黑龙江省高致病性禽流感、新城疫免疫抗体集中监测情况与分析

摘 要：为评估高致病性禽流感疫苗和新城疫疫苗的免疫效果，以期对我省禽病防控政策制定提供数据支持，试验采用血凝试验和血凝抑制试验对黑龙江省13个地市采集的7 793份家禽血清样品分别检测H5亚型、H7亚型高致病性禽流感抗体水平，并对其中2 547份家禽血清进行了新城疫抗体检测。结果显示，2021—2023年H5亚型禽流感免疫抗体合格率依次为95.90%（Re-11株）、77.01%（H5-Re13株）和96.43%（H5-Re13株）；H7亚型禽流感免疫抗体合格率依次为94.37%（Re-3株）、77.96%（H7-Re4株）和96.60%（H7-Re4株），新城疫免疫抗体合格率依次为97.46%、83.66%和94.44%。13个地市免疫抗体监测结果显示，H5亚型禽流感免疫抗体合格率为82.88%～100.00%，H7亚型禽流感免疫抗体合格率为79.50%～99.01%，新城疫免疫抗体合格率为74.20%～100.00%；不同场点H5亚型禽流感免疫抗体合格率分别为规模场94.65%、散养户89.33%，H7亚型禽流感免疫抗体合格率分别为规模场95.03%、散养户87.74%，新城疫免疫抗体合格率分别为规模场96.13%、散养户89.23%。各项免疫抗体合格率均高于国家规定的70%，由此说明我省高致病性禽流感疫苗和新城疫疫苗免疫效果良好。

关键词：高致病性禽流感；新城疫；血清；免疫抗体；血凝抑制

中图分类号：S852.4 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2024）12-0026-07

高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza，HPAI）由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的急性传染病[1]，在禽类中传播快、危害大、病死率高。目前，已知的高致病性禽流感病毒（Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV）为H5亚型或H7亚型。禽感染HPAIV死亡率可达100%，导致重大经济损失。世界动物卫生组织（WOAH）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，同时HPAIV可以直接感染人并致人死亡，是重要的人兽共患病病原[2]。

新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）强毒株感染禽类引起的一种急性、烈性传染病，可感染200余种禽类[3-4]。世界动物卫生组织（WOAH）将新城疫列为必须报告的动物疫病，2022年我国农业农村部将其列为二类动物疫病。

疫苗免疫是防控HPAI和ND最直接、最有效的措施之一。为了评估HPAI和ND疫苗的免疫效果，构筑有效免疫屏障，切实保障家禽健康与动物产品质量。本研究对黑龙江省2021—2023年HPAI疫苗、ND疫苗的免疫抗体进行监测和分析，以期为我省HPAI和ND科学防控提供数据支持。

1" 材料与方法

1.1" 样品

采用配额抽样方法[5]采集全省13个地市养殖场/户的家禽血清或全血样品。根据《黑龙江省动物疫病监测与流行病学调查计划》，从每个地市的每个规模场随机采集血清样品不少于20份，每个散养户随机采集血清样品不少于5份。

采集家禽全血样品，将全血转移至2 mL无菌离心管中，500 g/min离心10 min，小心吸取上清装入1.5 mL离心管中，加盖并做好标记，与血清样品一起置-20 ℃冷冻保存、备用。

1.2" 主要试剂及仪器

主要试剂：禽流感病毒H5亚型（Re-11株）血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H5亚型（H5-Re13株）血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H7亚型（Re-3株）血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H7亚型（H7-Re4株）血凝抑制试验抗原，均为哈尔滨维科生物技术有限公司产品，鸡新城疫血凝抑制试验抗原为哈尔滨国生生物科技股份有限公司产品。

主要仪器：多道微量可调移液器（L-300 XLS型，RAININ公司）、离心机（miniSpin plus，艾本德公司）。

1.3" 检测指标及方法

1.3.1" 禽流感免疫抗体检测" 采用血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）检测H5亚型、H7亚型HPAI疫苗的免疫抗体，具体步骤按照GB/T 18936-2020《高致病性禽流感诊断技术》进行。依据《国家动物疫病免疫技术指南》，HPAI疫苗免疫效果判断标准：HI效价不低于24，判定为个体免疫合格；免疫合格个体数量占免疫群体总数不低于70%，判定为群体免疫合格。

1.3.2" ND免疫抗体检测" 采用HA和HI方法检测ND疫苗免疫抗体，具体步骤按照GB/T 16550-2020《新城疫诊断技术》进行。依据《国家动物疫病免疫技术指南》，ND疫苗免疫效果判断标准：HI效价不低于25，判定为个体免疫合格；个体免疫抗体合格数量占免疫群体总数不低于70%的判定为群体合格。

1.4" 统计与分析

应用Excel 2019和GraphPad Prism 8软件对检测数据整理、统计和分析。运用卡方检验分析试验结果，P＞0.05表示差异不显著，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2" 结果与分析

2.1" 样品来源

2021—2023年春秋两季集中强制免疫1个月后，采用配额抽样方法[5]共采集13个地市61个县（市/区）家禽样品7 793份用于HPAI疫苗免疫抗体监测，包括288个规模场的4 653份血清和363个散养户的3 140份血清，样品来源见表1。同时，对其中38个县（市/区）2 547份家禽血清进行了ND疫苗免疫抗体监测，包括78个规模场1 756份血清和117个散养户791份血清，样品来源见表2。

2.2" 不同年度免疫抗体监测结果

2021—2023年监测结果见表3。HPAI疫苗免疫后抗体监测结果表明，2023年H5亚型、H7亚型禽流感免疫抗体合格率最高，分别为96.43%和96.60%；2022年H5亚型、H7亚型禽流感免疫抗体合格率最低，分别为77.01%和77.96%。ND疫苗免疫抗体合格率：2021年最高，为97.46%；2022年最低，为83.66%。2021—2023年两种疫苗免疫抗体合格率均高于国家规定70%标准。

2.3" 不同地市免疫抗体监测结果

将监测结果按照样品来源地不同进行汇总分析，具体结果见表4。全省13个地市H5亚型禽流感免疫抗体合格率为82.88%～100%。J、M两个地市合格率最高，为100%；A地市最低，为82.88%。H7亚型禽流感免疫抗体合格率为79.50%～99.01%，J地市合格率最高，为99.01%；A地市最低，为79.50%。新城疫免疫抗体合格率为74.20%～100%，其中J、K两个地市的合格率最高，为100%；I地市最低，为74.20%。

2.4" 不同场点免疫抗体监测结果

不同场点免疫抗体监测结果见表5。HPAI疫苗免疫抗体：2021—2023年共监测全省13个地市288个规模场家禽血清样品4 653份，363个散养户家禽血清样品3 140份。ND疫苗免疫抗体：共监测全省13个地市78个规模场家禽血清样品1 756份，117个散养户家禽血清样品791份。规模场各项免疫抗体合格率为94.65%～96.13%，散养户各项免疫抗体总合格率为87.74%～89.33%，规模场的H5亚型、H7亚型禽流感和新城疫免疫抗体总合格率均极显著高于散养户的合格率（P＜0.01）。

3" 讨论

试验中HPAI疫苗免疫抗体监测的血清样品以鸡血清为主，少部分为鸭、鹅血清。监测结果表明，不同年度、不同场点、不同地市的H5亚型禽流感和H7亚型禽流感抗体总合格率均达到不低于70%的国家标准，表明我省家禽HPAI疫苗整体免疫效果良好。从不同年度的HPAI疫苗免疫抗体监测结果看，2022年H5亚型和H7亚型禽流感免疫抗体总合格率明显低于2021年、2023年的总合格率，原因可能与2022年国家调整了HPAI灭活疫苗种毒有关，H5亚型HPAI疫苗种毒由原来的代表株2.3.4.4b分支H5N1 Re-11株替换为代表株2.3.4.4h分支H5N6 H5-Re13株，H7亚型HPAI疫苗种毒由原来的H7N9 H7-Re3株替换为H7N9 H7Re4株。新疫苗株首免后并不是所有的家禽都能产生较高的抗体水平，群体越大，个体差异也越大；同时，只进行一次免疫接种的家禽，其抗体的滴度、整齐度和合格率可能都不理想。我省免疫抗体监测是在春秋两季集中强制免疫后一个月进行，大多数被检禽群只免疫了一次，所以2022年家禽HPAI疫苗免疫抗体水平相对较低。不同地市的免疫抗体监测结果显示，A地市HPAI两项免疫抗体合格率均为13个地市中最低，分析原因可能是A地市多在商品肉鸡场采样，因肉鸡生长周期短，出栏前通常只进行一次HPAI疫苗免疫，故A地市免疫抗体合格率最低[6]。从不同场点来看，规模场HPAI疫苗与ND疫苗免疫抗体合格率极显著高于散养户合格率（P＜0.01），其原因可能是规模化养殖场相对于散养户来说其免疫程序更加科学，饲养管理水平更高，疫苗的运输储存条件更加良好[7]，故规模场免疫效果更好。我省位于候鸟迁徙路线上，需做好家禽特别是水禽的疫苗免疫，重点防范野鸟源HPAI传播风险。

试验对来自13个地市38个县（市/区）2 547份家禽血清检测ND疫苗免疫抗体水平，其中2 400份血清达到ND个体免疫合格水平，免疫总合格率为94.23%。从不同年份来看，2022年ND免疫抗体合格率稍低，为83.66%，其他年度合格率均超过90%。从不同地市来看，I地市合格率最低为74.20%。从不同场点来看，规模场的合格率高于散养户。我省ND整体免疫水平超过国家规定70%的标准，表明我省ND疫苗整体免疫效果较好。试验中ND监测样品绝大多数来源于鸡，较小部分血清样品来源于鹅。目前我国家禽ND流行态势较为平稳，鸡ND防控效果较好，鹅ND强毒株污染面逐渐扩大[8]。国家新城疫参考实验室监测数据显示，近年来我国鸽群NDV检出率呈明显升高趋势[9]，提示我省在后续ND监测工作中可以增加除鸡以外其他家禽采样种类和数量，做好ND风险监测及预警。

根据流行病学原理，群体中个体免疫合格率达到一定水平可以有效控制个体之间的传播，疫病流行情况就会有效降低[10]。因此，疫苗接种后适时开展免疫效果监测，评估群体抗体水平十分必要。目前，最常用于HPAIV和NDV抗体检测的方法是HI试验和酶联免疫吸附试验。HI试验与病毒中和试验有很好的相关性，常常通过检测HI抗体效价来评估保护性免疫反应[11]。我省在每年春季和秋季集中免疫工作开展后，集中监测评价免疫效果，对于禽群抗体合格率未达到70%的养殖场/户，及时组织开展疫苗补免工作，构筑有效免疫屏障。

2004年以来，我国采用“扑杀+强制免疫”的防控策略，并于2005年以后对家禽实施HPAI疫苗强制免疫[12]，相关疫苗在我国家禽中大规模应用后，有效控制了我国H5、H7亚型HPAI疫情，也阻断了H7N9病毒对人的感染[13-14]。我国在上世纪80年代以来采取ND普遍免疫的防控策略[10]，ND的流行范围和危害程度有所下降。疫苗的应用使HPAI和ND在我国的流行整体呈下降趋势[12，15]，两种疫病防控取得了一定成效。但与此同时，疫苗应用带来的弊端也逐渐显现，例如大规模疫苗接种导致禽流感病毒的变异加快、分支增多[16]，防控难度增大。实施综合性防控已在家禽业达成共识，疫苗免疫结合加强饲养管理、提高生物安全水平、加大监测力度、消除传染源、降低病原扩散的风险等措施[16]，多措并举才能有效降低或消除HPAI和ND对家禽产业和公共卫生的危害[12]。

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Centralized Surveillance and Analysis of Immune Antibodies Against Highly Pathogenic Avian Influenza and Newcastle Disease in Heilongjiang Province

Abstract： In order to evaluate the immune efficacy of highly pathogenic avian influenza and Newcastle disease vaccines and provide data support for the formulation of poultry disease prevention and control policies in our province， The experiment used the methods of hemagglutination and hemagglutination inhibition to test the immune antibodies against H5 subtype and H7 subtype of highly pathogenic avian influenza in 7 793 poultry serum samples collected from 13 cities in Heilongjiang Province respectively， and 2 547 poultry serum samples were tested for Newcastle disease antibodies. The results showed that the qualified rates of H5 subtype avian influenza immune antibodies from 2021 to 2023 were 95.90%（Re-11 strain）， 77.01%（Re-13 strain）， and 96.43%（Re-13 strain）， respectively; The qualified rates of H7 subtype avian influenza immune antibodies were 94.37%（Re-3 strain）， 77.96%（Re-4 strain）， and 96.60%（Re-4 strain）， respectively. The qualified rates of Newcastle disease immune antibodies were 97.46%， 83.66%， and 94.44%， respectively. The monitoring results of immune antibodies in 13 cities showed that the qualified rate of H5 subtype avian influenza immune antibodies was 82.88% to 100.00%， the qualified rate of H7 subtype avian influenza immune antibodies was 79.50% to 99.01%， and the qualified rate of Newcastle disease immune antibodies was 74.20% to 100.00%; The qualified rates of H5 subtype avian influenza immune antibodies at different sites were 94.65% for large-scale farms and 89.33% for free range households， The qualified rates of H7 subtype avian influenza immune antibodies at different sites were 95.03% for large-scale farms and 87.74% for free range households， The qualified rates of ND vaccine immune antibodies at different sites were 96.13% for large-scale farms and 89.23% for free range households. The qualification rate of various immune antibodies is higher than the national standard of 70%， indicating that the immunization work of highly pathogenic avian influenza and Newcastle disease vaccines in our province is effective.

Keywords： Highly pathogenic avian influenza; Newcastle disease; Serum; Immune antibodies; Hemagglutination inhibition