苋黄洗剂的质量控制

高 珊

唐山市妇幼保健院药剂科，河北 唐山 063000

苋黄洗剂是唐山市妇幼保健院根据多年临床经验所得的自制制剂(冀药制字Z20050596)，该处方由马齿苋、苦参、黄柏等组成，具有清热解毒、燥湿祛疹的功效。自获得批准文号以来，该制剂已治愈上千余人。原质量标准中仅有苦参碱和盐酸小檗碱的薄层鉴别，未见含量测定方法，存在不足。为有效控制制剂质量，保证用药安全，本试验对苦参碱和盐酸小檗碱的鉴别方法进行了改进，并新增HPLC法同时测定苦参碱和盐酸小檗碱的含量[1-4]，该方法简便、准确、重现性好，为该制剂的质量控制提供了保证。现报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，配备LC-20AT泵、SL-20A 自动进样器、岛津LC solution 色谱工作站(日本岛津公司)、SPD-20A紫外可见光检测器；UV-2501PC紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；BP211D电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

苦参碱对照品(批号：110805-200005)、盐酸小檗碱对照品(批号：110713-200609)，购于中国药品生物制品鉴定所；苋黄洗剂(批号：200717、200905、201016)由唐山市妇幼保健院制剂室制备(冀药制字Z20050596)；乙腈为色谱纯(天津四友精细化学品有限公司)；水为重蒸馏水；磷酸为分析纯。

2 鉴别

2.1 苦参碱 取本品10 mL，加浓氨试液2.5 mL，用氯仿振摇，提取2次，每次15 mL，合并氯仿提取液，过滤，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇(10∶6∶1∶1)为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以改良的碘化铋钾试液。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点。表明无干扰，结果如图1所示。

2.2 盐酸小檗碱 取本品10 mL，加浓氨试液 2.5 mL，用氯仿振摇，提取2次，每次15 mL，合并氯仿提取液，过滤，蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，预饱和20 min后，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。在供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。无干扰，结果如图2所示。

1、3、5：样品；2：盐酸小檗碱；4：阴性图2 盐酸小檗碱TLC图

3 含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX EXTEND-C18(2.1 mm×150 mm)，5 μm；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液(pH6.8，v/v=45∶55)；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：225 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；苦参碱、盐酸小檗碱分离度均大于1.5，理论塔板数以盐酸小檗碱算大于4000。

3.2 溶液制备 标准品溶液：用天平精密秤取盐酸小檗碱对照品10.6 mg和苦参碱对照品11.6 mg，置于50 mL容量瓶中。用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

样品溶液：取苋黄洗剂10 mL，加入浓氨水2.5 mL，并用三氯甲烷进行振摇萃取3次，每次15 mL。将萃取液归并、过滤，滤液蒸干。用甲醇溶解残渣并放入5 mL容量瓶中，稀释至刻度，用0.45 μm针式滤器过滤，即得。

阴性样品溶液：按苋黄洗剂处方构成分别制备不含苦参和黄柏的阴性样品，按照配制样品溶液的方式进行操作，即得。

3.3 方法学验证

3.3.1 专属性试验 分别吸取标准品溶液20 μL、样品溶液20 μL、阴性样品溶液各20 μL，根据“3.1”项下的色谱条件对3种溶液进样，如图3所示，阴性样品在相应的苦参碱及盐酸小檗碱处无色谱峰，无干扰。

A.对照品；B.样品；C.缺黄柏阴性样品；D.缺苦参阴性样品；1.苦参碱；2.盐酸小檗碱图3 高效液相图

3.3.2 线性关系考察 分别精密吸取“3.2”项下标准品溶液0.5 mL、1.0 mL、2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，放入10 mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇晃至均匀，即得。根据“3.1”项下的条件进样，记下色谱图并测定峰面积。以标准品浓度(X)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐标画出标准曲线，并用最小二乘法线性回归分析对曲线进行矫正，得苦参碱和盐酸小檗碱的回归方程式：Y=1.7585×104X+2，275×103，r=0.9999；Y=4.0506×104X+5.825×103，r=0.9996结果表明，苦参碱浓度在11.6～174 μg·mL-1、盐酸小檗碱浓度在10.6～159 μg·mL-1范围内与峰面积有良好线性关系。

3.3.3 精密度试验 精密吸取标准品，根据“3.1”项下的条件进样，持续进样6次，以计算苦参碱峰面积RSD为0.76%和盐酸小檗碱峰面积RSD为1.08%，说明此方式具有优良的精密性。

3.3.4 稳定性试验 取相同样品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，得苦参碱和盐酸小檗碱峰面积RSD分别为0.82%、1.32%，在2%范围内，说明溶液在24h内处于稳定状态。

3.3.5 重复性试验 取同一批次苋黄洗剂样品6份(批号：200717)，根据“3.2”项制成样品溶液，根据“3.1”项条件进样，测得苦参碱平均含量为77.2 μg·mL-1，RSD为1.22%(n=6)；盐酸小檗碱平均含量为59.85 μg·mL-1，RSD为1.78%(n=6)。结果表明该方法重复性良好。

3.3.6 加样回收率试验 精密吸取已知含量样品6份(批号：200717)，每份5 mL，分别按低、中、高3个浓度加入苦参碱和盐酸小檗碱对照品适量，根据“3.2”项制成样品溶液，根据“3.1”项条件进样，记下实验数据，测得苦参碱平均加样回收率98.66%、RSD值1.16%，盐酸小檗碱平均加样回收率98.09%和RSD值1.10%。符合《中国药典规定范围》，表明该方法测得含量准确、可靠。

3.3.7 样品含量测定 取苋黄洗剂3批次，每批3份，根据“3.2”项制成样品溶液，进样并进行含量测定，外标法计算，结果见表1。

表1 样品含量测定结果 (μg·mL-1，n=3)

4 讨论

质量标准是控制药物制剂质量的基本，只有质量标准的不断完善与提升，才能更加安全、有效地控制制剂质量。苋黄洗剂的原质量标准检测项目较少，不能满足现行质量要求，故本试验完善苋黄洗剂的质量控制，制定更加科学合理的质量标准。

本试验参考相关文献，对比了以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)、甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)和苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇(10∶6∶1∶1)为展开剂对苦参碱鉴别的影响，结果甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂时，斑点不太清晰；甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)为展开剂时，展开后现象不明显；以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇(10∶6∶1∶1)为展开剂，斑点清晰，展开效果好，且重现性好。

苦参碱和盐酸小檗碱的含量测定方法有HPLC、毛细管电泳、紫外分光光度法等[5-9]，寻找一种高效、便捷、稳定的检测方法，对实际生产研发工作有重要意义。毛细管电泳、紫外分光光度法灵敏度低、易受其他成分影响、分离重现性差；HPLC法分离速度快、重复性高、分析精确度高，故本试验选择使用HPLC法同时测定苦参碱及盐酸小檗碱含量。

苦参碱及盐酸小檗碱均为生物碱，在碱性溶液中处于游离状态，能很好地溶于非极性溶剂，因此加入浓氨水碱化样品。参考相关文献[10-11]选择甲醇、75%甲醇和三氯甲烷作为提取剂，结果表明苦参碱及盐酸小檗碱均能很好地被三氯甲烷萃取，故选择三氯甲烷为提取剂。

对苦参碱和盐酸小檗碱标准品分别在200～400 nm下进行光谱扫描，结果显示苦参碱在220 nm处有强吸收，而盐酸小檗碱在227 nm和265 nm处均有强吸收。为提高检测灵敏度，使两组分在同一波长下均有较好吸收且无干扰，故选择225 nm为检测波长。经试验证实，在此波长下，苦参碱和盐酸小檗碱分离良好，保留时间充足。

本试验参考相关文献[12-13]，选择乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，考虑到HPLC条件对试验结果产生的差异，分别考察了不同流动相比例(35∶65、45∶55)、不同流速(1.0 mL·min、1.5 mL·min)和不同pH值(pH6.8、pH7.4)下两种成分的出峰时间，结果发现乙腈-磷酸盐缓冲液(pH6.8，v/v=45∶55)，流速：1.0 mL·min-1，分离效果和峰形更好，保留时间适中，基线稳定。

5 小结

苋黄洗剂为治疗火热毒邪发于肌表皮肤所出的斑疹而设。全方以苦参清热燥湿为君；黄柏泻火解毒为臣。苦参主要含有苦参碱、氧化苦参碱、黄酮类等有效成分，黄柏主要含有盐酸小檗碱、黄柏碱等。本试验采用薄层色谱法对苋黄洗剂中苦参碱和盐酸小檗碱进行定性鉴别，专属性高、呈现性好；采用高效液相色谱法同时测定苦参碱和盐酸小檗碱的含量，结果准确、可靠。优化了苋黄洗剂的质量标准，节约了时间，简化了试验步骤，为更好地控制苋黄洗剂的质量提供了科学、可靠的依据，可用于该制剂的工业生产。