结核杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术联合干扰素-γ释放试验对肺结核的诊断效能

【摘要】目的 探讨结核杆菌利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测（Gene Xpert-MTB/RIF）技术联合干扰素-γ释放试验（IGRA）对肺结核的诊断效能，为临床治疗提供参考。方法 选取2022年3月至2024年3月睢宁县中医院收治的78例疑似肺结核患者的临床资料，进行回顾性分析。所有患者均接受结核分枝杆菌（MTB）培养、Gene Xpert-MTB/RIF、IGRA检查，以MTB培养结果为金标准，分析Gene X-pert MTB/RIF联合IGRA对肺结核的诊断效能。结果 MTB培养结果显示：78例疑似肺结核患者中，阳性58例，阴性20例；联合检测结果显示：阳性72例，阴性6例。联合检测准确度为85.90%，灵敏度为94.83%，特异度为60.00%，阳性预测值为91.67%，阴性预测值为66.67%，均高于各项单一检测（均P<0.05）。结论 Gene Xpert-MTB/RIF联合IGRA诊断肺结核的价值较高，值得临床应用。

【关键词】结核杆菌；利福平；耐药性；实时荧光定量核酸扩增检测技术；干扰素-γ释放试验；肺结核

【中图分类号】R512.91 【文献标识码】A 【文章编号】2096-2665.2024.21.0112.03

DOI：f0ucP/mKDCHlJ+dLgROy/V1cQzGYoCUEIHe/Nnzmly0=10.3969/j.issn.2096-2665.2024.21.034

结核病是一种由结核杆菌引起的高发传染性疾病，主要通过飞沫传播，可侵袭人体多个器官（如肠道、肝脏、胃和肺等），且该疾病潜伏期较长，病情多呈慢性进展性发展[1]。早期准确诊断对提升患者治疗效果、改善预后具有重要价值。既往结核病的临床诊断主要依赖结核分枝杆菌（MTB）的培养，但MTB培养通常需要几周时间，导致诊断的时效性不足，从而错过最佳治疗时机[2]。随着医疗技术的进步，结核杆菌利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测（Gene Xpert-MTB/RIF）技术逐渐应用于肺结核的诊断，该技术能全自动提取样本中的核酸并进行纯化和浓缩，有效简化检测流程[3]。干扰素-γ释放试验（IGRA）是一种检测结核感染的新型免疫学检测方法，通过检测机体感染MTB后特异性 T 细胞释放干扰素-γ（IFN-γ）的情况判断是否存在结核感染[4]。基于此，本研究分析Gene Xpert-MTB/RIF技术联合IGR1H+ENb6O3jwxbNM606sa95GszaQh3T4WG0C6bphNWC8=A对肺结核的诊断效能，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2022年3月至2024年3月睢宁县中医院收治的78例疑似肺结核患者的临床资料，进行回顾性分析。所有患者中男性45例，女性33例；年龄27～83岁，平均年龄（55.00±3.72）岁； BMI 20～35 kg/m2，平均BMI（27.50±1.72）kg/m2。本研究经睢宁县中医院医学伦理委员会批准。纳入标准：⑴符合肺结核可疑症状者（咳嗽、咯痰≥2周、咯血或者血痰，具有以上1项症状即为肺结核可疑症状者）[5]；⑵意识清晰，可正常沟通。排除标准：⑴存在肺结核病史者；⑵合并其他传染性疾病者；⑶合并血液系统疾病者；⑷合并免疫系统疾病者。

1.2 研究方法 患者使用清水漱口2次，将痰液咳入无菌痰瓶后，密封并及时送至检验科。

MTB 培养：取1 mL痰样本，加入20 mL 4%氢氧化钠溶液（德国达姆施塔特默克集团，规格：500 mL/瓶），静置 30 min 待其充分液化（可振荡2～3次加速液化，如痰液黏稠可延长液化时间）。液化完成后接种至酸性培养基，将生化培养箱（青岛海尔生物医疗科技有限公司，鲁械注准20222221116，型号：HSP-160）设置为37 ℃恒温培育14 d，培育期间观察病原菌生长情况。培育完成后制片，采用结核分枝杆菌显微扫描仪（郑州中普医疗器械有限公司，豫械注准20222220089，型号：ZOPOMED-240）检测MTB菌落生长情况。

Gene X-pert MTB/RIF：另取1 mL痰样本，与处理液混匀（比例为1∶2）后静置10 min，随后再次混匀静置5 min。取2 mL混合液贴壁加入Gene Xpert-MTB/RIF试剂盒（购自美国Cepheid公司，严格按照说明书操作），将其置于配套Gene X-pert检测器中，通过配套软件自动判读结果。

IGRA：检查当天，采集患者空腹静脉血6 mL于肝素抗凝管中，16 h内将全血标本振荡摇匀并均分装至培养管（T）、阳性对照管（P）、阴性对照管（N）中。分别向板孔加入各管待测样品50 μL，采用酶联免疫吸附试验测定。将生化培养箱设置为（37.0±0.5）℃进行培养，将板孔中待测品振荡混匀后封板膜封板，培养60 min。取出后各孔加50 μL酶标试剂震荡摇匀，再次封板培养60 min。取出后揭开封板膜采用洗涤液润洗充分后，继续培养15 min。取出后各孔加入500 μL终止液，于10 min内采用酶标仪[赛默飞世尔（上海）仪器有限公司，沪械注准20182220073，型号：Multiskan FC]测定吸光度A值，设置波长450 nm，计算各管干扰素-γ水平。N≤400 pg/mL，若P-N为任何值，T-N≥14 pg/mL且T-N=N/4，则判定为阳性；若T-N为任何值，P-N<20 pg/mL且P-N<N/4或N>400 pg/mL，则判定为阳性；若P-N≥20 pg/mL，T-N为任何值且T-N<N/4为阴性[6]。

1.3 观察指标 ⑴比较MTB 培养、Gene X-pert MTB/RIF、IGRA检测结果。⑵诊断效能分析。以MTB培养为金标准，分析Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及联合检测的诊断效能。准确度=[（真阳性例数+真阴性例数）/总例数]×100%；灵敏度=[真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）]×100%；特异度=[真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）]×100%；阳性预测值=[真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）]×100%；阴性预测值=[真阴性例数/（真阴性例数+假阴性例数）]×100%。

1.4 统计学分析 采用SPSS 23.0统计学软件分析数据。计数资料以[例（%）]表示，采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTB 培养、Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA检测结果比较 MTB培养结果显示：78例疑似肺结核患者中，阳性58例，阴性20例；联合检测结果显示：阳性72例，阴性6例，见表1。

2.2 Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及联合检测的诊断效能比较 联合检测准确度为85.90%，灵敏度为94.83%，特异度为60.00%，阳性预测值为91.67%，阴性预测值为66.67%，均高于各项单一检测，差异均有统计学意义（均P<0.05），见表2。

3 讨论

结核病是一种由MTB引起的慢性传染病，主要通过呼吸道进行传播，在肺结核初期，患者主要表现为咳嗽、低热、乏力等症状，若未得到及时有效的治疗，随着疾病进展会进一步损伤肺功能，严重威胁患者生命安全[7]。MTB具有极强的生存能力，能在宿主体内长期潜伏，结核病易发生于免疫力低下的人群（如艾滋病患者、糖尿病患者、老年人等）。肺结核的发病机制较为复杂，涉及免疫反应、慢性炎症等方面[8]。MTB进入肺部后，通常会被巨噬细胞吞噬，但巨噬细胞并不能完全杀灭细菌，细菌继续在细胞内存活并繁殖，之后机体免疫系统会启动反应并产生细胞介导的免疫反应，T细胞等免疫细胞会被募集到感染部位，形成肉芽肿。此时若免疫反应足够强烈，可控制住感染，反之则会破坏肺组织，形成空洞和结核性病变[9]。因此，尽早准确诊断对于控制结核病的传播、改善患者预后具有重要意义。

本研究结果显示：在78例疑似肺结核患者中，阳性58例，阴性20例；联合检测结果显示：阳性72例，阴性

6例；联合检测准确度为85.90%，灵敏度为94.83%，特异度为60.00%，阳性预测值为91.67%，阴性预测值为

66.67%，均高于各项单一检测。这提示Gene Xpert-MTB/RIF联合IGRA诊断肺结核的价值较高。分析原因为，Gene Xpert-MTB/RIF技术能全自动提取样本中的核酸并进行纯化和浓缩，快速准确地检测出MTB及利福平耐药情况，可缩短检测时间，为早期诊断和及时治疗提供有力支持[10]。IGRA作为一种新型免疫学检测方法，可反映机体感染MTB后特异性T细胞释放干扰素γ的情况，具有较高的特异性，能较好地区分结核感染与其他非结核分枝杆菌感染及其他疾病[11]。两者联合使用，可优势互补，提高诊断的准确性。对于一些复杂的病例（如免疫功能低下的患者、早期感染或潜伏感染的患者），单一的检测方法易出现假阴性或准确度不高的情况。Gene Xpert-MTB/RIF 主要针对细菌核酸进行检测，而IGRA则从免疫反应的角度检测，二者联

合应用可增加对特殊人群的诊断敏感性，降低漏诊的可能性。

综上所述，Gene Xpert-MTB/RIF联合IGRA诊断肺结核的价值较高，值得临床应用。

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1作者简介：张志庆，大学本科，副主任检验师，研究方向：微生物的临床检验。