酶抑制法检测蔬菜有机磷和氨基甲酸酯类农药残留试验

王志波

（江苏如皋市农产品质量检验测试中心，226500）

酶抑制法检测蔬菜有机磷和氨基甲酸酯类农药残留试验

王志波

（江苏如皋市农产品质量检验测试中心，226500）

根据行业标准《NY/T448-2001》，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对江苏如皋市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了有机磷和氨基甲酸酯类农药残留检测。检测结果显示，蔬菜合格率为97.7%，酶抑制法具有检测时间短、成本低、操作简便等特点，是目前我国控制农药残留的一种有效的初筛方法。

农药残留 速测 酶抑制

在人们广泛关注食品质量安全的今天，作为监控农产品质量安全的最直接有效的手段——蔬菜农药残留速测技术得到迅速发展。蔬菜农药残留速测法主要有酶抑制法和化学试剂速测法两种。它们都具有快速、简便、灵敏、成本低等特点，在基层监督部门、蔬菜生产基地及市场得到广泛应用。本文根据行业标准《NY/T448-2001》，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对江苏如皋市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了检测。

1 材料与方法

1.1 试验材料

检测仪器有RP-410速测仪，T-200型电子天平，电热恒温培养箱，可调移液枪（10～100 μL；1～5 mL），配套玻璃仪器及其他配件。

试剂配置了pH值为8的缓冲液，乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂粉末分别加10 mL缓冲液配置成溶液，待用。

1.2 试验方法

①试验原理 根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，将这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。如蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类的农药残留或残留量较低，酶的活性就不会被抑制，试验中加入的基质就被酶全部或部分水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑制，试验中加入的基质就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计来测定反应前后吸光度的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯类农药的残毒情况。

②检测步骤 取2 g样品（非叶菜类取4 g）切碎，放入提取瓶中，加入20 mL缓冲液，振荡2～3 min，倒出提取液，静止5 min，用移液枪移取3 mL提取液上清液于小试管中，加入50 μL酶，50 μL显色剂，混匀后于37～41℃下培养30 min，再分别加入50 μL底物，混合后倒入比色皿中，于412 nm波长下比色。取3 mL缓冲液，其他步骤同样品测定，得出空白试验，作对照。

2 结果与分析

2.1 检测标准

当抑制率＜70%时，说明基本上不存在农药残留；当抑制率≥70%，说明肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。抑制率一般在-10%～110%之间，一旦检测结果超出此范围，即说明操作过程中有失误的地方，需要重新检测。

表1 用酶抑制检测法检测青菜等蔬菜农药残留结果

2.2 不同种类蔬菜农药残留情况

分别对取自生产基地和市场的青菜、大白菜、生菜、菠菜、花菜、包菜、刀豆、豇豆、紫茄进行检测。检测结果见表1。从检测结果来看，大白菜的抑制率为97.7%，大于70%，说明大白菜中肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药。其余样品抑制率均小于70%，均为合格样品。本次检测的总体合格率为88.9%，总体情况较好。

3 小结与讨论

测定值与农药残留呈正相关，测定值越高，说明农药残留越高。在比色测定中，酶活性愈高，吸光度值愈低。当样品提取液中有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药存在时，酶活性受到抑制，吸光度值则较高。据此可判断样品中有机磷农药或氨基甲酸酯类农药的残留情况。此外，如果样品提取液用氧化剂氧化，则可提高某些有机磷农药的抑制率，因而可提高其测定灵敏度，过量的氧化剂再用还原剂还原，以免干扰测定。此方法最关键的试剂是胆碱酯酶，应统一标准，应选用对甲胺磷较敏感以及活性较高的胆碱酯酶。

4 评价

酶抑制检测法操作简单、快速、灵敏、经济。该方法的研究和应用，对市场上含有机磷、氨基甲酸酯类农药的蔬菜进行初筛选，防止中毒事故发生，净化蔬菜市场，加强批发市场上上市蔬菜的管理，威慑不法商贩和菜农滥用农药，对大量抽检样本快速进行初筛，减少实验室仪器分析的工作量起到了较大作用，同时该方法在一定程度上可让老百姓吃上相对安全的蔬菜。为此农业部还专门对蔬菜上农药残留快速检测法制定了行标，代号为NY/T448-2001，适用于叶菜类（除韭菜）、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类（除胡萝卜、茭白等）中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、杀扑磷、敌敌畏、克百威等近20种高、中毒有机磷、氨基甲酸酯类农残速测。但酶抑制检测法也有它的局限性，此方法只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药，不适合其他农药残毒检测，且不能定量检测，所以，当用此方法检测出有残毒问题的蔬菜时，如果要作为仲裁处理，应送到有关部门进一步用气相色谱等仪器进行定量和定性分析，其结果方可作为最终结论性数据。

[1]李顺，纪淑娟，孙焕.酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的研究现状及展望[J].食品与药品，2006，8（7）：29-30.

[2]NY/T448.2001无公害蔬菜、水果农药残留检测标准[S].

[3]裘正军，陆江峰，何勇.基于酶抑制法的农产品农药残留快速检测系统及影响因素分析[J].农业工程学报，2007，23（9）：229-33

[4]沈体忠，孙光忠.天门市蔬菜农药残留例行监测结果与对策思考[J].湖北植保，2006（5）：18-19.

[5]蓝妮春.蔬菜农药残留原因及其控制[J].广西植保，2006，19（2）：34.

Detection Experimet of Organophosphate and Carbamate Pesticide Residues in Vegetable with Enzyme Inhibition Method

WANG Zhibo

Vegetable samples collected from wholesale markets,farmer markets,supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NY/T448-2001).The results showed that the pass-rate was 97.7%.The enzyme inhibition method only needs short time,low cost,simple operation,and it becomes an effective initial method for controlling pesticide residues in China nowadays.

Pesticide residues;Rapid test;Enzyme inhibition

10.3865/j.issn.1001-3547.2009.18.027

王志波（1981-），男，助理农艺师，副主任，主要从事农产品质量检验测试工作，电话:13962708462。E-mail:rgwzb@126.com

2009-05-06