反相高效液相色谱法测定防风通圣丸中黄芩苷含量

姚丽佳，冉海琳

（重庆市药品检验所，重庆 401121）

反相高效液相色谱法测定防风通圣丸中黄芩苷含量

姚丽佳，冉海琳

（重庆市药品检验所，重庆 401121）

目的建立防风通圣丸中黄芩苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，以Kromacil C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm，5!m）为色谱柱，以甲醇－水－磷酸(45∶55∶0.2)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为315 nm，柱温为30℃。结果黄芩苷进样量在0.030 66～0.490 6!g范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 97(n=8)，平均加样回收率为99.11%，RSD为1.10%（n=6）。结论该方法灵敏、简便、结果准确、重现性好，适用于防风通圣丸的质量控制。

防风通圣丸；黄芩苷；高效液相色谱法；含量测定

防风通圣丸由防风、栀子、当归、川芎、白芍等17味药物组方，具有解表通里、清热解毒功效，用于治疗外寒内热、表里俱实、恶寒壮热、头痛咽干、小便短赤、大便秘结、瘰疠初起、风疹湿疮等证。笔者采用反相高效液相色谱（RP－HPLC）法对防风通圣丸中黄芩苷的含量进行了测定[1]，报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪，2487型紫外检测器。黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0844－200003，供含量测定用）；防风通圣丸（太极集团重庆桐君阁药厂）；甲醇为色谱纯试剂，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Kromacil C18不锈钢柱（250 mm ×4.6 mm,5!m）；流动相：甲醇 －水 －磷酸(45 ∶55 ∶0.2)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：315 nm；进样量：10!L。理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2 500。

2.2 溶液制备

精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含15!g的溶液，即得对照品溶液。取重量差异项下的本品，研细，混匀，取约0.2 g，精密称定，置50 mL量瓶中，精密加入70%乙醇适量，超声

处理30 min，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按处方比例及工艺制备不含黄芩的样品适量，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各10!L，注入液相色谱仪，测定。结果阴性对照品溶液色谱图中在黄芩苷峰相应的保留时间附近无干扰峰出现。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液（质量浓度为0.030 66 mg/mL）1，2，4，6，8，10，12，16!L，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量 C为横坐标、峰面积 A为纵坐标进行线性回归，得回归方程A=3 030.422 C － 12.639，r=0.999 97（n=8）。结果表明黄芩苷进样量在0.03066～0.4906!g范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样测定。结果平均峰面积的 RSD=0.39%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于常温条件放置0，1，2，4 h时进样测定峰面积。结果的 RSD=0.5%（n=4），表明供试品溶液至少在4 h内基本稳定。

重现性试验：取同一批样品(批号为77050001)，平行制备5份供试品溶液，测定黄芩苷的含量。结果的 RSD为1.0%（n=5），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品(批号为77050001，含量3.45 mg/g)粉末约0.1 g，共6份，分别置50 mL量瓶中，分别精密加入对照品溶液(质量浓度为0.038 9 mg/mL)10 mL，同供试品溶液的制备方法制备，依法测定含量，并计算回收率。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10!L，分别注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算。结果3批样品（批号为77050001，77050002，77050003）含量分别为 3.45，3.62，3.56 mg/g。

3 讨论

防风通圣丸收载于2005年版《中国药典（一部）》，质量标准中仅有防风、荆芥穗、连翘等药物的显微鉴别及大黄的薄层色谱鉴别，无含量测定方法。该方中黄芩具有清热燥湿、泻火解毒等作用，为方中主药之一。2005年版《中国药典（一部）》对黄芩药材选用了黄芩苷含量作为质量评价的检测指标，故选择了测定黄芩苷的含量作为评价防风通圣丸中黄芩的依据。对样品提取溶剂种类、提取溶剂用量及提取时间均进行了考察，根据试验结果，拟订了上文所述供试品溶液的制备方法。对多个品牌的色谱柱进行考察，含量测定结果无明显差异，表明该方法灵敏、简便、结果准确、重现性好，适用于防风通圣丸的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：233.

Determination of Baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills by RP－HPLC

Yao Lijia,Ran Hailin
(Chongqing Institute for Drug Control,Chongqing,China 401121)

ObjectiveTo establish a RP －HPLC method for the determination of baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills.MethodsRP －HPLC method was adopted and the C18column (250 mm ×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase was methanol－water－phosphoric acid(45∶55∶0.2),with the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 315 nm and the column temperature was 30℃.ResultsThe calibration curve of baicalin was linear in the range of 0.030 66－0.490 6!g,r=0.999 97(n=8).The average recovery rate was 99.11%,RSD=1.10%(n=6).ConclusionThe method is highly sensitive,quick and accurate with good repeatability,which can be used for the quality control of Fangfeng Tongsheng Pills.

Fangfeng Tongsheng Pill;baicalin;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)04－0021－02

2009－04－15)