联合用药预防激素性股骨头坏死对血浆一氧化氮含量的影响

陈秀琴　李景田　邹锦慧　张慧明　黄　伟　李佰灵　周小璜

【摘要】 目的 观察联合用药预防激素性股骨头坏死对血浆NO含量的影响，探讨联合用药预防的作用机制。方法 30只兔随机分成三组：对照组同期肌内注射生理盐水；激素组是给予糖皮质激素肌注；治疗组在给予同剂量糖皮质激素同时，每日使用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠；观察股骨头组织学变化，用免疫组化技术检测血浆NO含量的变化。结果 激素组股骨头软骨下骨小梁稀疏、断裂，脂肪细胞直径增大，空骨陷窝较多，血浆NO含量显著低于对照组；治疗组股骨头软骨下骨小梁结构较正常，血浆NO含量显著高于激素组。结论 联合应用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠能预防和减缓激素性股骨头的发生，血浆NO含量升高是联合用药预防的作用途径之一。

【关键词】糖皮质激素；股骨头坏死；一氧化氮

Effect of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head on the content of nitric oxide in plasma

CHEN Xiu-qin,LI Jing-tian,ZOU Jin-hui,et al.Department of Physiology,Medical College of Shaoguan University,Guangdong 512026,China

【Abstract】 Objective To observe the effect of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head on the content of nitric oxide in plasma in order to investigate the role of the joint drug in the prevention mechanism.Methods Thirty rabbits were divided randomly into 3 groups:group A,guoup B and group C.Rabbits in group A were injected with normal saline; rabbits in group B were treated with glucocorticoid; rabbits in group C were treated with glucocorticoid as that in group B,and meanwhile,orally received the panax notoginseng saponins,zhibituo and alenduonate for 8 weeks.Histopathological structure and the content of nitric oxide in plasma were observed.Results The trabecula of femoral head of the B group changedthinner and more sparse,the bone marrow cavity with edema and large fatty cells were also observed and the content of nitric oxide in plasma of group B was significantly lower than those of group A.The trabecula of femoral head of the C group was normal and the content of nitric oxide in plasma of group C was significantly higher than those of group B.Conclusion The Zhibituo,Panax notoginseng saponins and Alenduonate may prevent steroid-induced necrosis of femoral head and the rising of the content of nitric oxide in plasma was one of the way of drugs preventing steroid-induced osteonecrosis of the femoral head.

【Key words】Glucocorticoid; Necrosis of femoral; Nitric oxide

激素性股骨头坏死的发病率占非创伤性股骨头坏死首位，并有增高趋势，已引起广泛的重视。但目前关于激素性股骨头缺血性坏死的研究多集中在治疗已形成的坏死，对在使用激素过程中如何预防股骨头坏死，研究较少^[1]。本课题组在建立激素性股骨头坏死动物模型的过程中，采用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠联合用药进行预防性治疗，结果证实联合用药预防可提高股骨头血流量，改善骨组织结构和血液流变学指标，预防或减缓激素性股骨头坏死^[2，3]。本实验是进一步观察联合用药对血浆一氧化氮(nitric oxide，NO)含量的影响，探讨联合用药预防激素性股骨头坏死的作用机制。

1 材料和方法

1.1 实验动物 成年新西兰大白兔30只，不分雌雄，体质量(2.5±0.5)kg，普通级，所有动物在同等条件下饲养，自由摄水和摄食，动物和饲料均由广东省实验动物中心提供。

1.2 药品 血塞通片(主要成分为三七总皂甙，玉溪市维和制药有限公司，生产批号200410290，25 mg/片)；脂必妥片(主要成分为山楂、白术、红曲，成都地奥九泓制药厂，产品批号0410063，350 mg/片)；阿仑膦酸钠片(主要成分为4-氨基-1-羟基亚丁基-1，海南曼克星制药厂生产，批号 040501，5 mg/片)；(河南天康制药有限公司生产，生产批号 040905，5 g /L)。

1.3 实验方案 动物先适应实验环境1周后，随机分为对照组、激素组、治疗组，每组10只。对照组每周肌注1 ml生理盐水2次(星期一和星期四，下同)；激素组每周2次肌注地塞米松磷酸钠注射液1 ml；治疗组每周2次肌注地塞米松磷酸钠注射液1 ml，从注射地塞米松第1天开始每天灌喂血塞通25 mg、脂必妥350 mg和阿仑膦酸钠5 mg。三组动物均每周2次肌注青霉素5万U/只，预防感染，连续用药8周。停药1周后三组动物同时进行有关指标检测。

1.4 NO的测定 通过测定血浆的NO-3浓度间接反映NO的含量，试剂盒购自南京建成生物工程研究所，采用硝酸盐还原酶还原法，应用722光栅分光光度计进行自动比色读数。

1.5 形态学观察 将动物股骨头沿冠状面中间劈开，将一半股骨头用10%福尔马林固定、5%硝酸溶液脱钙后，石腊包埋，苏木精-伊红染色，光镜下观察形态学变化，任取10个高倍视野内的骨陷窝，计数空骨陷窝，求空骨陷窝率。

1.6 统计学方法 数据均用SPSS 10.0软件进行处理，多组间比较采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 光镜观察 对照组股骨头软骨下骨小梁结构正常，脂肪细胞与造血细胞比例正常(图1A)，空骨陷窝数为(10.38±3.78)；激素组股骨头软骨下骨小梁稀疏、断裂，脂肪细胞直径增大，空骨陷窝较多(24.78±7.87)，呈现出股骨头坏死早期的病理变化(图1B)；治疗组股骨头软骨下骨小梁结构较正常，脂肪细胞较少、较小，骨小梁较稀疏、未见断裂，空骨陷窝较少(15.22±5.49)(图1C)。

A：对照组骨小梁结构和脂肪细胞比例正常；B：激素组股骨头骨小梁稀疏、断裂，脂肪细胞肥大；C：预防治疗组骨小梁结构正常，骨陷窝饱满

图1 光镜下骨结构(HE染色×100)

2.2 血浆NO含量 各组动物血浆NO含量见表1。激素组NO含量明显低于对照组和治疗组，而治疗组的NO含量较对照组略低。激素组与对照组之间、激素组与治疗组之间NO含量的差异均有统计学意义(P<0.01)，而治疗组与对照组之间NO含量无显著性差异。

3 讨论

有文献报道，联合运用血塞通、脂必妥和阿仑膦酸钠进行预防性治疗，可提高股骨头血流量，既能改善骨组织结构^[2]，又能改善血液流变学指标^[3]，能预防或减缓激素性股骨头坏死。本研究发现，激素组股骨头软骨下骨小梁稀疏、断裂，脂肪细胞直径增大，空骨陷窝较多；而联合用药进行预防性治疗后，治疗组股骨头软骨下骨小梁结构较正常，提示联合用药能预防或减轻骨组织结构改变。本结果符合上述研究结论。

NO是一种源于内皮细胞的松弛因子(EDRF)^[4]，是L-精氨酸在NO合成酶和还原型辅酶Ⅱ作用下，通过体内途径合成的。内皮细胞产生的NO能松弛血管平滑肌^[5]，使血管舒张，抑制血小板凝集^[6]，改善组织灌流。正常机体由于经常受到搏动性血流的不断刺激，血管内皮细胞持续释放NO，使血管系统维持一种松弛状态，保证组织的正常灌注。本实验观察到，激素组血浆NO含量明显低于对照组(P<0.01)，而联合用药进行预防性治疗后，治疗组血浆NO含量较激素组明显上升(P<0.01)。激素性股骨头坏死伴随着血浆NO含量降低，说明NO含量减少是激素性股骨头坏死的可能机制之一，这与刘长安等^[7]和沙启乐等人^[8]的报道一致。而联合用药预防激素性股骨头坏死的同时，血浆NO含量升高，说明NO含量升高是联合用药预防激素性股骨头坏死的作用途径之一。

在激素性股骨头坏死中，由于血管内皮细胞损害，处于血栓形成的高危状态，任何原因引起上述异常的加剧，均可能导致股骨头滋养血管内微血栓形成，导致股骨头的坏死。脂必妥具有调脂、降脂作用^[9]。血塞通的主要成份是三七总皂苷，能够抑制血小板聚集，降低血浆黏度^[10]。联合用药预防激素性股骨头坏死的可能机制是通过脂必妥与血塞通相互配合，既降低血脂，降低血浆黏度，又能改善微循环，改善血管内皮功能，维持正常血浆NO水平，从而防止微血栓形成，改善股骨头血供，预防了股骨头的坏死。

参 考 文 献

［1］ 刘慧松,董天华.藻酸双酯钠、二磷酸盐联合应用对酒精性股骨头坏死预防作用的实验研究.苏州大学学报(医学版),2003,23(5):525-528.

［2］ 李景田,邹锦慧,吉燕翔,等.预防用药对激素性股骨头组织结构和血流量的影响.解剖学研究,2006,28(2):100-102.

［3］ 李景田,邹锦慧,吉燕翔,等.预防用药对激素性股骨头血流量和血液流变学的影响.中国血液流变学杂志,2006,16(2):178-181.

［4］ Palmer RMJ.Nitric Oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor.Nature,1987,327:524-525.

［5］ Kisher CT,Robillard JE,Bohiken DP.Glucocorlicoid stinulation of blood coagulation factor activities in the fetal lanh.Lab Clin Med,1983,101:569.

［6］ Schultz R.Role of NO in vascular snooth muscle.Tips,1994,235:317.

［7］ 刘长安,张卫平,周吉怀,等.激素性股骨头坏死血浆一氧化氮含量的变化.中华实验外科杂志,1998,15(6):547-548.

［8］ 沙启乐,陈晓亮,王英振,等.激素性股骨头坏死中内皮素和一氧化氮含量的变化.中国骨伤,2002,15(6):349-351.

［9］ 徐济民,陈曙霞,胡婉英,等.脂必妥与安慰剂治疗高脂血症的随机双盲多中心研究.新药与临床,1997,16:47-51.

［10］ 石淋,范盘生,吴玲,等.三七总皂苷升高颈动脉前列腺素I2及降低血栓素A2.中国药理学报,1990,11:294-298.