连山香萸颗粒对人工感染鸡大肠杆菌的疗效试验

杨修镇，刘少宁，刘霄飞，张 坤，李玉姣

（山东省畜产品质量安全中心，山东 济南 250010）

随着我国养禽业集约化发展迅速，鸡细菌性疾病已成为日益威胁养禽业健康发展的重要疾病，其死亡率也明显升高，其中大肠杆菌病危害严重，该病由大肠埃希杆菌感染引起，可出现死胚、败血症、脑膜炎、眼球炎、脐炎、关节滑膜炎、肉芽肿、输卵管炎、卵黄性腹膜炎、肿头综合征等[1]，以败血症较常见，易导致死亡，给养禽业带来巨大经济损失。该病的治疗以土霉素、新霉素、恩诺沙星等[2-3]抗菌药物为主，禽大肠杆菌对抗菌药物易产生耐药性[4]，且抗菌药物易在肌肉、内脏、蛋等产品中产生残留危害消费者健康。

采用中药治疗禽病在我国有着悠久的历史，具有不产生耐药性、低毒、无有害物残留等优点[5]。连山香萸颗粒是山东省畜产品质量安全中心研制的新兽药，以黄连、常山、木香、吴茱萸四味药材组成。黄连清热燥湿、泻火解毒，可有效杀灭痢疾杆菌等肠道致病菌；常山富含常山酮具有广谱抗寄生虫作用；木香行气导滞，对肠道平滑肌有较强的解痉作用；吴茱萸散寒止痛。四味药配伍使用拟用于治疗禽肠道致病菌和寄生虫感染引起的腹痛、腹泻、急慢性肠炎等病症。本试验旨在探究连山香萸颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果，为其临床应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 22日龄SPF鸡，购自济南斯帕法斯家禽有限公司，许可证号SCXK（鲁）20180005。

1.1.2 菌种与培养基 鸡源大肠杆菌O1型标准菌株（CVCC 249），购自中国兽医药品监察所；营养琼脂平板、营养肉汤培养基，购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.1.3 试验药物 连山香萸颗粒，由黄连、常山、木香、吴茱萸四味药材组成，每1 g颗粒相当于原生药材1 g，批号20210501，山东晟阳生物工程有限公司中试生产；地锦草颗粒，批号20210301，山东华尔康兽药有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 攻毒剂量测定 依据参考文献[6-7]方法，以大肠杆菌半数致死量（LD50）为攻毒剂量，将鸡源大肠杆菌O1型标准菌株接种到营养琼脂平板，挑选典型菌落接种于营养肉汤中，37 ℃ 培养18 h，4 ℃ 冰箱保存备用。取试验鸡80只，随机平均分为4组，分别为菌原液10-2组、10-3组、10-4组、10-5组，颈部皮下注射0.3 mL/羽攻毒，观察72 h，记录死亡情况，对死亡鸡进行剖检，取脏器进行分离培养鉴定，按Reed and Muench法[8]计算半数致死量LD50＝10-3.1，为便于菌液稀释选用攻毒浓度为10-3稀释液，剂量为0.3 mL/羽。

1.2.2 治疗试验 依据参考文献[9-10]方法，将180只22日龄SPF鸡随机平均分成6组，除空白对照组外，每组以攻毒剂量颈部皮下注射菌液，注射后观察临床表现，待出现精神萎靡、羽毛松乱、两翼下垂、怕冷挤堆、闭眼昏睡、食欲减退、排黄绿色稀便等症状时投服试验药物。用药前禁水2 h，试验药物投入少量饮水中，一日剂量平均分2次，早晚各1次，供试验鸡自由饮水，连续用药5 d，高、中、低剂量组投药剂量分别为4 g/L、2 g/L、1 g/L。对照药物为地锦草颗粒，投药剂量2 g/L，阳性对照组感染但不给药，空白对照组不感染不给药，其他进行一致常规饲养。观察各组临床症状，主要包括精神状态、食欲、粪便等，记录各组发病时间、发病及死亡情况，对死亡鸡进行剖检，取脏器进行分离培养鉴定，确定死因，连续用药5 d，停药后继续观察5 d。

1.2.3 评价指标 在试验期间，鸡经混饮给药后，大肠杆菌感染症状消失，其精神状态、食欲、呼吸等恢复正常者均属治愈，治愈率=症状消失鸡数/试验鸡数。用药后治愈的和没有死亡但有临床症状表现的鸡均为有效，有效率=存活鸡数/试验鸡数。在试验期间，出现大肠杆菌感染的典型症状并死亡，剖检内脏能分离出大肠杆菌，判定为感染死亡，根据死亡鸡数计算死亡率。

2 结果

2.1 空白对照组

空白对照组在试验期间未出现大肠杆菌感染症状，精神状态和饮食状况均正常，试验结束后剖检无病变。

2.2 阳性对照组

阳性对照组在攻毒8 h后全部出现大肠杆菌感染症状，24 h内死亡6只，24～48 h死亡8只，48～72 h死亡1只，72 h后无死亡出现，试验结束时有3只已无明显症状。剖检病死鸡，可见盲肠、十二指肠出血，取脏器进行分离培养鉴定证实为大肠杆菌感染。

2.3 治疗组

治疗组在攻毒8 h后全部出现大肠杆菌感染症状，用药24 h后精神状态明显好转，采食量稍有增加。高剂量组24 h内死亡1只，24～48 h死亡1只，72 h后逐步恢复正常，试验结束时有轻微临床症状者5只；中剂量组24 h内死亡2只，24～48 h死亡1只，72 h后逐步恢复正常，试验结束时有轻微临床症状者6只；低剂量组24 h内死亡4只，24～48 h死亡3只，72 h后逐步恢复正常，试验结束时有轻微临床症状者10只；对照药物组24 h内死亡3只，24～48 h死亡2只，72 h后逐步恢复正常，试验结束时有轻微临床症状者7只（表1）。

表1 连山香萸颗粒对鸡大肠杆菌病治疗结果

对试验鸡治愈率和有效率进行X2检验，结果表明连山香萸颗粒高、中剂量组与对照药物相比差异显著（P＜0.05）。山香萸颗粒高、中剂量组治愈率分别为76.67%和70.00%，有效率高达93.33%和90.00%，表明对人工感染鸡大肠杆菌病具有明显治疗效果。

3 讨论与结论

山东地区禽大肠杆菌耐药性严重，有学者[11]研究表明对泰乐菌素的耐药率达100%，对克林霉素的耐药率达95.6%，对阿莫西林、土霉素、磷霉素的耐药率也超过80%。高迎春等[6]通过中药提取物对耐药菌株持续进行耐药性消除试验，寻找出具有抗耐药的地锦草提取物，研发了地锦草颗粒，故选取其为对照药物评价连山香萸颗粒的治疗效果。与已有文献[7,12-13]报道的复方白头翁颗粒、锦珠草颗粒、苦参功劳颗粒对人工感染鸡大肠杆菌的治疗效果相比较，连山香萸颗粒具有明显优势，且生产工艺[14]先进，可在10～30℃的水中快速分散混悬均匀，避免了传统中药颗粒需要热水冲泡的缺点，能更好地满足集约化养殖用药需求。

本试验证明连山香萸颗粒对人工感染鸡大肠杆菌病具有良好的治疗效果，高、中剂量组治愈率分别为76.67%、70.00%，有效率分别为93.33%和90.00%，考虑经济成本，以中剂量为推荐剂量用于鸡大肠杆菌病的临床治疗。