民族药文王一支笔不同药用部位止血作用的筛选研究

殷莉 程刚 瞿涛 顾秀峰 陈桂林 吴云毅

【摘 要】   目的： 探讨文王一支笔不同药用部位（花序、花茎、根茎）水煎液的止血作用。 方法： 将实验动物随机分为空白对照组，云南白药组，文王一支笔根茎、花茎、花序三个不同部位给药组（每个部位再分为高、低剂量组），连续给药5d后，采用断尾法测定小鼠出血时间，毛细管法测定小鼠凝血时间，且测定大鼠血浆复钙时间。 结果： 与空白组比较，云南白药组、文王一支笔花序和花茎高低剂量组出血时间、凝血时间与血浆复钙时间均明显缩短（ P< 0.05或 P< 0.01）；文王一支笔根茎的作用不显著。 结论： 文王一支笔花序和花茎水煎液均有较好的止血、促凝血作用，根茎的作用次之。

【关键词】  文王一支笔；花序；花茎；根茎；止血作用

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）08-0033-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.08.zgmzmjyyzz202408008

Researches on Hemostatic Effect of Different Medicinal Parts of  Balanophora involucrata

YIN Li 1 CHENG Gang 1 QU Tao 2 GU Xiufeng 2 CHEN Guilin 3 WU Yunyi  1*

1. Shiyan Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Shiyan 442001，China;

2. Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China;

3. Wuhan Botanical Garden，Chinese Academy of Sciences，Wuhan 430074，China

Abstract：

Objective  To explore the hemostatic effect of aqueous extract of different medicinal parts （inflorescence， scape， and rhizome） from  Balanophora involucrata .  Methods  The experimental animals were randomly divided into blank control group， Yunnan Baiyao group，  Balanophora involucrata s inflorescence， scape， and rhizome groups （each part was divided into high and low dose groups）. After continuous administration for 5 days， the hemostasis time （BT） and clotting time （CT） of mice were measured by tail-cutting method and capillary tube method. The plasma  recalcification time （PRT） were examined on Wistar rats.  Results  Compared with the blank group， Yunnan Baiyao group， aqueous extracts of  Balanophora involucrata s inflorescence and scape groups significantly shortened the BT， CT and PRT （ P＜ 0.05 or  P＜ 0.01），while the rhizome of  Balanophora involucrata  exhibited no obvious hemostatic effect.  Conclusion  Among different medicinal parts of  Balanophora involucrata ， inflorescence and scape showed the strong promotion on hemostasis and coagulation， while the effect of rhizome was weaker.

Key words：

Balanophora involucrata ；Inflorescence；Scape；Rhizome；Hemostasis

文王一支笔来源于蛇菰科蛇菰属草本寄生植物筒鞘蛇菰（ Balanophora involucrata  Hook.f.），又称借母怀胎、鹿仙草、鸡心七、观音莲等，是土家族“四大名药”之一。其在我国主要分布于湖北、湖南、四川、云南、广西等省区，为鄂西北地区民间习用药材，已收载于《湖北省中药材质量标准》  ［1］ 中。文王一支笔药用历史悠久，据《中国土家族医药学》  ［2］ 记载，其气微、味微苦，具有清热解毒、凉血止血、活血调经、固肾涩精等功效。《中华本草》  ［3］ 记载其全株可入药，主治脘腹疼痛、肺热咳嗽、咯血、外伤出血、跌打损伤、月经不调、血崩、疲劳出血、痔疮肿痛等症。在民间常用于治疗各类出血症，功效奇佳  ［4］ 。文王一支笔对生长环境要求高，生长季节性强，故野生资源稀少、产量低，临床应用受到限制，多为民间用药  ［5-6］ 。现代研究  ［7-9］ 表明，其主要含有黄酮类、苯丙素类、三萜类和甾体类等活性成分，具有较好的止血、镇痛抗炎、醒酒保肝、抗疲劳、抗氧化等药理作用。

历代本草记载，同一药物的不同药用部位“偏胜”不同，入药也存在差异，中药的“一体多用”现象普遍存在  ［10］ 。现代研究  ［11-12］ 也发现，中药不同入药部位的化学成分及药理作用往往不同，药用价值并不完全相同。也即，不同的药用部位的临床功用可能存在差异，比如麻黄（草质茎）可解表发汗，而麻黄根固表止汗，在临床实际应用中要谨慎选择  ［13-14］ 。文王一支笔为多年生寄生肉质草本，根茎、花茎、花序三个不同部位的组织特征差异显著  ［1］ 。目前关于文王一支笔的现代研究多集中在全草，针对其不同药用部位尚缺乏全面系统的分类研究和比对，以全草入药的合理性，有待进一步验证。因此，本研究拟从止血作用方面探讨文王一支笔根茎、花茎和花序3个不同部位的功效差异，以期为文王一支笔药材不同药用部位的精准应用奠定实验基础，为其资源的综合利用开发提供科学依据。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 KM小鼠 （SPF级）， 体重18～ 22 g ，雌雄各半，动物质量合格证号：42000600045465； Wistar大鼠（SPF级），体重220 g，雌雄各半，动物质量合格证号：42000600045589。所有动物均由湖北省实验动物研究中心提供，许可证编号：SYXK（鄂）2017-0065。动物在室温为（24±2）℃、相对湿度45％～75％的鼠房内适应性喂养3 d后开始实验，期间自由饮水与摄食。

1.2 药品与试剂 文王一支笔药材采自湖北房县（批号：2020102），经湖北中医药大学药学院杨红兵教授鉴定为蛇菰科蛇菰属植物筒鞘蛇菰（ Balanophora involucrata  Hook.f.）的干燥全草；云南白药粉末（云南白药集团股份有限公司，国药准字Z53020798，批号：ZCB1908）；3.8%枸橼酸钠、氯化钙、纯化水。

1.3 主要仪器 BSA224S型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；Legend Micro17R高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技有限公司）；HH-S21-8-S恒温水浴锅（上海新苗医疗器械制造有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；98-1-B型电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；FW177中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；超纯水机（Merck Millipore，型号Elix Essential 5 UV Kit CN）；真空采血管；小鼠固定器；滤纸；秒表等。

2 方法

2.1 文王一支笔不同部位水提物的制备 将文王一支笔全草分离为根茎、花茎、花序三部分，所有药材一次性按部位分拣、干燥备用。取文王一支笔根茎、花茎、花序分别粉碎过筛，再各称取200 g，依次加入10倍量、8倍量和8倍量的水回流提取2 h、1 h和1 h，合并3次滤液，减压浓缩，冷冻干燥成粉并存放于-80 ℃冰箱备用。

2.2 剪尾法测定小鼠出血时间（bleeding time， BT）  ［15-17］  取雌雄各半KM小鼠64只，随机分成8组，每组8只，分别为：空白对照组，阳性对照组（云南白药0.33 g·kg  -1 ），文王一支笔根茎、花茎、花序水煎液给药组（每个药用部位再分为高、低剂量组）。将文王一支笔根茎、花茎、花序水提物分别加入0.5% CMC-Na混匀，根据生药量折算各部位高剂量组为10 g·kg  -1 ，低剂量组为5 g·kg  -1 ，各剂量组按0.1 mL·10 g  -1 每天灌胃1 次，连续给药5 d，空白对照组灌胃等量双蒸水。末次灌胃  1 h  后，固定小鼠，用手术剪刀将小鼠尾尖自1/3处横断，当断尾血液自行流出时开始计时，每隔30 s用滤纸吸取血滴1次，直至滤纸吸时无血迹为止，从开始出血到出血自然停止记为小鼠出血时间，并计算缩短率  ［18］ 。

2.3 毛细管法测定小鼠凝血时间（clotting time，CT）  ［18-19］  取雌雄各半KM小鼠64只，动物分组及给药同“2.2”。于末次给药1 h后，将小鼠固定，用毛细玻璃管（Ф1 mm，长 100 mm）从小鼠眼内插入眦球后静脉丛取血，至血液注满后取出置于水平处，每隔30 s 折断毛细玻璃管约5 mm，然后缓慢向左右拉开，并观察折断面是否有血凝丝，直至血凝丝出现为止，记录所经历时间即为凝血时间。

2.4 测定大鼠血浆复钙时间（plasma recalcification time，PRT） 取Wistar大鼠48只，雌雄各半，随机分成8组，每组6只，大鼠给药容积为5 mL·kg  -1 ，具体分组及给药同“2.2”。于末次灌胃1 h后，颈动脉插管取血，立即加入放有3.8% 枸橼酸钠溶液的离心管内抗凝（血液与3.8%枸橼酸钠之比为9∶[KG-*3/5]1），以3000 rpm离心10 min，分离血浆备用。取试管，分别加入混合血浆0.1 mL，再放入 37 ℃水浴中温浴 1 min，然后各加入0.28%的氯化钙溶液0.1 mL，混合均匀后再放入37 ℃水浴中，同时开始计时。在30 s后每隔10 s 缓慢地倾斜试管1次，记录下自加 Ca  2+ 至纤维蛋白形成、液面不动所需的时间，即为该组大鼠 PRT  ［20］ 。

2.5 统计学处理 采用SPSS 19.0 统计学软件进行处理和分析，检验结果采用“均数加减标准差 （x ±s） ”表示，组间比较采用单因素方差分析，以 P＜ 0.05为差异有统计学意义。组间均数比较采用独立样本  t  检验。

3 结果

3.1 对小鼠BT的影响 小鼠灌胃给药5 d后，与空白对照组比较，文王一支笔花序和花茎高剂量组、低剂量组均可明显缩短小鼠的出血时间（ P＜ 0.05或  P＜ 0.01），BT缩短率最大可达27.69%；而文王一支笔根茎对小鼠出血时间的缩短作用不明显，差异无统计学意义（ P＞ 0.05）；与阳性对照组比较，文王一支笔花序和花茎高低剂量组 作用与云南白药相当，均无显著性差异（ P＞ 0.05），而根茎给药组小鼠出血时间明显较长，两者比较差异极显著，具有统计学意义（ P＜ 0.01）。详见表1。

3.2 对小鼠CT的影响 与空白对照组比较，文王一支笔花序和花茎高剂量组、低剂量组均可明显缩短小鼠的凝血时间（ P＜ 0.05或  P＜ 0.01）；而文王一支笔根茎对小鼠凝血时间的缩短作用不明显（ P＞ 0.05）；与阳性对照组比较，文王一支笔花序和花茎的作用稍弱于云南白药，但差异不具有显著性（ P＞ 0.05），而根茎给药组小鼠凝血时间较长，差异极显著（ P＜ 0.01）。详见表2。

3.3 对大鼠PRT的影响 与空白对照组比较，文王一支笔花序和花茎高剂量组、低剂量组均可极显著缩短大鼠的血浆复钙时间（ P＜ 0.01）；而文王一支笔根茎对大鼠血浆复钙时间的影响不明显，差异无统计学意义（ P＞ 0.05）；与阳性对照组比较，文王一支笔花序和花茎的影响作用与云南白药接近，花茎高剂量组甚至略优于云南白药组，差异无显著性（ P＞ 0.05），而根茎给药组大鼠的血浆复钙时间明显较长，具有极显著性差异（ P＜ 0.01）。详见表3。

4 讨论

文王一支笔是土家族珍稀特产药材，民间应用历史悠久，其凉血止血之效在临床上广泛用于各种出血症  ［17］ ，但其止血方面的现代药学研究仍较少。小鼠断尾法和毛细管法常用于药物止血作用研究  ［19］ ，出血时间（BT）和凝血时间（CT）是检测止血药物的常用筛选指标  ［17，21］ ：BT反映血小板的数量、质量以及毛细血管的止血功能，CT的长短主要与各种凝血因子含量和功能有关，血浆复钙时间（PRT）能反映内源性凝血系统的活性。本实验研究发现：文王一支笔花序和花茎水煎液高、低剂量连续给药5 d均可显著缩短小鼠止血时间、凝血时间和大鼠血浆复钙时间，进一步佐证了文王一支笔的止血功效。中药止血作用的机制十分复杂，是多种成分的协同作用，具有多途径多环节的特点，文王一支笔止血作用的具体机制还需要进一步深入研究。

同一药物的不同药用部位可能性效有异，历代本草已有深入认识  ［13］ ：《神农本草经百种录》言“凡药之用……各以其所偏胜而即资之疗疾，故能补偏救弊，调和脏腑”；《本草蒙筌》称“根梢各治，尤勿混淆……上焦病者用根，中焦病者身，下焦病者用梢。盖根升梢降，中守不移故也”。随着现代中药研究的不断深入，同一植物的不同药用部位，由于性状不同或主要成分积累分布的差异，会导致不同药用部位的药理药效有一定差异  ［10，22］ 。因此，为了更好地利用文王一支笔药材的药用价值，为其不同药用部位的精准应用奠定基础，本实验对文王一支笔不同药用部位（花序、花茎和根茎）止血作用的差异性进行了研究。结果表明，文王一支笔花序和花茎的止血作用明显优于根茎，而花序与花茎的效果相近，也即文王一支笔不同部位的止血作用是有差异的。

目前文王一支笔止血机制尚不明确，可能与其凉血止血功效有关，有研究  ［4］ 推断，其止血作用的有效成分可能与黄酮类化合物有关，但尚无关于其不同药用部位物质基础和含量差异的报道。后续工作中我们将对文王一支笔不同药用部位的化学成分进行分离鉴定，并对其结构和药理活性做进一步的构效关系分析，以期为文王一支笔植物资源的合理开发利用提供更充分的科学依据和理论参考。

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（收稿日期：2023-07-17 编辑：刘 斌）