2008年福建省5设区市公共场所中央空调冷却塔水军团菌污染状况调查＊

原 灵,陈爱平,詹銮峰,林震宇,杨劲松

2008年福建省5设区市公共场所中央空调冷却塔水军团菌污染状况调查＊

原 灵,陈爱平,詹銮峰,林震宇,杨劲松

福建省地处经济快速发展的东南沿海,随着经济的发展和人们的生活水平的提高,在公共场所如商场、宾馆、饭店及医院等均已广泛使用各种空调系统,亦为“城市文明病”——军团病的发生提供了有利的条件。军团病是一种细菌性呼吸道传染病,病原体是军团菌,一但感染得病,如未能及时治疗,病死率很高〔1〕。福建省迄今尚无军团菌污染状况的较完整的调查,为了较全面了解福建省公共场所中央空调冷却塔水中军团菌污染状况,制定军团病的监测防治措施和控制该病流行提供科学依据,作者于2008年7月至10月选择经济发展水平不同的5个设区市为调查点,在宾馆、酒店、大型商场、超市、医院等114单位,采集中央空调冷却塔水115份进行嗜肺军团菌检测,现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 调查点 调查点为福建省的5个设区市,即福州市、厦门市、泉州市、漳州市及龙岩市共 114家(其中商场或超市13家,宾馆、酒店和大饭店99家,医院2家)单位,同时对每个采样单位进行样品登记。

1.2 采样时间及数量 2008年6月至10月,在114家共采集中央空调冷却塔水 115份,每份300m L置灭菌采样瓶中送检。

1.3 材料

1.3.1 培养基 GVPC平板、BCYE-α平板、BCYE-cys平板及血平板购自广州环凯微生物科技有限公司,在有效期内使用。生化反应管购自北京友康有限公司。

1.3.2 诊断试剂 军团菌乳胶试剂购自英国OXO ID公司,嗜肺军团菌诊断血清购自日本生研。LP7～LP15嗜肺军团菌分型诊断血清购自天津生物芯片公司。

1.3.3 仪器 PCR扩增仪、TGL-16B台式高速离心机、水平电泳槽、凝胶成像仪、生物安全柜、CO2培养箱。

1.3.4 引物 嗜肺军团菌16s rRNA基因及mip基因引物由上海生工合成。嗜肺军团菌16S rRNA基因引物序列参照中国疾病预防控制中心传染病预防控制所举办《军团菌培训班讲课资料》,mip基因引物序列参照文献〔2〕。

1.3.5 试验菌株 嗜肺军团菌标准株及大肠杆菌标准株系本科室菌种组保存。

1.4 检验方法

1.4.1 样品处理与分离培养 参照卫生部《公共场所集中空调通风系统卫生规范》及《ISO 11731 水样军团菌检测》操作。

1.4.2 PCR 鉴定按常规PCR检测方法进行,模板制备 (煮沸法):将菌苔刮至含100μL纯水的 Eppendorf离心管中,煮沸15min后,12 000r/min离心3min,取上清作为 PCR扩增反应的DNA模板,保存于 -20℃。阳性对照为嗜肺军团菌标准株(LP1)系本科室菌种组保存。引物序列如下。

目的基因 PCR引物序列(5’-3’) 片段大小(bp)16S rRNA F:GAGGGTTGATAGGTTAAGAGC 430 R:CGGTCAACTTATCGCGTTTGCT mip F:GGTGACTGCGGCTGTTATGG 630 R:GGCCAATAGGTCCGCCAACG

2 结 果

2.1 细菌分离 115份样品中分离出47株嗜肺军团菌,检出率为40.86%。所分离的菌株均为革兰氏阴性杆菌;在BCYE-α平板上均能生长,BCYE-cys和血平板上均不能生长;生化反应均为:触酶-、氧化酶-、马尿酸水解 + 、尿素-、硝酸盐-、糖发酵管-、明胶液化试验+。

2.2 乳胶凝集试验 能与LP1乳胶试剂产生凝集30株,占63.82%;与LP2-14乳胶试剂产生 凝集17株占36.17%(17/47)。

2.3 血清分型 用嗜肺军团菌诊断血清LP1-LP15对47株嗜肺军团菌进行分型,定为LP1 30株 ,占 63.82%、LP5 5 株 、LP6 12 株 。

2.4 PCR鉴定 采用16s rRNA及mip基因引物从分离的47株可疑培养物制备的摸板中扩增出与相应阳性对照一致的条带。PCR检测结果见图1(图1为部分分离菌株PCR检测鉴定结果)。

2.5 5个设区市冷却塔水嗜肺军团菌检测结果将5个设区市(漳州市、龙岩市、福州市、泉州市、厦门市)冷却塔水嗜肺军团菌检出率进行比较,差异有统计学意义 (χ2=22.159,P<0.05),见表1。考虑到龙岩市、漳州市数据较少,将两组数据合并为一组即合并组,并采用卡方分割的方法与其余3个设区市进行两两比较 (α’=0.007143),χ2合并-厦门=16.856,P合并-厦门<α’,两组差异有统计学意义;χ2合并-泉州=14.964,P合并-泉州<α’,两组差异有统计学意义;χ2合并-福州=2.743,P合并-福州>α’,两组差异无统计学意义;经统计学分析合并组(即龙岩市与漳州市)冷却塔水嗜肺军团菌检出率高于泉州市、厦门市,与福州市比较,无显著差异。

图1 部分分离的嗜肺军团菌菌株PCR鉴定结果1:阳性对照菌株(嗜肺军团菌标准株),2～8:样品株,菌株号依次为水 2008-8、水 2008-10、水 2008-12、水2008-14、水 2008-15、水 2008-19、水 2008-24,9～10:分别是大肠杆菌为阴性对照和空白对照,M为DL2000 Marker。

2.6 公共场所嗜肺军团菌的污染状况 在本次调查检测的114家公共场所中,检出嗜肺军团菌的公共场所为46家,公共场所嗜肺军团菌的污染率为40.35%。在检出嗜肺军团菌的46家公共场所,商场、超市嗜肺军团菌的污染率为61.54%,宾馆、酒店、饭店污染率也接近40.0%;医院2份均检出嗜肺军团菌,见表2。

3 讨 论

调查结果显示我省5个设区市114家公共场所受嗜肺军团菌污染有46家,污染率达40.35%,采集的115份冷却塔水,嗜肺军团菌检出阳性的冷却塔水有 47份,阳性检出率为 40.86%,与湖北省〔3〕、北京市〔4〕、广州市〔5〕、深圳〔6〕、杭州〔7〕报道的阳性率大致相同;从鉴定结果来看,检出的47株均为嗜肺军团菌,血清分型以LP1血清型为主要菌型,占总数的63.82%(30/47),其次是LP6,占总数的25.53%(12/47),与北京市〔4〕、杭州市〔7〕LP1 的血清型基本相符。

本文调查结果阐明,福建省5个设区市的商场、超市、宾馆、酒店、饭店的空调冷却塔水受到嗜肺军团菌污染比较严重;LP1血清型为主要优势菌型;本次检测有2家医院的2份水样均检测到嗜肺军团菌,由于份数少,有待今后调查研究。医院人群流动量大,病人的抵抗力都比较低,属于高危人群,一旦发生军团菌污染暴发其后果严重,必需引起重视。

调查研究结果还显示,龙岩市及漳州市冷却塔水嗜肺军团菌检出率高于泉州市、厦门市,福州市检出率也达56.00%,提示5个设区市集中式中央空调通风系统已对人群产生潜在的危害。随着国民经济的快速发展和人民生活水平的日益提高,中央空调系统越来越多地被广泛使用,军团菌病发生的危险势必明显增加。建议开展对公共场所集中式中央空调通风系统的日常监测、定期换水和按时清洗消毒。各地卫生部门应加大对公共场所中央空调系统的监督监测力度,消除军团菌生长繁殖的条件,保证冷却塔水质卫生安全,从而控制军团菌病的发生;同时要进一步加强对军团菌有关知识的宣传教育,提高人们对军团菌病有关知识的了解、提高防范意识。

表1 5个设区市冷却塔水嗜肺军团菌检测结果

表2 公共场所嗜肺军团菌的检测结果

〔1〕陈悦,沈健民,王刚毅.军团菌流行现况及其对策研究〔J〕.上海预防医学,2003:17.

〔2〕Jaulhac B,Nowicki M,Bornstein N,et al.Detection of Legionella spp.In bronchoalveolar lavage fluids by DNA amplification〔J〕.J Clin Microbiol,1992 Ap r,30(4):920-4.

〔3〕李泉,付洁,马戈,等.湖北省三市集中式中央空调冷却塔水军团菌污染状况调查〔J〕.公共卫生与预防医学,2007,18(2):50-51.

〔4〕彭晓旻,裴红生,黎新宗,等.北京市大饭店空调冷却塔军团菌污染现状及人群感染水平研究〔J〕.中华流行病学杂志,2002,21(4):289-291.

〔5〕冯文如 ,马林 ,刘汉湘,等.广州市公共场所空调冷却塔水中军团菌污染状况调查〔J〕.华南预防医学,2005,31(3):60-61.

〔6〕温群文,段永翔,袁梦,等.深圳市公共场所中央空调冷却塔军团菌污染现况调查〔J〕.中国热带医学,2005,5(5):1088.

〔7〕斯国静,俞骅,王一泓,等.杭州市区公共场所空调冷却塔水中嗜肺军团菌的调查和分析〔J〕.中国卫生检验杂志,2006,16(3):281-282.

1002-2694(2010)11-1080-03

R379.9

B

＊本课题为福建省2009年自然科学基金资助项目(No.31091732)

福建省疾病预防控制中心,福州 350001;Email:fjcdcxjyuanling@yahoo.com.cn

2010-05-27;

2010-08-31