水禽心包积液-肝炎综合征的诊断及防控

摘 要：水禽心包积液-肝炎综合征主要是由Ⅰ群禽腺病毒血清4型感染引起的一种水禽传染病，感染后主要引起包涵体肝炎和心包积液。该病传播广泛且迅速，给我国水禽养殖业带来了巨大的经济损失。文章概述心包积液-肝炎综合征的病原、诊断方法和防控措施等，旨在为该病的诊断及防控等提供一定的参考。

关键词：心包积液-肝炎综合征；禽腺病毒；诊断；防控

中图分类号：S858.3 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2024）09-0050-03基金项目：财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系基金资助（CARS-42-34）

第一作者：张红（1988—），女，硕士，助理研究员，主要从事禽病诊断及防治研究，E-mail：hzhang1012@163.com

通信作者：陈志峰（1977—），男，研究员，主要从事家禽营养与繁殖研究，E-mail：qqhr139@sina.com

收稿日期：2024-03-14

心包积液-肝炎综合征为一种严重威胁我国水禽养殖业健康发展的传染病，自2015年以来在我国大部分水禽养殖地区流行。根据流行病学调查和禽腺病毒的传播特性（垂直传播和隐性感染等），水禽对该病毒感染情况不可轻视，做好水禽腺病毒病的防控意义重大。

1 病原简介

禽腺病毒（Fowl Adenovirus，FAdV ）隶属于腺病毒科（Adenoviridae）、禽腺病毒属（Aviadenovirus）。FAdV分三个群，包括Ⅰ群禽腺病毒、Ⅱ群禽腺病毒和Ⅲ群禽腺病毒。Ⅰ群禽腺病毒分12个血清型，即FAdV-1～FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-9～FAdV-11。当前水禽腺病毒主要流行的血清型以FAdV-4型、FAdV-8b型为主，其中FAdV-4型主要引起心包积液-肝炎综合征[1]。FAdV为双链、无包膜DNA病毒。病毒粒子直径为70～100 nm，呈稳定的20面体对称结构[2]。FAdV基因组为42～45 kb，编码了多种结构蛋白和非结构蛋白。病毒颗粒主要结构蛋白包括纤突蛋白、五邻体蛋白、六邻体蛋白，其中纤突蛋白氨基酸序列较保守，参与病毒粒子包装，参与体液免疫，使机体产生中和抗体；五邻体蛋白在腺病毒粒子的顶点，负责病毒结构的维持，可与宿主细胞表面的特异性受体结合有很好的免疫原性，使动物体产生特异性抗体起保护作用；六邻体蛋含有型、群和亚群特异性抗体决定簇，有较好的免疫原性，与致病性相关[3]。

2 流行病学

1963年在美国首次报道该病，之后在多个国家流行。该病1976年在我国台湾省最早出现，随后在其他多个省份出现，2015年以来在我国河北、黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏等省均发生了疫情，呈快速暴发流行趋势[4]。该病在3～5周龄的肉鸭及鹅多发，发病鸭群多于3周龄开始出现死亡，4～5周龄达到死亡高峰，高峰期持续4～8 d，5～6周龄时死亡减少，整个病程为8～15 d，死亡率为20%～75%。本病即可水平传播，也可垂直传播；一年四季均能发生，夏秋季节多发。

3 临床症状

该病潜伏期短，以发病初期无明显先兆、突然倒地、两脚划空、数分钟内死亡为特征。感染流行期患病鸭、鹅表现精神沉郁、瘫痪等症状。被感染种鸭出现产蛋下降等症状，软壳蛋、砂壳蛋和血斑蛋等异常蛋增多。

4 剖检病变

对患病死亡的水禽进行剖检，可见心包内有渗出液，液体透明为淡黄色。肝脏肿大、出血、无弹性，肾脏肿胀、出血，肺部出血、水肿，胆囊肿大，胸腺出血。

5 诊断方法

一般结合发病水禽的临床症状及剖检病变做出初步诊断，确诊需进行病毒分离鉴定、血清学检测或分子生物学诊断方法。

5.1 病毒分离鉴定方法

可通过在病料中分离病原，并在显微镜下观察进行确诊，该方法准确、可靠，但耗时长。实验室分离病毒主要包括鸡胚接种和细胞接种。其中鸡胚接种是将病料中病毒易嗜的器官组织剪碎、研磨制备成悬液，过滤除菌接种SPF鸡胚，收集接种后收取尿囊液即可得到病毒液。细胞接种分离病毒是将制备的组织悬液接种于鸡肝癌细胞（LMH）或鸡胚肝细胞（CEL）等单层细胞，在培养箱中吸附1 h，弃掉接种的组织悬液，加入适量培养液，在72 h内进行观察，待细胞出现病变后即可收取病毒液；若在此期间细胞没有病变，需要继续盲传，直至五代未病变再弃去[5]。

5.2 血清学检测方法

血清学检测技术包括琼脂凝胶扩散法、酶联免疫吸附试验、中和试验和胶体金检测法。其中：琼脂凝胶扩散法是可溶性抗体抗原在凝胶中结合后形成沉淀线，从而确诊病原。该方法不需要仪器设备检测，肉眼可见，但耗时较长；酶联免疫吸附试验是将抗原或抗体包被到固相载体上，加入待测定的抗体或抗原，再加入相应的酶标记抗体，形成酶标记抗体复合物，再与该酶的底物反应，发生颜色的变化，借助仪器检测抗体或抗原的量。该方法操作简单，耗时短，需要特定的仪器设备；中和试验是用已知抗原检测血清中相应的抗体，也可用已知抗体检测相应抗原。该方法特异性强，但耗时较长；胶体金检测法是基于抗原抗体的特异性结合，在相应位置聚集产生肉眼可见的显色线。该方法操作简单，耗时短，但无法定量[6]。

5.2 分子生物学检测方法

分子生物学检测方法包括PCR检测技术、实时荧光定量PCR检测技术、环介导等温核酸扩增技术（LAMP）、核酸探针技术。PCR检测技术目前应用较广，耗时短，灵敏度准确度好。实时荧光定量PCR检测技术包括探针法和荧光染料法，具有比常规PCR检测技术更快速准确且能够定量等优点。LAMP与常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法相比，操作简捷、耗时短，无需仪器，结果肉眼可见，但引物设计难度相对较高。核酸探针技术是根据核苷酸碱基互补的原理，使用特异性基因探针识别特异的靶序列，进而达到定性或定量的目的，该方法准确性好、特异性强、耗时短，但成本高且存在放射性污染等问题。目前还没有能够同时检测出Ⅰ群禽腺病毒12种血清型的技术方法，在此方向上有待进一步研究。

6 防控措施

该病在水禽养殖密集的区域流行，做好水禽养殖场的饲养管理能够有效防控本病。养殖场对各种设备和环境严格消毒能够降低水禽感染腺病毒的概率，腺病毒对常规消毒剂普遍存在抵抗力，用0.5%戊二醛和0.2%的甲醛处理消毒后能够使该病毒失去感染性。在平时的饲养管理上应注意多通风，注意天气变化，减少换舍、调群等应激因素，可在饲粮中根据实际情况适当添加维生素和黄芪多糖等提高免疫力的药物，增强动物机体抵抗病毒的能力。因腺病毒可经种蛋垂直传播，所以种群的净化是预防该病的有效方法，且能够助力水禽养殖业高质量发展。

预防水禽心包积液-肝炎综合征，主要以接种疫苗为主。目前防控该病的疫苗有灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗。我国学者研发的FAdV-4型多联灭活疫苗有鸡新城疫、禽流感（H9亚型）、禽腺病毒病（Ⅰ群4型）三联灭活疫苗和鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（H9亚型）、禽腺病毒病（Ⅰ群4型）五联灭活疫苗。灭活疫苗易于制备、存储和运输，稳定性好，生物安全性高。FAdV-4弱毒疫苗的制备需要选出弱毒株，弱毒株可通过接种细胞或鸡胚传代致弱。也有研究者在无症状的鸡体内分离到FAdV-4，并将该毒株接种于SPF鸡，SPF鸡并没有发生水禽心包积液-肝炎综合征，但从泄殖腔拭子中可检测到FAdV-4，表明该毒株并不是致病株，但具有免疫原性，可用于弱毒疫苗的制备。弱毒疫苗保护时间相对较长，不稳定，有毒力返强的可能。基因工程疫苗不存在返祖风险，操作性强，目前关于禽腺病毒的基因工程疫苗的研发大多是将能够编码保护性抗原的基因片段克隆并表达[7]。禽腺病毒血清型很多，彼此之间几乎没有交叉保护，今后在禽腺病毒疫苗的研发中更应该倾向于能够同时预防多个血清型的多价疫苗。

如若养殖场未及时接种疫苗或接种疫苗后并没有起到预防效果，则发生疫情的养殖场应及时接种卵黄抗体。我国已有针对Ⅰ群FAdV-4型的卵黄抗体，为发生该疫情的养殖场提供一个有效的治疗方法，可降低经济损失。

参考文献：

[1] 迟丽丽，刘健，陈志远，等.禽腺病毒血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白在毕赤酵母中的优化表达[J].中国畜牧兽医，2023，50（08）：3056-3064.

[2] 王白玉.Hexon蛋白在禽腺病毒血清4型致病性中的作用及其机理研究[D].郑州：河南农业大学，2022.

[3] 宋佳诚.禽腺病毒五邻体（Penton）蛋白的表达纯化及应用[D].北京：中国兽医药品监察所，2021.

[4] 巩敏芝.用于高效预防功能添加剂的新型禽腺病毒载体系统构建[D].杨凌：西北农林科技大学，2023.

[6] 李鹏飞.禽Ⅰ群腺病毒病病原和抗体检测方法的建立及其在血清学调查中的应用[D].南京：南京农业大学，2017.

[7] 龙海川，张鹤平，苗立中，等.Ⅰ群禽腺病毒的分离检测方法与疫苗研究进展[J].中国家禽，2023，45（10）：76-83.