柳州地区161例先天性聋患者易感基因突变检测分析△

赵恒静 纪育斌 李红辉 赵翠 王秋菊

随着耳聋病因学研究的深入开展，发现有超过50%的听障儿童是由遗传缺陷导致，遗传因素是造成儿童感音神经性聋最主要的原因[1]，对耳聋易感基因的研究成为近年来研究的热点。我国学者自本世纪初开始对国内不同地区耳聋人群的遗传因素进行了多方面研究，涉及易感基因的筛查、基因的定位克隆等多个方面[2～4]。广西柳州地区是一个多民族聚居的地区，为了调查该地区聋病基因突变状况，近年来对柳州地区先天性耳聋患者耳聋易感基因突变状况进行了检测，希望为本地区的防聋治聋工作提供流行病学资料。

1 资料与方法

1.1调查对象 柳州市妇幼保健院2007年前新生儿听力筛查未通过和2007年～2009年到该院门诊就诊的散发病例中诊断为先天性感音神经性聋的患者共161例，排除了先天性小耳畸形。其中男101例，女60例，年龄3个月～42岁(42岁患者为6岁前发病)，平均7.8±0.05岁。患者来自于柳州市及周边27个区县，少数来自湖南、广东、安徽、江西4个省市，包括汉族92人，壮族53人，苗族5人，瑶族2人，侗族3人，满族1人，仫佬族3人，回族2人，8个民族中少数民族比例占42.86%(69/161)。祖籍柳州127例，南宁15例，桂林3例，梧州2例，广东6例，湖南4例，南昌、福建、安徽、四川各1例。161例患者中有听力高危因素者共46例，其中有耳毒药物应用史5例、母亲孕期患风疹2例，出生时有缺氧窒息史5例、高胆红素血症6例、猩红热、地中海贫血、G-6PD缺乏、核黄疸各1例，母亲孕期感冒发热用药(不详)7例，祖辈中有近亲结婚1例，家族中有聋哑人(高度可疑遗传)者13例，家族中有染色体异常者3例。

1.2. 方法

1.2.1病史采集 采用问卷调查形式，调查表内容涉及患者基本信息及耳聋史、家族史、高危因素等，并由患者或其监护人填写。本研究获得柳州市妇幼保健院和解放军总医院道德伦理委员会批准，对所有研究对象的临床信息和血样采集，均获得了患者本人或其监护人的同意，并签署了知情同意书。

1.2.2听力学诊断 听力学检查包括听性脑干反应(auditory brainstem response, ABR)、听性稳态反应(auditory steady state response, ASSR)、声导抗、纯音测听，仪器采用美国GSI 70听力筛查仪及美国智听脑干诱发电位测试系统。每例患者均行耳鼻咽喉科常规检查，在排除中耳、外耳炎性病变及噪声性聋情况下，听损伤以ABR阈值>30 dB nHL为标准，耳聋分级以世界卫生组织1997年日内瓦会议听力障碍分级为标准[5]。

1.2.3基因检测方法 抽取患者8 ml静脉血，低温冷藏保存，送国家人类基因组北方研究中心，PCR扩展DNA产物，采用限制性酶切方法检测线粒体DNA A1555G(mitochondrial DNA A1555G, mtDNA A1555G)突变和GJB2 235delC突变，未切开样本的PCR产物直接测序，确定突变位点；采用直接测序法检测SLC26A4基因P8外显子突变。

2 结果

2.1听力损失状况 根据病史和听力学检测结果诊断调查对象均为先天性聋，其中重度以上听力损失102例，轻中度听力损失59例。

2.2基因检测结果 161例患者中检测出mtDNA A1555G突变1例(0.62%，1/161)(汉族)；GJB2基因致病突变2例(1.24%，2/161)，杂合携带2例(1.24%，2/161)，致病突变加杂合携带检出率(2.48%)，多态改变61例占37.89%(6/161)(均为汉族)；SLC26A4 IVS7-2A>G杂合携带10例，检出率6.21%(10/161)(汉族6例、壮族3例、瑶族1例)(表1)。

表1 161例先天性聋患者GJB2、SLC26A4基因检出结果

3 讨论

国内报道在先天性聋患者中mtDNA A1555G突变频率在0.67%～14.6%[6，7]；GJB2 235delC突变携带频率6.88%～26.67%[8，9]，致病突变频率为1.14%～15.90%[8，9]；IVS7-2A>G突变携带率为0%～28.3%，纯合突变率为0%～11.84%[10]。其中，于飞等[8]曾对柳州地区盲童学校非综合征型聋患者GJB2 235delC突变和线粒体DNA A1555G突变频率进行筛查，发现这两种基因突变频率和携带率均低于国内其他地区，这与本研究结果一致。本研究对广西柳州地区161例先天性聋患者mtDNAA1555G、GJB2和SLC26A4基因常见突变位点的检测，发现前两种基因致病突变频率和突变携带率均低于既往国内其他地区报道的数据，并且仅见于汉族耳聋患者，IVS7-2A>G突变携带率也较低，分布于汉、壮、瑶族。分析本组病例中三种常见耳聋易感基因突变携带率低的主要原因可能与柳州地区少数民族种类和人口众多，先天性聋患者民族构成较复杂有关。由于不同民族之间遗传异质性的客观存在，少数民族与汉族耳聋人群的耳聋易感基因可能不同，而既往国内研究多以汉族人口为研究对象，少数民族人口较少，本研究样本中少数民族人口比例高达42.86%(69/161)，因此，不同研究样本中存在的民族构成差异，可能导致不同耳聋易感基因突变率存在差异。目前尚未见到国内对大样本少数民族耳聋人群易感基因突变研究的报道，因此，深入研究少数民族人群耳聋易感基因，进一步完善我国遗传性聋基因图谱是国内耳科学和遗传学工作者的重要任务之一。

本组病例中有3例患者携带A1555G突变或GJB2 235delC纯合突变，这3例患者可以在分子水平上明确病因，占总患者人数的1.86%(3/161)；还有12例(7.45%)患者为GJB2或SLC26A4 IVS7-2A>G杂合携带者，基因检测为这些患者提供了病因学线索。同时，已知易感基因较低的突变携带率提示了未知的遗传和环境因素在耳聋的发病中起着重要的作用。文中46例(28.6%)患者存在多种听力高危因素，这些高危因素是否为听损伤的直接或间接病因，目前虽然尚不明确，但为进一步研究提供了线索。

对耳聋患者中易感基因的检测不仅有利于明确病因，还有利于针对不同的基因突变引起的耳聋患者提供不同的干预、康复和指导方案。对中度或重度耳聋患者，早期佩戴助听器或行人工耳蜗植入有利于患者的言语发育，是目前有效的干预和治疗措施。本研究中发现的1例A1555G突变患者，母亲亦为该基因阳性携带者，提醒该患者及其母系亲属必须避免使用氨基糖苷类抗生素及尽可能避免接触其他可能引起耳聋的因素。GJB2基因纯合突变或杂合突变耳聋患者达到婚配年龄时，应指导患者对婚配对象的选择，避免选择携带GJB2基因突变的配偶，以免其后代出现耳聋。SLC26A4 IVS7-2A>G突变患者极有可能是大前庭水管综合征患者，这类患者多数有残存听力，应避免各种外伤、感冒或耳毒性药物的使用，避免加重耳聋的诱因及注意预防甲状腺肿的发生[11]，条件许可时可尽早行影像学检查明确诊断，与GJB2突变患者一样，这类患者婚配时要避免选择SLC26A4基因突变携带者作为对象。

(致谢：在本研究过程中得到解放军总医院耳鼻咽喉科研究所李兴启教授的热忱指导和柳州市聋哑学校师生员工的大力支持，在此一并表示衷心感谢！)

4 参考文献

1 Steel KP．Science，medicine，and the future：New interventions in hearing impairment[J]．BMJ，2000，320：622．

2 郭玉芬，徐百成，韩东一，等.中国西北地区线粒体DNA12 SrRNAA1555G和GJB2基因突变[J].中国耳鼻咽喉头颈外科，2006,13:666．

3 王秋菊，韩东一，郭玉芬，等.遗传性耳聋的资源收集保存及基因定位克隆与分子流行病学研究[J].中国耳鼻咽喉-头颈外科杂志，2006,13: 661．

4 Wang QJ,Rao SQ，Zhao YL,et al.The large Chinese family DFNY1 with Y-linked inheritance of non-syndromic hearing impairment revisited: clinical investigation and karyotype analysis[J].Acta OtoLaryngol，2008,18:1．

5 孙喜斌，李兴启，张华.中国第二次残疾人抽样调查听力残疾标准介绍[J].听力学及言语疾病杂志，2006，14：447.

6 何勇，孙勍，戴朴，等.福州市特教学校非综合征性聋分子病因学分析-GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告[J].中华耳科学杂志，2006，4：12．

7 欧启水，程祖建，陈静，等.中国人非综合征型耳聋患者线粒体DNA A1555G突变分析[J].中华检验医学杂志，2007，30:273．

8 于飞，戴朴，韩东一，等.柳州市盲聋学校非综合征性聋分子病因学分析-GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告[J]. 中华耳科学杂志,2006,4:18．

9 崔敬红，尤易文，戴朴，等.南通地区遗传性耳聋资源收集及病因学分析[J]. 中华耳科学杂志，2006，4：27．

10 戴朴，袁永一，康东洋，等. 1孙552例中重度感音神经性聋患者SLC26A4基因外显子7和8序列测定及热点突变分析[J].中华医学杂志，2007，87：2 521．

11 Scott DA，Wang R，Kreman TM，et a1. The Pendred syndrome gene encodes a chloride-iodide transport protein[J].Nature Genet，1999,21：440．