贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性研究

袁　洁　杨学辉　何海永　金　星

摘要采用生长速率法测定了采自贵州省26个县(市)不同年份稻瘟病标样175个稻瘟病菌单孢菌株对稻瘟灵的抗药性。结果表明，贵州省主要稻区都有抗稻瘟灵菌株出现，但大部分抗性菌株的抗药性表现为低抗水平。黔东南、贵阳、遵义地区抗性菌株频率明显高于其他几个地区，其抗性菌株频率分别为10．86％、10．29％和8．00％。

关键词植物保护学；稻瘟病菌；稻瘟灵；抗药性

中图分类号纪80年代中国引进稻瘟灵(富士一号，isoprothio－lane；)以来，由于其高效、内吸特性使之成为全国稻区防治稻瘟病的主要药剂。但是，经过20多年的广泛使用，稻瘟病菌田间抗性日益严重。根据袁洁等的研究，贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵敏感性已下降。为了明确贵州不同稻区稻瘟病菌抗药性菌株的抗性水平和分布情况以及稻瘟灵在生产上继续使用前景，从2001年开始进行贵州省水稻主产区稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性研究。

1材料和方法

1．1供试菌株和药剂

2001—2004年在贵州省8个地区26个县(市)100多个品种上采集穗颈瘟病标样200余份。通过单孢分离，获得400多个单孢菌株，选择其中175个有效单孢分离菌进行抗药性测定，其中包括贵阳地区23株，遵义地区23株，黔东南州49株，毕节地区23株，黔南州14株，黔西南州26株，六盘水地区14株，铜仁地区3株。

40％稻瘟灵乳油(富士一号)，日本农药株式会社生产，浙江海宁化丁实业有限公司分装。

1．2测定方法

将供试药剂配成一定浓度的稀释液，各取1mL药液至直径9 cm的培养皿中，再加入9mL酵母淀粉培养基，混匀后制成递度为4、5、6．67、10、20、40ug／mL。的含药平板。

将预培养7d的稻瘟病菌菌落制成直径为5mm的菌碟，挑取菌碟置于含药平板中央，28℃恒温培养，以不含药平板为空白对照，8d后测量各处理的菌落直径，计算药剂对菌丝生长的抑制百分率。

1．3数据统计分析

通过各处理浓度的对数(x)和菌丝生长抑制率的几率值(y)进行回归分析，计算出稻瘟灵对各参试菌株的抑制中浓度EC,o值，根据病菌的敏感性频率分布建立稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感基线，确定抗性水平和抗性菌株频率。

抗性水平＝供试菌株ECso／敏感基线。抗性水平≤1为敏感菌株；1<抗性水平≤3为低抗菌株；3<抗性水平≤lo为中抗菌株；抗性水平>10为高抗菌株。根据抗性水平将参试菌株划分为敏感性菌株和抗性菌株。再根据抗性菌株在群体中的出现频率计算出抗性菌株频率。抗性菌株频率＝抗性菌株／供试菌株X100％。

2结果与分析

2．1不同地区稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性

从表l知，不同地区的稻瘟病菌群体对稻瘟灵的敏感性有一定差异，其中遵义地区菌株的敏感性最差，平均EC为9．27ug／mL，其次是贵阳地区(8．39"8／mI。)、六盘水地区(7．32ug／mL)、黔东南州(EC＝6．85 ug／mL)、黔南州(EC＝6．66ug／mL)、黔西南州(EC＝6．23ug／mL)、毕节地区(ECso＝6．02 PZ／mL)、铜仁地区(EC＝4．47ug／mL)。

2．2敏感基线的建立

采用生长速率法测得2001—2003年的146株稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感性呈连续性分布(图1)，EC值最小为1．33ug／mL最大为24．58ug／mL，相差18．48倍。不同敏感性的频率分布呈不规则的正态分布(图2)，说明其中一部分菌株已表现抗药性。求得左侧正态分布峰的平均EC＝6．8027--5．7947ug／mL(P＝0．05)，根据野生敏感型病原群体对药剂敏感性为正态分布的原理，本研究将6．8027ug／mI。定为稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感基线。

2．2抗药性测定及抗性评价

利用本研究建立的敏感基线对2001—2004年贵州省不同地区的175个稻瘟病菌株进行抗药性测定，结果表明(表2)，8个地区从田间均分离到了抗性菌株，抗性菌株频率分别为黔东南lo．86％、贵阳10．29％、遵义8．00％、毕节5．7l％、黔西南5．14％、黔南4．57％、六盘水3．43％和铜仁o．57％。大部分菌株的抗性水平集中在l一3倍，个别菌株抗性水平达到3倍以上。从表2看出，最高抗性水平和抗性菌株频率出现较高的地区主要在黔东南、贵阳和遵义，最高抗性水

平分别为：遵义3．61、黔东南2．87和贵阳2．13；抗性菌株频率分别为：遵义8．co％、黔东南10．S6％、贵阳10．29％。这一结果与贵州省稻瘟病的发生和防治基本吻合，因为这3个地区的水稻生产和病害防治水平都相对较高。

3讨论

彭云良等测定稻瘟病菌对稻瘟灵的抗性是以15ug／mL浓度下病菌生长抑制率小于或大于57．26％来确定抗性或敏感菌株的。本研究表明，146个菌株中对稻瘟灵最敏感菌株的EC仅为1．33ug／mL而且4ug／mL浓度下对稻瘟病菌的生长抑制率达到75％以上。146个菌株对稻瘟灵的敏感性分布呈连续性，病菌群体敏感性频率分布呈、祁之秋等‘建立病原菌对正态分布，平均EC。为(6．802 7i5.794 7)ug／mL(P＝0．05)。参考周明国杀菌剂敏感性墓线的方法和原理，将6．8027ug／mL定为敏感基线，比较符合贵州省田间稻瘟病菌群体对稻瘟灵的实际抗性水平，该基线的建立可作为今后田间抗药性监测的依据。

利用本研究制定的敏感基线对贵州省主要稻区175个稻瘟病菌株的抗药性测定结果表明，贵州省8个地区都有抗稻瘟灵菌株出现，但其抗性水平主要集中在低抗水平。因此，只要加强田间抗药性监测，注意与其他农药的交替和轮换使用，稻瘟灵在贵州稻区仍可作为防治稻瘟病的有效药剂使用。