肝纤四项联合血小板检测在肝纤维化诊断中的应用价值

李彩彩

（汝阳县人民医院输血科，河南 汝阳 471200）

肝纤维化通常是慢性肝病进展至肝硬化的关键阶段，是肝内结缔组织因肝脏损伤而修复愈合这一过程中出现病理性异常增生的过程，早期并无明显异常表现，但伴随病情加重，肝脏负担增加，会逐渐间歇性出现症状，甚至发展成为肝硬化，严重危及患者健康与安全。肝纤维化在未进一步发展前予以积极治疗，在组织学上其病变大多可逆，而进一步发展后不仅逆转非常困难，患者即便接受治疗其预后也相对较差[1]。因此，及时有效诊断肝纤维化并在进一步发展至肝硬化前积极逆转患者病情，是改善慢性肝病患者预后的重要前提条件。肝穿刺活检是目前临床明确诊断肝纤维化的金标准，但这一检查操作不仅有创，患者所需承担的经济压力也相对较大，并不受多数患者所青睐，这也造成这一检查方法在临床实践中并未普及应用[2]。近年来，随肝纤维化血清标志物的检测技术及仪器的不断革新，肝纤四项检查在肝病诊断及病情评估中得到了广泛应用[3]。不过肝纤四项检查在肝纤维化的诊断灵敏度及特异度方面尚有欠缺，为提高其诊断效果，临床提出联合与这一检查方法存在一定相关性的血小板计数（Platelet count，PLT）对肝纤维化患者病情进行诊断。由于肝脏病变后机体造血系统也会受到负性影响，因此肝纤维化时患者血小板往往会出现明显异常表达。有研究更是明确提出，血小板计数在预测肝纤维化程度方面具有较高应用价值。

基于此，本研究分析了肝纤维化诊断中肝纤四项联合血小板检测的应用价值，从而为提高临床肝纤维化的诊断效率提高参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2021 年11 月至2023 年6 月期间收治的疑似肝纤维化患者80 例作为研究对象，纳入研究组，研究组男57 例，女23 例，平均年龄48.43±9.26岁，平均体质量指数22.71±1.21 kg·m-2，受教育程度：初中及以下52 例，高中及以上28 例；另选取80 例同期体检健康人员，并纳入对照组，对照组男56 例，女24 例，年龄27-71 岁，平均49.03±9.19 岁，体质量指数22-24 kg·m-2，平均22.69±1.18kg·m-2，受教育程度：初中及以下50 例，高中及以上30 例；两组一般资料比较，P＞0.05，组间具备可比性。

纳入标准：研究组肝纤维化符合2000 年修订版病毒性肝炎防治方案[4]中相关诊断标准；临床资料完整；均接受肝穿刺病理性检查且对该项检查操作耐受；具备基本理解沟通能力；知情且自愿参与研究；对照组肝功能正常；肝活组织检查无肝纤维化病变；语言交流能力良好；知情且自愿参与研究，签订医患同意书；排除标准：研究组合并严重血液系统疾病或长期酗酒史；有肝脏损害药物应用史；胆汁淤积性肝炎；精神状态极差；治疗依从性差。对照组排除标准：长期酗酒史或有肝脏损害副作用的药物应用史；有肝活组织检查禁忌症；拒绝参与研究或无法正常与他人进行沟通交流；肝功能异常疾病史。本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 样品采集

两组均取5 mL 患者空腹外周肘静脉血，采用离心机以转速3000 r·min-1，半径20 cm，离心10 min后，静置，待血样分层基本稳定后，采用抗凝管取上层清液，放置在低温（-20℃）环境下保存待检。

1.2.2 血小板检测

采用SYSTEM XN 20 全自动模块式血液体液分析仪及配套试剂盒（SYSMEX EUROPE GMBH，国械注进20162220778）对血样进行检测，以PLT 为主要观察指标，其参考范围为100-300×109·L-1。

1.2.3 肝组织学检查

采用迈瑞DC-35Pro 型彩色多普勒超声诊断仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，粤械注准20212060374）引导美国巴德MG15-22 型全自动活检穿刺枪（巴德外周血管股份有限公司，国械注进20172140925）Magnum 活检针取肝活组织，并将1.5-2.5cm 肝活组织固定置于10%中性福尔马林液中，并依次完成脱水、石蜡包埋、切片（大小约4µm）及染色（染色依次选择苏木素-伊红、Masson、嗜银网状纤维）处理，其后采用泰立瑞数字病理图像管理系统（洛阳和华科技有限公司，豫械注准20172700905）进行读片。

1.3 观察指标

（1）比较研究组与对照组的检测结果，采用厂家安图全自动化学发光测定仪AutoLumo A2000 Plus及配套试剂盒（郑州安图生物工程股份有限公司，豫械注准20192220577）对血样进行检测，以Ⅳ型胶原（collage typeⅣ,col Ⅳ）、Ⅲ型前胶原N 端肽N 端肽（Ⅲ procollagen amino-terminal peptide，PⅢNP）、层粘连蛋白（Laminin，LN）、透明质酸酶（Hyaluronidase，HA）为主要观察指标。col Ⅳ参考范围＜95 ng·mL-1，PⅢNP 参考范围＜15 ng·mL-1，LN 参考范围为＜130 ng·mL-1，HA 参考范围＜120 ng·mL-1。。（2）对比不同肝纤维化程度患者的检测结果，肝纤维化程度评估采用Ishak 法。（3）以肝穿刺活检结果作为金标准，分析肝纤四项及血小板检测对肝纤维化诊断的效能，其中准确性为真阳性与真阴性例数之和与总例数的百分比值，敏感性为真阳性例数和真阳性与假阴性例数之和的百分比值，特异性为真阴性例数和真阴性与假阳性例数之和的百分比值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 比较两组检测结果

研究组血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均明显高于对照组，PLT 水平则明显低于对照组，P＜0.05。见表1。

表1 两组检测结果对比(±SD)

表1 两组检测结果对比(±SD)

注：与对照组相比，*P＜0.05。

2.2 比较不同肝纤维化程度患者的检测结果

本研究80 例疑似肝纤维化患者中，肝穿刺活检确诊为肝纤维化患者61 例，其中轻度35 例，中度26例。中度肝纤维化患者血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA水平均明显高于轻度肝纤维化患者，PLT 水平低于轻度肝纤维化患者，P＜0.05。见表2。

表2 不同肝纤维化程度患者的检测结果对比(±SD)

表2 不同肝纤维化程度患者的检测结果对比(±SD)

注：与轻度肝纤维化相比，*P＜0.05。

2.3 不同诊断方式与肝穿刺活检结果的一致性分析

肝纤四项检查诊断肝纤维化阳性53 例，阴性27例，与肝穿刺活检诊断相符的阳性50 例，阴性16 例，分析这一诊断结果与肝穿刺活检结果的一致性，Kappa=0.578，提示肝纤四项检查与肝穿刺活检之间仅有中等强度的一致性。

PLT 检测诊断肝纤维化阳性42 例，阴性38 例，其中真阳性33 例，真阴性10 例，诊断准确性为52.50%，一致性分析Kappa=0.050，提示PLT 检测与肝穿刺活检之间仅有极低强度一致性；肝纤四项联合PLT 检测诊断为真阳性58 例，真阴性19 例，肝纤四项联合PLT 检测与肝穿刺活检之间具有高度一致性（Kappa=0.902）。具体见表3。

表3 不同诊断方式的效能对比(±SD)

表3 不同诊断方式的效能对比(±SD)

表4 不同诊断方式对肝纤维化的诊断效能

2.4 不同诊断方式对肝纤维化的诊断效能比较

肝纤四项联合PLT 检测诊断肝纤维化的准确性、敏感性、特异性及与肝穿刺活检结果的一致性强度均明显高于肝纤四项检查及PLT 检测，且肝纤四项检查诊断肝纤维化的准确性、敏感性、特异性及与肝穿刺活检结果的一致性强度均明显高于PLT 检测，P＜0.05。

图1 不同方式诊断肝纤维化的ROC 曲线

3 讨论

肝纤维化是一种与慢性肝脏疾病有密切关系的病理现象，其预后取决于是否能逆转或阻滞患者病情进展至肝硬化阶段。肝纤维化作为肝硬化的前期病理过程，是可逆的[5]。患者应及时就诊并定期复查，以助早期及时发现肝纤维化，并采取对应措施逆转病情，改善患者预后。

临床诊断肝纤维化的手段较多，肝穿刺活检是肝病明确诊断的金标准，但由于有创，多数患者在有选择的情况下并不青睐这一检查方式。且由于取样存在误差风险，也可能存在误诊或漏诊[6]。

肝纤四项是临床医师了解肝纤维化进程的重要血清学指标[7]。在病情发展过程中，胶原、糖蛋白、蛋白多糖等细胞外基质大量合成并沉积于肝脏是肝纤维化形成的关键，而细胞外基质的合成与肝星状细胞激活后大量增生、转化、分解密切相关[8]。有研究报道，肝纤四项（col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA）检查在肝纤维化早期诊断中具有较高应用价值，但这一检查方式的诊断效果仍有较大提升空间[9]。

本研究分析疑似肝纤维化患者接受肝纤四项联合血小板检测的诊断结果，可知肝纤维化患者的血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均显著高于非肝纤维化患者，PLT 水平则显著低于非肝纤维化患者。这主要在于肝纤维化形成过程中肝星状细胞会被激活，并被诱导为肌纤维母细胞样表型参与肝纤维形成，而肝星状细胞增生、转化及分解会合成大量以HA 等物质为主要成分的细胞外基质，因此伴随肝纤维化出现，HA等物质在血清中的含量会出现相应变化；再有，肝纤维化会影响肝脏正常分泌血小板生成因子，纤维化越严重，血小板生成因子分泌量越少，血小板降低程度也会越明显；这提示检测肝纤四项及合血小板血清含量均可为临床判断肝纤维化程度提供参考依据。

进一步分析不同肝纤维化程度患者的检测结果也发现，中度肝纤维化患者血清col Ⅳ、PⅢNP、LN、HA 水平均显著高于轻度肝纤维化患者，PLT 水平则显著低于轻度肝纤维化，证实肝纤四项联合血小板检测可有效预测肝纤维化严重程度。张杨武等[10]在类似研究中也表示，肝纤四项联合血小板检测可准确诊断早期肝纤维化，并有效预测患者病情严重程度。

另外，本研究发现，肝纤四项联合PLT 检测诊断肝纤维化的准确性、敏感性、特异性及与肝穿刺活检结果的一致性强度均显著高于肝纤四项或血小板检测单独诊断，也表明本研究诊断方案在肝纤维化诊断中具有较高应用价值。

综上所述，在肝纤维化诊断中采用肝纤四项联合血小板检测这一诊断方案其临床应用价值较高，尤其在提高该疾病早期检出率及病情严重程度预测方面效果突出。