品溶液，按线性关系考察项下方法测定，计算含量，结果见表2。

3 讨 论

3.1考察了石油醚脱色素对荷叶总黄酮提取的影响，结果显示脱色素前后荷叶总黄酮色谱图无明显改变。比较了不同提取溶剂(不同浓度甲醇、乙醇)、不同提取方法(超声、回流、浸渍)对总黄酮提取率的影响，结果以70%乙醇为提取溶剂，40℃超声20 min，料液比1：40提取率最高。

3.2以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH为显色剂，选用芦丁为标准品，以紫外-可见光分光光度法在500 nm处测定荷叶中总黄酮的含量，结果表明该方法准确度高、重现性好，简便快速，可作为荷叶总黄酮的含量测定方法。

3.3测定结果表明不同来源的荷叶药材总黄酮含量差异显著，最高含量为10.99%，最低为1.88%，提示不同产地或同一地区的市售荷叶药材质量存在较大差别。气候、土壤、水质以及采收时间、加工贮藏等因素对荷叶药材质量均会产生较大影响，因此应加强对荷叶的产地及采收加工等过程的标准化研究，以便建立更科学合理的荷叶药材质量标准，规范流通药材质量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：195.

[2] 刘淑萍，樊淑彦，侯海妮，等.荷叶化学成分及药理作用研究进展[J].河北医科大学学报，2004，25(4)：254-256.

[3] 霍世欣，周陶忆，司晓晶，等.荷叶黄酮化合物对胰脂肪酶抑制作用的研究[J].天然产物研究与开发，2008，20：328-331.

[4] 黄阿根，施洪飞，韦红，等.荷叶黄酮和生物碱的提纯及调节血脂作用比较[J].扬州大学烹饪学报，2006,(3)：23-25.