基于JNK通路探讨补肾活血方对大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

〔摘要〕 目的 探讨补肾活血方（Bushen Huoxue Formula， BSHXF）通过c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信号通路对大鼠骨关节炎（Osteoarthritis， OA）软骨细胞凋亡的影响。方法 采用白细胞介素-1β （interleukin-1β， IL-1β）诱导体外分离培养的大鼠软骨细胞构建体外OA模型，并使用不同浓度的BSHXF干预处理。使用MTT法测定细胞活力；CCK-8法检测细胞增殖能力；流式细胞术评估细胞凋亡情况；Western bolt检测凋亡相关蛋白裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2， Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein， Bax）水平和JNK、磷酸化c-Jun 氨基末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase， p-JNK）蛋白水平。试剂盒检测细胞中活性氧（reactive oxygen species， ROS）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）、谷胱甘肽（Glutathione， GSH）水平；ELISA法检测细胞上清液中促炎因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6， IL-6）含量。结果 （1）与对照组相比，模型组软骨细胞活力显著降低，细胞凋亡率显著升高（P<0.01）；模型组Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表达水平显著升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与模型组相比，BSHXF治疗组软骨细胞活力升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.01）；BSHXF治疗组Cleaved Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白表达水平显著降低（P<0.01），Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.01）。（2）与对照组相比，模型组细胞中ROS和MDA的相对含量显著升高（P<0.01），GSH的相对含量显著降低（P<0.01）；模型组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著升高（P<0.01）。与模型组相比，BSHXF治疗组细胞中ROS和MDA的相对含量显著降低（P<0.01），GSH的相对含量显著升高（P<0.01）；BSHXF治疗组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著降低（P<0.01）。（3）与溶剂对照组相比，激活剂对照组的p-JNK、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著上调（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P<0.01），细胞增殖能力下降（P<0.05），细胞凋亡率显著增加（P<0.01）；BSHXF治疗组和溶剂对照组两组间细胞增殖、凋亡率和凋亡相关蛋白表达（Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2）情况差异均无统计学意义（P>0.05）。（4）与溶剂对照组相比，激活剂对照组的ROS和MDA水平显著升高（P<0.01），而GSH水平显著降低（P<0.01），TNF-α、IL-6含量升高（P<0.05）；BSHXF治疗组和溶剂对照组两组间ROS相对含量、MDA、GSH水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 BSHXF通过抑制JNK信号通路激活抑制IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡，改善氧化应激和炎症反应。

〔关键词〕 骨关节炎；补肾活血方；JNK信号通路；软骨细胞凋亡；氧化应激；炎症反应

〔中图分类号〕R274.9 〔文献标志码〕A 〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.09.004

Effects of Bushen Huoxue Formula on chondrocyte apoptosis in rats with osteoarthritis based on JNK pathway

YANG Jun， PENG Litian， MAO Tao， PENG Wen*

The Second Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410005， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To investigate the effects of Bushen Huoxue Formula （BSHXF） on chondrocyte apoptosis in rats with osteoarthritis （OA） through the c-Jun N-terminal kinase （JNK） signaling pathway. Methods An in vitro OA model was constructed using interleukin-1β （IL-1β） to induce apoptosis in rat chondrocytes cultured ex vivo. Different concentrations of BSHXF were used for intervention. Cell viability was determined using MTT assay; CCK-8 assay was used to examine cell proliferation ability; flow cytometry was employed to assess cell apoptosis; Western blot was used to check the levels of apoptosis-related proteins， including cleaved cysteine protease-3 （Cleaved Caspase-3）， B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）， and Bcl-2 associated X protein （Bax）， as well as the levels of JNK and phosphorylated c-Jun N-terminal kinase （p-JNK） proteins. The reagent kit was used to measure the levels of reactive oxygen species （ROS）， malondialdehyde （MDA）， and glutathione （GSH） in cells; ELISA was used to check the content of pro-inflammatory factor of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and IL-6 in the cell supernatant. Results （1） Compared with the control group， the model group showed a significant decrease in chondrocyte viability and a significant increase in cell apoptosis rate （P<0.01）; the protein expression levels of Cleaved Caspase-3， Bax， and p-JNK in the model group significantly increased （P<0.01）， while the expression of Bcl-2 significantly decreased （P<0.01）. Compared with the model group， the BSHXF treatment group showed an increase in chondrocyte viability （P<0.05） and a significant decrease in apoptosis rate （P<0.01）; the protein expression levels of Cleaved Caspase-3， Bax， and p-JNK were significantly reduced （P<0.01） and the protein expression level of Bcl-2 increased （P<0.01） in the BSHXF treatment group. （2） Compared with the control group， the relative content of ROS and MDA in the model group cells significantly increased （P<0.01）， while the relative content of GSH significantly decreased （P<0.01）; the content of TNF-α and IL-6 in the model group cells significantly increased （P<0.01）. Compared with the model group， the BSHXF treatment group showed a significant decrease in the relative content of ROS and MDA （P<0.01） and a significant increase in the relative content of GSH （P<0.01）; the content of TNF-α and IL-6 in cells treated with BSHXF was significantly reduced （P<0.01）. （3） Compared with the solvent control group， the activator control group showed a significant upregulation of p-JNK， Cleaved Caspase-3， and Bax protein levels （P<0.05）， a significant reduction in Bcl-2 protein expression （P<0.01）， a decrease in cell proliferation ability （P<0.05）， and a significant increase in cell apoptosis rate （P<0.01）; there were no significant differences in cell proliferation， apoptosis rate， and expressions of apoptosis-related proteins （Cleaved Caspase-3， Bax， and Bcl-2） between the BSHXF treatment group and the solvent control group （P>0.05）. （4） Compared with the solvent control group， the activator control group exhibited a significant increase in ROS and MDA levels （P<0.01） and a significant decrease in GSH level （P<0.01）， with increased content of TNF-α and IL-6 （P<0.05）; there were no significant differences in the relative content of ROS and the levels of MDA and GSH between the BSHXF treatment group and the solvent control group （P>0.05）. Conclusion BSHXF inhibits IL-1β-induced apoptosis in OA chondrocytes by suppressing the activation of JNK signaling pathway， thereby relieving oxidative stress and inflammatory responses.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 osteoarthritis; Bushen Huoxue Formula; JNK signaling pathway; chondrocyte apoptosis; oxidative stress; inflammatory response

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种以关节软骨细胞外基质降解、关节软骨退行性破坏、骨赘形成和关节疼痛为主要特征的慢性关节疾病，严重影响患者的生活质量[1-2]。该病主要发生在膝关节、髋关节、脊柱和远侧指间关节等承受较大负重的关节，常见于中老年人群[3]。尽管对OA的治疗已有一定进展，但有效延缓或逆转其病程仍是当前临床研究的重点[4-5]。补肾活血方（Bushen Huoxue Formula，BSHXF）是一种传统中药复方，由多种中草药组成，具有补肝肾、强筋骨、活血止痛等功效，历史上用于治疗肾虚血瘀导致的病症，包括中医学中的“膝痛”“骨痹”[6]。然而，BSHXF对OA的具体作用机制尚待明确。已有研究表明，c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）信号通路在细胞应答，特别是炎症和细胞凋亡过程中扮演重要角色[7]。JNK激活导致炎症细胞因子释放增多，加剧关节炎症和软骨破坏[8]。同时，氧化应激激活JNK通路，进一步促进炎症介质的产生，损害关节软骨细胞[9]。此外，JNK通路的激活促进细胞凋亡信号，导致关节软骨细胞过度凋亡，是OA进展的一个重要机制[10-11]。因此，针对这些相关信号通路的药理学调节可能是治疗OA的一个潜在策略。本研究旨在探索BSHXF对OA的治疗作用及其潜在的分子机制，为OA治疗提供新策略和科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性Wistar 3天龄大鼠40只，体质量（10±3） g，均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物资格证书编号：SCXK（京）2021-0011；室温 24～26 ℃，湿度65%～70%，光照时间 12 h/d，提供水和营养均衡的饮食。实验方案经湖南中医药大学动物实验伦理委员会批准，伦理批准号：LL2022111702。

1.2 主要试剂及仪器

二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide， DMSO）（批号：ST038）、CCK-8试剂盒（批号：C0037）、细胞凋亡试剂盒（批号：C1052）、放射免疫沉淀法裂解缓冲液（radio immunoprecipitation assay lysis buffer， RIPA）裂解液（批号：P0013B）、脱脂奶粉（批号：P0216）、二喹啉甲酸（bicinchoninic acid， BCA）蛋白定量试剂盒（批号：P0010）、GSH检测试剂盒（批号：S0053）、活性氧（reactive oxygen species， ROS）检测试剂盒（批号：S0033S）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）检测试剂盒（批号：S0131S）、TNF-α ELISA试剂盒（批号：PT516）、IL-6 ELISA试剂盒（批号：PI328）均购自北京碧云天生物技术有限公司；Ⅱ型胶原酶（批号：C8150）购自北京索莱宝科技有限公司；凋亡相关蛋白裂解的胱天蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）（批号：ab214430）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2， Bcl-2）（批号：ab196495）、Bcl-2相关X蛋白质（Bcl-2-associated X protein，Bax）（批号：ab182733）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase， GAPDH）（批号：ab181602）、Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HRP）（批号：ab6721）、MTT（批号：ab211091）、重组大鼠白细胞介素-1β蛋白因子（批号：ab281807）、茴香霉素（批号：ab120495）均购自英国Abcam公司；c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase， JNK）和磷酸化JNK（phosphorylation-JNK， p-JNK）抗体（批号：#9252）购自美国Cell Signaling Technology公司；TRIzol试剂盒（批号：A33254）、逆转录试剂盒（批号：4366597）、荧光定量试剂盒（批号：4349180）均购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

LSM710型激光共聚焦显微镜（美国卡尔蔡司光学仪器有限公司）；Bio-Rad 680型酶标仪（美国Bio-Rad公司）；MoFloAstrios EQ型流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。

1.3 细胞培养

使用新生鼠（3日龄），以戊巴比妥钠（1%溶液，40 mg·kg-1）进行腹腔麻醉，经颈椎脱臼处死后，浸入75%乙醇消毒5 min。取胸廓组织，切碎后在0.2%Ⅱ型胶原酶溶液中37 ℃消化1.5 h。离心（1 000 r/min，10 min，37 ℃）后，再加入0.05%Ⅱ型胶原酶于37 ℃消化3 h。再次离心（1 000 r/min，10 min，37 ℃），用PBS洗涤大鼠软骨细胞沉淀，并在含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养[12]。

1.4 实验分组与处理

取传至第2代的大鼠软骨细胞，以每孔2×105个的密度接种在24孔板中，每孔1 mL。培养24 h后随机分为对照组：细胞在10%胎牛血清DMEM中正常培养；模型组（OA组）：使用10 ng·mL-1的IL-1β处理正常软骨细胞24 h，建立OA模型；治疗组（OA+BSHXF组）：使用10 ng·mL-1的IL-1β处理细胞24 h后，加入不同剂量（50、100、150、200、250 μg·mL-1）的BSHXF处理24 h；溶剂对照组（OA+BSHXF+DMSO组）；OA+BSHXF+Anisomycin组（激活剂对照组）：使用10 ng·mL-1的IL-1β处理细胞24 h后，加入200 μg·mL-1的BSHXF和5 μmol·L-1的JNK信号通路激活剂Anisomycin处理24 h[13]。每组细胞均在37 ℃、5% CO2的培养箱中培养48 h。

1.5 MTT法检测各组细胞活力

使用MTT法测定各组细胞的活力[14]。将细胞以每孔3×103个的密度接种在96孔板中，每孔添加100 μL培养基。细胞培养24 h后，按照“1.3”分组处理细胞。处理24 h后，每孔加入10 μL的MTT溶液（5 mg·mL-1），并在37 ℃、5% CO2的条件下继续孵育4 h。然后弃去上清液，并加入DMSO溶解结晶物。使用酶标仪在490 nm波长下测定吸光度，以反映细胞活力。实验重复3次。根据MTT实验结果，选择表现出最高细胞活力的BSHXF浓度用于后续实验。

1.6 CCK-8法检测各组大鼠软骨细胞增殖情况

取传至第2代的大鼠软骨细胞，将细胞以1×103个/孔的密度接种在96孔板中，每孔100 μL。细胞贴壁生长24 h后，按照“1.3”中方法分组处理48 h，每孔加入CCK-8溶液10 μL，37 ℃孵育2 h，使用酶标仪在490 nm波长下测定吸光度，计算细胞活力。

1.7 试剂盒检测各组氧化应激指标水平

采用试剂盒检测细胞活性氧（reactive oxygen species， ROS）、丙二醛（malondialdehyde， MDA）、谷胱甘肽（glutathione， GSH）的表达水平。实验独立重复3次，所有操作及各试剂的配制均严格按照说明书进行。

1.8 流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况

取传至第2代的大鼠软骨细胞，以每孔2×105个的密度接种在24孔板中，每孔1 mL。培养24 h后，按照“1.3项”中方法分组处理48 h，收集各组细胞沉淀，以PBS洗涤后计数；每组取2×105个细胞，采用ANNEXIN V-FITC/PI凋亡检测试剂盒进行ANNEXIN V-FITC/PI双染，然后采用流式细胞分析仪检测各组细胞凋亡率[12]。

1.9 ELISA试剂盒检测各组炎症因子水平

收集各组干预后的细胞培养液，离心（3 000 r/min，20 min，4 ℃）后收集上清液，按照ELISA试剂盒说明检测细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平，酶标仪检测450 nm时的吸光值，进行后续统计分析[16]。

1.10 Western blot检测各组细胞蛋白表达水平

取出“1.6项”中存于-80 ℃的大鼠软骨细胞样品液，于冰水浴中解冻。随后将样品进行煮沸变性处理。每组取30 μg总蛋白的样品，进行SDS-PAGE电泳。电泳完成后，样品通过湿转移法转移到膜上。使用5%脱脂奶粉对膜进行1.5 h的封闭处理。加入一抗，包括Cleaved Caspase-3（稀释比1∶5 000）、Bcl-2（1∶1 000）、Bax（1∶1 000）、JNK和p-JNK（1∶1 000），并在4 ℃下过夜孵育。次日，使用TBST洗涤膜以去除未结合的一抗。加入二抗：Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HRP）（1∶2 000），在室温下孵育1.5 h。再次洗涤膜后，使用ECL显色剂进行显色，并在化学发光成像系统下进行蛋白条带检测。整个实验过程重复3次[12]。

1.11 统计学分析

所有数据均采用GraphPad Prism 8.0软件进行统计分析。数据以“ｘ±s”表示。多个样本均采用单因素方差分析，组间数据比较用t检验方法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BSHXF对各组OA软骨细胞凋亡的影响

50、100、150、200、250 μg·mL-1的BSHXF对正常软骨细胞活力无影响（P>0.05，图1A），各浓度的BSHXF均可提高IL-1β诱导的OA软骨细胞活力，且呈剂量依赖性（均P<0.05，图1A）。200 μg·mL-1组细胞活力最高，250 μg·mL-1组细胞活力有所下降（P>0.05，图1A）。可能是由于过高浓度的BSHXF产生了轻微的细胞毒性。因而选择200 μg·mL-1的BSHXF进行后续实验。CCK-8和流式细胞术结果显示，与空白组相比，模型组软骨细胞活力显著降低、细胞凋亡率显著升高（均P<0.01，图1B—C）。与模型组相比，治疗组软骨细胞活力升高、凋亡率显著降低（均P<0.01，图1B—C）。与空白组相比，OA组Cleaved

Caspase-3、Bax的表达显著升高，Bcl-2的表达显著降低（均P<0.01，图1D）；与模型组相比，治疗组处理显著降低了Cleaved Caspase-3、Bax的表达，并增加了Bcl-2的表达（均P<0.01，图1D）。这表明BSHXF抑制IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡。

2.2 BSHXF对各组OA软骨细胞氧化应激指标及炎症因子水平的影响

与空白组相比，模型组细胞中ROS和MDA的相对含量显著升高（P<0.01），GSH的相对含量显著降低（P<0.01，图2A）；相较于模型组，治疗组细胞中ROS和MDA的相对含量显著降低（P<0.01），GSH的相对含量显著升高（P<0.01，图2A）。ELISA结果显示，与空白组相比，模型组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著升高（均P<0.01，图2B）；相较于模型组，治疗组细胞中TNF-α和IL-6的含量均显著降低（均P<0.01，图2B）。这表明，BSHXF能改善IL-1β诱导的OA软骨细胞氧化应激和炎症反应。

2.3 BSHXF对各组OA软骨细胞JNK、p-JNK蛋白表达水平的影响

Western blot结果显示，3组细胞间JNK蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）；而与空白组相比，模型组细胞中p-JNK蛋白表达显著上调（P<0.01）；相较于模型组，治疗组细胞中p-JNK蛋白表达显著下调（P<0.01）。这表明BSHXF抑制JNK信号通路激活。详见图3。

2.4 JNK信号通路激活后BSHXF对各组 OA软骨细胞凋亡蛋白的影响

在IL-1β诱导细胞中同时加入BSHXF和JNK信号通路激活剂Anisomycin处理24 h。Western bolt结果显示，与溶剂对照组相比，激活剂对照组的p-JNK蛋白水平显著上调（P<0.05，图4A），这表明成功激活了JNK信号通路。随后，通过CCK-8、流式细胞术和Western bolt检测细胞增殖、凋亡率和凋亡相关蛋白表达情况。结果显示，OA+BSHXF和OA+BSHXF+DMSO两组间细胞增殖、凋亡率和凋亡相关蛋白表达（Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2）情况差异均无统计学意义（P>0.05，图4B-D）。而与溶剂对照组相比，激活剂对照组细胞增殖能力显著下降（均P<0.05，图4B），细胞凋亡率显著增加（P<0.01，图4C），Cleaved Caspase-3、Bax水平显著升高，Bcl-2水平显著降低（均P<0.01，图4D）。这表明激活JNK信号通路部分逆转BSHXF对IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡的抑制作用。

2.5 激活JNK信号通路后BSHXF对各组OA软骨细胞氧化应激和炎症反应的影响

OA+BSHXF和OA+BSHXF+DMSO两组间ROS相对含量、MDA、GSH水平差异均无统计学意义（均P>0.05，图5A-B）。而与溶剂对照组相比，激活剂对照组的ROS和MDA水平显著升高，而GSH水平显著降低，TNF-α、IL-6含量显著升高（均P<0.05，图5A—B）。这表明激活JNK信号通路部分逆转BSHXF对IL-1β诱导的OA软骨细胞氧化应激和炎症反应的改善作用。

3 讨论

BSHXF是一种源自传统中医理论的中药复方，传统上用于治疗多种疾病。根据传统中医理论，它可能对OA等疾病具有治疗潜力[1，5]。在OA的病理机制中，细胞凋亡起着关键作用[17]。Caspase-3作为细胞凋亡过程中的主要执行酶，通常以非活化的前体形式存在。细胞在接收到凋亡信号后，会将Caspase-3裂解成活化形式，进而触发细胞死亡。Cleaved

Caspase-3的表达增加通常与OA中软骨细胞的损伤和凋亡相关[18]。细胞凋亡的另一关键调节因素是Bcl-2和Bax蛋白。其中，Bcl-2通过阻止细胞色素C的释放和Caspase的激活来防止细胞凋亡，而Bax通过促进细胞色素C释放和Caspase酶激活推动细胞凋亡。在OA中，上调Bcl-2或下调Bax的表达可能有助于保护软骨细胞，减少软骨细胞的凋亡，延缓疾病的发展[19-20]。JNK在调节细胞应激反应，尤其是细胞凋亡和炎症反应中起关键作用[21]。研究表明，抑制JNK信号通路的激活有助于减少软骨细胞凋亡和炎症，减缓OA的进展[22-23]。本研究重点关注了BSHXF对IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡、氧化应激和炎症反应的调节作用，以及这些作用是否通过JNK信号通路实现，为OA治疗提供新的策略。

本研究结果表明，BSHXF对正常软骨细胞无明显毒害作用，且可显著提高IL-1β诱导的OA软骨细胞活力。特别是在200 μg·mL-1时，细胞活力达到最高。然而，250 μg·mL-1浓度的BSHXF导致细胞活力降低，这可能是由于较高浓度的BSHXF产生轻微的细胞毒性，也可能是由于中药复方通常包含多种成分，这些成分可能在较高浓度下相互作用产生未预期的效果[24]。进一步研究结果显示，BSHXF显著提高了OA软骨细胞的活力，同时降低了凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax的表达，增加了Bcl-2的表达。提示BSHXF通过调节凋亡相关蛋白的表达来抑制细胞凋亡，从而促进软骨细胞的存活和增殖，这与他人研究结果相似。在氧化应激和炎症反应方面，研究发现BSHXF显著降低了模型组细胞中的ROS和MDA水平，同时提高了GSH水平，这与王柯等[25]的研究结果相似。此外，BSHXF还显著降低了促炎因子TNF-α、IL-6的含量，这表明BSHXF可能通过降低氧化应激和抑制炎症因子的释放来改善OA症状，这与陈宇等[26]的研究结果相似。研究表明，BSHXF能显著抑制p-JNK的表达。当使用Anisomycin时，部分逆转BSHXF对细胞增殖、凋亡、氧化应激和炎症反应的影响，从而进一步证实了JNK信号通路在BSHXF改善OA软骨细胞凋亡、氧化应激和炎症反应的重要作用。

尽管本研究突出了BSHXF在抑制OA软骨细胞凋亡、氧化应激和炎症反应中的潜在作用，但研究存在一些局限性。首先，研究基于体外实验，其结果可能无法完全代表体内情况。此外，研究中未能完全揭示BSHXF的全部作用机制。同时，BSHXF为复方中药，具有多靶点、多途径等特性。未来研究需进一步探索BSHXF的分子靶点和作用机制，并通过动物模型来进一步验证本文的研究结果。综上所述，BSHXF通过抑制JNK信号通路的激活进而抑制IL-1β诱导的OA软骨细胞凋亡，改善氧化应激和炎症反应，为治疗OA提供了新的理论基础。

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本文引用： 杨 军， 彭力田， 毛 滔， 彭 文. 基于JNK通路探讨补肾活血方对大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡的影响[J]. 湖南中医药大学学报， 2024， 44（9）： 1575-1582.

〔收稿日期〕2024-01-14

〔基金项目〕湖南省中医药科研计划项目（E2022114）。

〔通信作者〕*彭 文，男，副主任医师，E-mail：1965067@qq.com。