椭圆叶花锚中熊果酸含量的测定

李志军

摘要用薄层色谱法和反相高效液相色谱法对青海两地区野生椭圆叶花锚中熊果酸含量进行定性定量分析。结果表明,超声法提取椭圆叶花锚中的熊果酸含量较高,青沙山地区花锚中熊果酸含量高于大通宝库乡。

关键词花锚;熊果酸;反相高效液相色谱;含量测定

中图分类号S58;Q946文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)11-0016-01

椭圆叶花锚(Halenia elliptica D. Don)为龙胆科花锚属植物,是藏药中用于治疗肝胆系统疾病的常用植物药,泛称“藏茵陈”。花锚的主要化学成分为山酮(Xanthone)、黄酮(Flavone)和三萜(Triterpene)类化合物,已经分离鉴定了15种山酮和黄酮成分。熊果酸体外对G+和G-菌及酵母菌均有抗菌活性,还有抗糖尿病、抗溃疡及降低血脂的作用。近年来的研究显示,熊果酸除具有抗突变、抗促癌、抗氧化作用外,对消化道肿瘤细胞和白血病细胞还有细胞毒和诱导细胞凋亡的作用。

1材料与方法

1.1供试材料

供试材料为椭圆叶花锚,于2008年8月初采自青海大通宝库乡和平安青沙山,将地上部分自然阴干,粉碎后备用。

1.2仪器与试剂

1.2.1仪器。Waters515高效液相泵,Waters 2996DAD检测器,Waters Empower色谱工作站,Waters色谱柱恒温箱,WFH-203B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司生产),电子分析天平,KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司生产),RT-9型中药粉碎机(浙江省缙云县超力机械厂生产),硅胶Gf 254薄层板(青岛海洋化工生产)。

1.2.2试剂。甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂生产),娃哈哈纯净水,氯仿、乙酸乙酯、甲醇、浓硫酸、磷酸均为分析纯。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所生产),纯度均大于98%。

1.3实验方法

1.3.1对照品溶液制备。准确称取熊果酸对照品,加甲醇制成160μg/mL的熊果酸对照品溶液。

1.3.2样品溶液制备。分别取两地花锚样品,每份样品各2.0g,5次重复。将称好的样品置于具塞锥形瓶中,准确加入20mL体积分数为95%的乙醇,超声处理2h,过滤,滤渣用95%的乙醇洗涤2次,合并滤液,于25mL容量瓶中定容,摇匀,静置。取适量上述样品液过0.45μm微孔滤膜,在选定的色谱条件下测定有效成分含量。

1.3.3熊果酸鉴别。取样品溶液和对照品溶液各10μL点于同一硅胶G板上,以氯仿∶乙酯(体积比)=1∶1为展开剂,展开后取出,晾干。以硫酸∶甲醇(体积比)= 1∶2为显色剂,置烘箱中烘至显色清晰。在样品色谱中,与对照品相应的位置上,显相同紫红色的斑点。

1.3.4熊果酸含量测定的色谱条件。THERMO C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流速1.0mL/min;柱温30℃;流动相甲醇-0.4%磷酸(85∶15);检测波长215nm;色谱分离图见图1。

2结果与分析

2.1线性关系考察

用25μL微量进样器吸取熊果酸160μg/mL 对照品溶液2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、12.0μg注入液相色谱仪,记录峰面积,以熊果酸对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,熊果酸在0.32~1.60μg之间线性关系良好。回归方程为y=1 025 388 x-103 368.8(R2=0.999 2)。

2.2 精密度实验

准确吸取熊果酸对照品溶液5μL,分别重复进样5次,峰面积积分值RSD为0.93%。

2.3稳定性实验

准确吸取熊果酸样品溶液各5μL,于0h、3h、6h、9h、12h

测定峰面积积分值,RSD为1.09%。

2.4重复性实验

各取同一样品5份,分别按照含量测定项下的方法测定,记录熊果酸面积积分值,RSD为1.56%。

2.5加样回收率

分别取已知含量的5份花锚样品各约1g,精密加入熊果酸对照品,按“1.3.2”法提取,在原色谱条件下测定,计算回收率,平均回收率为96.51%。

2.6花锚样品中熊果酸的含量

分别取每份样品溶液10μL进行分析,并测定峰面积积分值。计算得青沙山地区花锚熊果酸质量分数为0.234%,大通地区花锚熊果酸质量分数为0.153%。可以看出,青沙山地区花锚品质较好。

3结论

3.1提取方法的选择

比较乙醇超声和乙醇回流提取方法发现,超声提取熊果酸含量较高,而且超声法所用时间短,设备简单,操作方便。

3.2流动相选择

结合本实验结果并参考前人研究,甲醇和H3PO4(0.4%)作为流动相效果较好。

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