弩药液的刺激及过敏试验研究

邓万娟 梁潇 刘娇 蔡敏芳 胡涛 罗萍 阮婧华 钱海兵

摘要：目的  評价弩药液的皮肤刺激性及皮肤过敏性，为弩药液的应用提供安全依据。方法  皮肤刺激性试验：家兔4只，雌雄各半。采用自身对照，左侧为对照部位（温水），右侧为给药部位（弩药液），连续给药14 d，观察涂抹药局部有无红斑、水肿等反应，进行皮肤刺激反应及刺激强度评分，并取给药部位皮肤进行组织病理学检查。皮肤过敏性试验：豚鼠30只，雌雄各半，分为对照组（温水）、2-4二硝基氯苯阳性组（致敏1.0% 0.2 ml/只、激发0.1% 0.2 ml/只）和给药组（弩药液适量），于第1、7、14天在豚鼠左侧致敏，末次致敏结束后第14 d，右侧进行激发接触，并于激发后1、24、48和72 h观察过敏反应情况，计算各组豚鼠反应平均值和致敏率。结果  弩药液皮肤刺激试验中，皮肤反应积分均值为0，皮肤刺激强度为无刺激性，病理检查均未见组织病理学改变；在豚鼠皮肤过敏性试验中，弩药液组及对照组豚鼠激发接触72 h内观察，皮肤无红斑及水肿现象出现，其反应级别平均值为0，致敏率为0。结论  在家兔皮肤刺激性试验和豚鼠皮肤过敏性试验中，弩药液对家兔皮肤无刺激性，对豚鼠皮肤无过敏性。

关键词：弩药液；皮肤刺激性；皮肤过敏性

中图分类号：R859.79                                文献标识码：A                                DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.04.016

文章编号：1006-1959（2024）04-0090-05

Experimental Study on Irritation and Allergy of Crossbow Medicine

DENG Wan-juan1，2，3，LIANG Xiao1，2，3，LIU Jiao1，2，3，CAI Min-fang1，2，3，HU Tao1，2，3，LUO Ping1，2，3，RUAN Jing-hua4，QIAN Hai-bing1，2，3

（1.Basic Medical College of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，Guizhou，China;

2.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine Guizhou Province Authentic Medicine Sexual Utility

Consistency Research Center，Guiyang 550025，Guizhou，China;

3.Guizhou Provincial Key Laboratory of Research on Properties and Effects of Traditional Chinese Medicine ， guiyang of guizhou 550025;

4.The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，Guizhou，China）

Abstract：Objective  To evaluate the skin irritation and skin allergy of crossbow medicine， and to provide a safety basis for the application of crossbow medicine.Methods  Skin irritation test： four rabbits， half male and half female. Using self-control， the left side was the control site （ warm water ）， and the right side was the administration site （crossbow medicine）. After 14 days of continuous administration， the local erythema and edema were observed， and the skin irritation reaction and stimulation intensity were scored. The skin of the administration site was taken for histopathological examination. Skin allergy test： thirty guinea pigs， half male and half female， were divided into control group （warm water）， 2-4-dinitrochlorobenzene positive group （sensitization 1.0% 0.2 ml/guinea pig， challenge 0.1% 0.2 ml/guinea pig） and administration group （appropriate amount of crossbow liquid）. Guinea pigs were sensitized on the left side on the 1st， 7th and 14th day， and challenged on the right side on the 14th day after the last sensitization. Allergic reactions were observed at 1 h， 24 h， 48 h and 72 h after challenge， and the average reaction and sensitization rate of guinea pigs in each group were calculated.Results  In the skin irritation test of crossbow medicine， the mean value of skin reaction score was 0， the intensity of skin irritation was non-irritation， and no histopathological changes were found in pathological examination. In the skin allergy test of guinea pigs， no erythema and edema were observed in the skin of guinea pigs in the crossbow medicine group and the control group within 72 h， and the average reaction level was 0， and the sensitization rate was 0.Conclusion  In the rabbit skin irritation test and guinea pig skin allergy test， the crossbow medicine has no irritation to rabbit skin and no allergy to guinea pig skin.

Key words：Crossbow medicine;Skin irritation;Skin allergy

苗药弩药液是由大血藤、飞龙掌血、透骨香、白屈菜、黑骨藤组成，具有活血化瘀，祛风止痛的功能。常用于骨关节炎、类风湿等引起的关节疼痛[1，2]，亦可用于癌性疼痛辅助治疗。苗药弩药液在苗族地区广泛使用，并在贵州中医药大学第一附属医院已进行临床应用，具有一定疗效。本研究按照国家食品药品监督管理总局的《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》要求进行了刺激性及全身主动过敏反应（ASA）试验，旨在为临床应用提供安全性实验数据。

1材料与方法

1.1仪器  组织切片机（浙江省金华市科迪仪器设备有限公司，型号：RM2265）；电子天平（常熟市双杰测试仪器厂，型号：JJ224B）；倒置显微镜（奥林巴斯公司，型号：BX53F）。

1.2药品与主要试剂  弩药液（由贵州中医药大学第一附属医院制剂中心提供，批号：20211201）；2-4二硝基氯苯[西亚化学科技（山东）有限公司，批号：20220504]。

1.3实验动物  普通级新西兰兔4只，体重1.5～2 kg，雌雄各半；豚鼠30只，体重300～400 g，雌雄各半；购于重庆腾鑫生物技术有限公司，实验动物许可证号：SCXK（渝）2017-0010。实验性喂养7 d后开始试验。

1.4方法

1.4.1皮肤刺激性试验[3-5]  选用健康、成年、皮肤无破损的普通级新西兰兔4只，雌雄各半，适应性喂养7 d。试验前24 h将动物背部脊背两侧去毛，不损伤表皮，面积约为3 cm×3 cm。蘸取弩药液涂抹于左侧去毛皮肤上，用塑料薄膜外包，再用无刺激性胶布、纱布固定，维持4 h后用温水清洗，右侧作为空白对照部位，涂抹温水，1次/d，连续外敷14 d，并于1 h后观察涂抹药局部有无红斑、水肿等反应情况，按表1、表2进行皮肤刺激反应及刺激强度评分，皮肤刺激反应平均值=（红斑形成总分+水肿形成总分）/合计动物数。第14天维持4 h温水清洗观察反应情况后，空气栓塞法处死家兔，剪去给药部位皮肤及皮下组织，进行固定、脱水、透明及浸蜡，常规石蜡包埋切片，HE染色后观察其组织病理变化。

1.4.2皮肤过敏性试验[6-8]  选用豚鼠30只，适应性喂养7 d后，采用完全随机设计分为3组，对照组（温水）、阳性组（2-4二硝基氯苯，致敏1.0% 0.2 ml/只、激发0.1% 0.2 ml/只）和给药组（弩药液适量），每组10只，雌雄各半。试验前24 h动物背部脊背两侧去毛，不损伤表皮，面积约为4 cm×4 cm。蘸取弩药液、温水、1.0% 2-4二硝基氯苯涂抹于左侧去毛皮肤上，用塑料薄膜外包，再用无刺激性胶布、纱布固定，维持6 h后用温水清洗。于第1、7、14天致敏3次，末次致敏结束后第14天，蘸取弩药液、温水、0.1% 2-4二硝基氯苯涂抹于右侧去毛皮肤上，进行激发接触，维持6 h后用温水清洗，并于第1、24、48和72 h观察豚鼠皮肤红斑、水肿等其他过敏反应情况。按上述表1、表2计算皮肤过敏反应平均值及致敏率。皮肤过敏反应平均值=（红斑形成总分+水肿形成总分）/合计动物数，致敏率=皮肤过敏反应阳性（不论程度轻重）动物数/受试动物总数，致敏率：0～10%，无致敏性；11%～30%，轻度致敏性；31%～60%，中度致敏性；61%～80%，高度致敏性；81%～100%，极度致敏性。反应平均值=（红斑形成总分 + 水肿形成总分）/合计动物数。

1.5统计学方法  利用Excel软件计算皮肤刺激反应平均值、皮肤过敏反应平均值及致敏率。

2结果

2.1皮肤刺激性试验  弩药液完整性皮肤连续14 d局部给药，4只家兔给药侧及对照侧均未出现红斑、水肿等反应情况，且皮肤刺激分值均为0，见图1。

2.2弩药液刺激性试验皮肤组织病理情况  组织病理学检查显示，家兔的给药侧和对照侧皮肤结构正常清晰，均未见棘层及角质层萎缩变薄，无表皮坏死或炎性细胞浸润等病理改变，见图2。

2.3皮肤过敏性试验  弩药液组及对照组（温水）豚鼠激发接触72 h内观察，皮肤无红斑及水肿现象出现，其反应级别平均值为0，致敏率为0；阳性对照组红斑、水肿现象明显表現为不同级别的致敏反应指征、致敏率100%，见图3、表3。

3讨论

苗医药理论认为，人体的生灵能（相当于中医的正气）不足时，毒邪就会内侵，所以苗医“毒学说”认为“百病由毒而生，毒为百病之源”“无毒不致病，无乱不成疾”[9]，并且把祛除毒素作为防治疾病的重要手段，总结形成了“治毒九法”，即攻毒法、表毒法、赶毒法等，以应对毒邪[10]。弩药液便是用“以毒攻毒”的方式去治疗疾病[11]。弩药液由黑骨藤、大血藤、透骨香、白屈菜、飞龙掌血组成的棕色液体，具有活血化瘀、祛风止痛的功效[12]。苗药弩药源自古代苗人射杀动物涂于弓箭上的剧毒药物，后经过减毒[13]，多次改进，目前已经成为一个质量稳定可控、疗效确切的外用医院制剂，常将弩药液直接涂抹于患处或与传统弩针联合应用以及用弩药桑枝棒[14]。

透皮给药是弩药液的疗效作用精髓，通过苗医理论中的“汗窟”和“毛窟”，将弩药送入患处皮肉经脉之间，从外治内，从而达到“攻毒”的作用[15]。弩药液中黑骨藤（性热）为领头药，具有舒筋活血、祛风除湿的功效；大血藤（性冷）、透骨香（性热）等铺底药，具有加强领头药祛风除湿的作用和活血止痛的功效，再加以米酒，引诸药入血脉，兼以行气止痛，散瘀止痛[16]。其中弩药液的各味药，包括黑骨藤[17]、大血藤[18，19]、透骨香[20]、白屈菜[21]、飞龙掌血[22]等现代药理研究均已证实具有抗炎和镇痛等药理作用，所以弩药液具有显著的抗炎镇痛作用。弩药液在临床上广泛用于治疗项痹、腰痹等疼痛类和风类疾病[23]，且目前弩药液利用喷雾器进行外用，方便高效。

由于弩药液中的黑骨藤、白屈菜、飞龙掌血等药物具有毒性，所以弩药液对皮肤的刺激性和过敏性仍是临床中需重视的问题。本研究用家兔和豚鼠对弩药液进行皮肤刺激性和过敏性试验，可为弩药液临床安全用药提供一定的参考。皮肤刺激性试验中，与对照侧对比发现，弩药液给药侧皮肤刺激反应平均值为0，且弩药液给药侧皮肤未出现红斑、水肿等异常表现。并且与对照侧相比，弩药液给药侧皮肤的病理检查也未见组织病理学改变，因此认为弩药液对家兔完整皮肤无刺激性反应。

皮肤过敏性试验中，豚鼠主动皮肤过敏性试验3次致敏后，阳性组受试药物区域均出现轻度至中度红斑、水肿，随后出现皲裂结痂；在激发之前均恢复正常，弩药液给药组和对照组均未见红斑、水肿等异常表现。激发阶段，阳性组动物激发后1 h即刻出现过敏反应，出现轻度至中度红斑、水肿，72 h后恢复，致敏率为100%，皮肤过敏反应平均值在1.7～1.9，弩药液给药组和对照组动物给药部位均未出现红斑、水肿等异常表现以及哮喘、站立不稳、休克等严重全身过敏反应，致敏率为0，皮肤过敏反应平均值为0。因此认为弩药液对豚鼠完整皮肤无过敏性反应。

整个皮肤试验过程中，未出现试验动物死亡的情况。弩药液皮肤刺激性试验以及皮肤过敏性试验研究均符合相关国家规范和要求。本实验研究证明了弩药液对皮肤的安全性，验证了弩药液是一种无刺激、无致敏、安全性高的外用制剂，为进一步深入研究和临床应用提供参考。

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收稿日期：2023-02-28；修回日期：2023-04-07

编辑/肖婷婷