用正交设计法优化黄连的提取工艺研究

岑志芳　郭淑英

【摘要】目的：比较渗漉法、浸渍法、超声波法对黄连中小檗碱的提出率，优选最佳的提取工艺。方法：采用正交试验方法，用0.5%硫酸作溶媒，按3因素3水平进行L₉(34)正交试验，以紫外分光光度法测定盐酸小檗碱含量作为考察指标。结果:影响小檗碱提出率的主要因素是提取方法。结论：从黄连中提取盐酸小檗碱的最佳工艺为：A2B₃C₁，即用黄连粗粉，12倍溶媒量，渗漉法提取。

【关键词】黄连；正交试验；超声波；提取；渗漉法；浸渍法

【中图分类号】R931.71【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0014-02

黄连为毛茛科植物黄连（Coptis Chinensis Franch.）的干燥根茎。《神农本草经》列为上品。性寒，味苦，具有清热燥湿，泻火解毒之功效[1]，具有抗病原微生物、抗腹泻、抗炎和免疫促进以及降血压、抗心律失常、降血糖等药理作用，用于急性肠胃炎、口舌生疮、烧烫伤、心率失常、高血压、糖尿病等疾病的治疗。黄连中主要有效成分为小檗碱,为避免黄连中小檗碱在煎煮、浓缩过程中损失,中药复方制剂中的黄连常单独提取。常用的提取方法有稀硫酸渗漉法、乙醇回流提取法、超声提取法、连续回流法、煎煮法。笔者以分光光度法测定盐酸小檗碱含量为指标[2]，采用正交设计法，以0.5%硫酸溶液作为提取溶媒，考察影响小檗碱提出率的因素，筛选黄连的最佳提取工艺条件。

1仪器与试药

电子天平(德国赛多利斯制造)，752紫外光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂制造，9802003），CQ-20-36型超声波清洗器（上海市弘兴超声电子仪器有限公司制造）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所）；黄连(购自佛山市中药饮片厂，批号：20080911，产地：四川。)

2方法与结果

2.1标准曲线的绘制精密称取盐酸小檗碱化学对照品4mg，用水溶解并移置100ml容量瓶中，定容，得浓度为40μg/ml的储备液，备用。精密吸取盐酸小檗碱储备液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0ml于25ml容量瓶中，用蒸馏水作空白，在其最大吸收波长处（λmax=345nm）[3]分别测得吸收度，结果见表1。用最小二乘法经线性回归，得方程：C=15.6074A-0.125，r =0.9999。结果表明，盐酸小檗碱在1.6～6.4μg/ml浓度范围内线性关系良好。

2.2样品溶液的制备将黄连粉碎成最粗粉（过10目不能过20目筛）、粗粉（过20目不能过40目筛）及中粉（过40目不能过60目筛）。称取上述药材粉末100g，用8倍、10倍、12倍0.5%硫酸溶液为溶媒，按渗漉法、浸渍法、超声波法提取。渗漉法装筒24小时后渗漉，按1000g药材计算，渗漉速度设计为每分钟为5ml；超声波法用溶媒浸渍12小时后用超声波清洗仪超声30分钟，再浸渍12小时，过滤得滤液。浸渍法浸渍24小时后，过滤得滤液。将上述各液配成含原药材83.33mg/ml的溶液，备用。各取上述溶液1ml至25ml量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀释至刻度，再取上述溶液1ml至100ml量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀释至刻度（2500倍）。摇匀，以0.5%硫酸溶液作空白，在345nm波长处测定9份溶液的吸收度。选取药材粉碎度（A）、溶媒用量（B）、提取方法（C）三个试验因素，每个因素取三个水平进行试验。采用L₉（34）正交试验，正交试验及结果见表2。

渗漉法与浸渍法提前装筒，浸泡24小时，再按上法操作。将各提取液配成含原药材83.33mg/ml溶液，备用。取上述溶液各1ml，用蒸馏水稀释200倍，摇匀，以蒸馏水作空白在345nm波长处测定9份溶液的吸收度，计算提出率。

3结果与讨论

3.1实验方法①本研究采用正交试验对提取黄连的有效成分进行工艺研究，渗漉法除了提取率高的优点以外，可以避免盐酸小檗碱成分受热损失。本文以盐酸小檗碱为评价指标,通过单因素和正交设计实验,考察药材粉碎度、溶媒用量、和提取方法等因素对提取效果的影响，确定渗漉法提取黄连中盐酸小檗碱成分的最佳工艺条件。②中草药提取对于提高中药制剂的内在质量和临床疗效最为重要。渗漉法提取较为完全，且省去了分离浸出液的时间和操作。

3.2实验结果从表5中R值直观分析可知,A、B、C3因素对提出率的影响大小为C>A>B,即提取方法的影响最大，药材粉碎度次之，溶媒用量影响最小。从表6的方差分析结果看，C、A因素对提出率的影响有显著性差异，而B因素对提出率的影响没有显著性差异，因A₂>A₃>A₁，B₃>B₂>B₁，C₁>C₃>C₂,故应选A₂B₃C1为盐酸小檗碱提取的最佳方案，即将黄连加工成粗粉，用8倍量0.5%硫酸溶液为溶媒，渗漉法提取。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2000:251

[2]周学勤，王迎春,张耀东，等.紫外分光光度法测定胃康宁片中盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志，2003，23(10):603-604

[3]佟少辉，李娜，蔡玉华.高效液相色谱法测定五柏参洗液中盐酸小檗碱的含量[J].中国医药导报，2008，5（12）：19,62

[4]岑志芳.正交设计法优化川黄柏中盐酸小檗碱的提取工艺[J].中成药,2005,27(6):732-733

(收稿日期：2009.03.10)