白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏结果分析

于洪波

【摘要】 目的 评价白带中白色念珠菌的致病性和指导抗真菌药物的合理使用。方法 对大庆市中医医院2003年1月至2004年12月白带标本中分离的300株白色念珠菌进行蛋白酶测定，同时测定氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌浓度（MIC）。结果 300株白色念珠菌全部检出蛋白酶，其中蛋白酶活力高、中、低检出率分别为83．7%（251株）、12．7%（37株）、4．0%（12株）。4种抗真菌药物的耐药率分别是17．3%、11．3%、63．3%和44．6%。结论 白带中白色念珠菌具有致病性，临床应密切关注。

【关键词】白色念珠菌；白带；蛋白酶；耐药性

白色念珠菌是人体正常菌群之一，主要寄生于人体的体表及口腔咽喉等部位，是引起女性生殖道感染的常见菌。笔者对我院2003年1月至2004年12月300株白带标本分离的白色念珠菌酸性蛋白酶（acid proteinase，AP）以及白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药性进行检测，以期阐明白带中白色念珠菌的致病性和耐药性，指导临床合理治疗。

1 资料与方法

1．1 材料

1．1．1 菌珠 我院检验科2003年1月至2004年12保存的白带标本中分离的白色念珠菌300株。经形态学、芽管生成、假菌丝、厚膜孢子、糖同化等试验系统鉴定，确定为白色念珠菌。

1．1．2 培养基 哥伦比亚血平板（重庆市庞通科贸有限公司）；产酶培养基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，蛋白胨20．0 g/L，pH4．5^[1]；YGM-牛奶培养基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，琼脂10．0 g/L，pH4．5^[1]。灭菌后冷却到50℃加脱脂牛奶（浓度为1．0%）。培养基厚度：9 cm直径平板准确加入25 ml培养基，约4．0 mm厚。

1．1．3 药敏测定板 法国生物梅里埃公司生产的酵母真菌药敏测定板ATB?FUNGUS2。

1．2 方法

1．2．1 AP活力的恢复 用产酶培养基37℃增菌24 h，转种于哥伦比亚血平板37℃培养24 h，用来恢复白色念珠菌的产酶等生物学活性，保存于4℃备用。

1．2．2 白色念珠菌AP活力测定^[1]试验菌株点种于YGM-牛奶平板上，37℃培养72 h后，用游标卡尺测量菌落及其周围透明环的直径，以透明环直径/菌落直径（R）来判断酶活力的大小。

1．2．3 抗真菌药物耐药性测定 严格按照说明书进行操作，结果按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准进行敏感、中介和耐药的判定，两性酶素B最低抑菌浓度（MIC）≥2 mg/L为耐药。

1．3 统计学方法 采用WHONET5．2统计学软件进行统计分析。

2 结果

2．1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周围均出现透明环，R的范围是1．61～6．29，按R大小将试验菌株分为高活力（R≥3．0）251株，占83．7%；中等活力（2．0≤R＜3．0）37株，占12．7%；低等活力（R＜2．0）12株，占4．0%。

2．2 300株白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性 300株白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率为17．3%（52/300）、11．3%（34/300）、63．3%（190/300）、44．6%（134/300）。

3 讨论

AP的检测方法有多种，其中牛奶平板检测法具有简单、灵敏、不需染色可直接观察结果等优点。本实验采用YGM-牛奶平板法，检测了300株从白带标本分离的白色念珠菌AP，结果其产酶率达到100%，且高活力达83．7%，而低活力仅为4．0%，中度活力占12．7%，与国内外相关报道一致。

白色念珠菌的致病性由AP、荚膜及黏附性、芽管生成和疏水性等构成。其中AP为主要的致病因子，有文献报道白色念珠菌AP的活性与毒力（r=0．994 6）、黏附（r=0．994 4）密切相关^[1]。菌体表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子，疏水性白色念珠菌较亲水性白色念珠菌产生芽管的速度快，其黏附组织、塑料、导管和人造瓣膜的能力强。

笔者测得白带标本中白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别是17．3%、11．3%、63．3%、44．6%，明显高于呼吸道中的白色念珠菌^[2-4]，说明白带中白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药性已相当严重，这可能与临床局部使用过多唑类制剂，抗真菌药物选择压力增大有关。因此，临床对治疗白色念珠菌阴道炎时应慎用抗真菌药物，避免耐药性的积累。真菌耐药除与选择压力有关外，目前研究认为白色念珠菌耐药性的产生原因为：①麦角甾醇生物合成通路中关键靶酶的变化；②真菌胞膜内药物浓度的降低；③生物被膜的形成等。现已发现许多白色念珠菌感染的发生与生物被膜形成有关^[5]。

本研究通过对白带标本中白色念珠菌AP的测定和对常用抗真菌药物耐药性分析，证明白色念珠菌具有相当的致病性，且对常用抗真菌药物已产生不同程度的耐药，说明在白带标本中白色念珠菌分离培养和药敏分析十分重要。

参考文献

［1］ 黄长武，李兴禄，邱君风，等．白色念珠菌在呼吸道中致病性的研究．中华医院感染学杂志，2004，14（7）：721-723．

［2］ 刘晓敏，林婷．189株肺部酵母样真菌的鉴定及E-test法药敏分析．中国医学检验杂志，2004，5（2）：108-109．

［3］ 沈翠芬，张晓祥．临床标本的真菌培养和药敏分析．中华医院感染学杂志，2003，13（4）：382-383．

［4］江艳．93例呼吸道白色念珠菌感染的临床调查与耐药现状分析．四川省卫生管理干部学院学报，2003，22（3）：196-197．

［5］ Douglas LJ．Candida biofilms and their role in infection．Trends Microbiol，2003，11（1）：30-36．