桑圣沛,温 舒,鲁 晨,张洪刚,孙继燕,宇 凌
(1.山东省巨野县畜牧服务中心,山东 巨野 274900;2.山东省菏泽市动物疫病预防控制中心,山东 菏泽)
鸡白痢(Pullorum disease)是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染性疾病,各种品种的鸡均有感染性,其中成年鸡常呈隐性经过或慢性感染,雏鸡在2~3 周龄的易感性较高,具有高发病率和高死亡率。一直存在本病的鸡场中,雏鸡的发病率为20%~30%,但新传入该病的鸡场,发病率会增高,可达到100%,病死率也显著增高[1]。鸡白痢沙门氏菌常寄生在肠道内,为肠杆菌科沙门氏菌属,革兰阴性菌,无荚膜、鞭毛,无法运动,两端钝圆呈直杆状[2]。该菌对热的抵抗力较弱,在高温下通常几分钟就会死亡,但对干燥、腐败、日光、低温等因素抵抗力很强,在禽舍中存活可超过一年,在干燥的土壤中可以存活4 个月,对高锰酸钾、福尔马林等化学消毒剂的抵抗力不强,一般常用消毒剂和消毒方法均能达到消毒目的。
最急性的病鸡无明显症状突然死亡,症状稍缓者,病鸡精神沉郁、绒毛蓬乱、缩颈闭眼,呈昏睡状,集堆,不愿走动,食欲减退废食、大多数出现软嗉。排灰白色糊状粪便,黏附于肛门周围的羽毛上,肛门被粪便堵塞而造成排粪困难,病鸡出现怒责,发出“咯咯”叫声和呻吟声,最后因呼吸困难、心力衰竭而死亡。有的病鸡还患有关节肿胀,呈现坡行或伏地不动等症状[3]。成年鸡多数呈隐性经过或慢性,多数无明显的症状,但产蛋量、孵化率、受精率明显下降,孵化出的雏鸡也大多为患病鸡。有的成年鸡也会表现出发育不良,精神萎顿,腹泻,因患卵黄性腹膜炎而呈“垂腹”的现象。
鸡白痢可垂直传播,也可经种蛋传播。患鸡白痢的病鸡产的种蛋多数为带菌蛋,通常在孵化后期种蛋死亡,孵化成功出生的雏鸡也易在7 d之内患病,一般死亡率很高。该病也可水平传播,病鸡同舍群中的鸡容易被感染,主要通过粪口传播,被污染的水和饲料通过呼吸道、消化道、眼结膜进入体内造成健康鸡的感染。
世界卫生组织将鸡白痢列为B 类传染病,也是我国农业部重点监测疾病之一,鸡白痢是严重危害养殖业的一种细菌性疾病,高发病率和高死亡率,给鸡场造成严重的经济损失。为了更好地预防和控制这种疾病,甚至最终净化这种疾病,对沙门氏菌进行全面研究有着重要的意义。
1.1.1 病鸡 山东某鸡场临诊症状疑似鸡白痢的30 只两周龄肉鸡。
1.1.2 试验试剂 革兰染色液(生产日期:2021年10月23 号,购于广州市西塔生物科技有限公司);阿莫西林(10 μg/片)、诺氟沙星(10 μg/片)、庆大霉素(10 μg/片)、四环素(30 μg/片)、头孢唑啉(30 μg/片)、红霉素(15 μg/片)、复达欣(30 μg/片)、阿米卡星(30 μg/片)、头孢拉定(30 μg/片)、头孢哌酮(75 μg/片)、氟苯尼考(30 μg/片)、卡那霉素(30 μg/片)等12 种药敏片(生产日期:2021年9月7 号,购于杭州天和微生物试剂有限公司)。
麦芽糖、阿拉伯糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、七叶苷、水杨素、肌醇、尿素、硫化氢、蕈糖等12 种生化鉴定管(生产日期:2021年10月13 号,购于青岛海博生物技术有限公司);麦康凯琼脂培养基、普通肉汤、三糖铁培养基、半固体琼脂培养基(生产日期:2021年12月20 号,均购于青岛捷世康生物科技有限公司)。
1.1.3 试验仪器 恒温培养箱(型号:YMJ-250F,购于苏州景通仪器有限公司);超净工作台(型号:SW-CJ-2F,购于苏州景通仪器有限公司)。
1.1.4 试验动物 15 只10 日龄健康雏鸡。
1.2.1 细菌分离纯化试验 在无菌的情况下,取鸡肝脏的病料组织划线接种于麦康凯培养基,在37 ℃ 的条件下培养24 h。将麦康凯培养基上的革兰阴性菌特征性菌落,接种于三糖铁斜面培养基上,在37 ℃ 的条件下恒温培养24 h 后观察。
1.2.2 革兰染色试验 从三糖铁斜面培养基上挑选白色透明、菌落边缘光滑、湿润的特征性菌落进行革兰染色试验。在无菌的载玻片上,滴加1~2 滴生理盐水,用接种环挑取特征性色菌落均匀地涂片并干燥固定;结晶紫染色2 min 后水洗;碘液染色1 min,水洗;95%的酒精进行脱色15~30 s,水洗;复染液染色2 min 水洗;用吸水纸将多余的水分吸走,在显微镜下进行观察。
1.2.3 生化试验 对纯培养得到的疑似鸡白痢沙门氏菌分离株分别接种于麦芽糖、阿拉伯糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇等进行生化试验指标的测定。
1.2.4 毒力检测试验 将分离的细菌置于肉汤中,取0.5 mL 细菌培养液注射到健康的雏鸡腹腔中,取10 只雏鸡进行试验。另外取5 只雏鸡在腹腔中注射肉汤,进行对照试验,并每天观察和记录它们的生理状况,如果有死亡的雏鸡,从其体内分离细菌进行培养及革兰染色试验。
1.2.5 药敏试验 将鸡白痢沙门氏菌接种到普通的培养基上,将菌种均匀地涂开,取药敏片有规律固定间距地贴到平皿培养基上。将平皿培养基置于37 ℃ 温箱中培养24 h 后,观察结果。
1.2.6 治疗方案 使用药敏试验测得鸡白痢沙门氏菌对诺氟沙星、氟苯尼考敏感性高,对鸡场150 只患有鸡白痢的病鸡进行治疗。将诺氟沙星、氟苯尼考与饲料混合,诺氟沙星比例为0.1%~0.2%,氟苯尼考比例为0.1%,连用5~6 d。
麦康凯培养基长出白色透明,菌落边缘光滑、湿润的菌落与培养沙门氏菌的特性一致(图1)。再将分离纯化的细菌接种于三糖铁培养基,培养基斜面为红色,底面为黄色,与鸡白痢沙门氏菌的特征一致。
图1 麦康凯培养基培养的鸡白痢沙门氏菌落
革兰染色观察到细菌为两端顿圆,呈杆状,革兰染色为红色,多数单个分布(图2),与鸡白痢沙门氏菌的特征一致。
图2 革兰染色鸡白痢沙门氏菌镜检图(1000×)
分离菌的生化测定结果显示,分离菌对麦芽糖、阿拉伯糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖呈阳性,肌醇、硫化氢、尿素、七叶苷、蕈糖、水杨素、蔗糖呈阴性(表1)。将生化试验结果比对伯杰细菌鉴定手册,确定分离菌为鸡白痢沙门氏菌。
表1 疑似鸡白痢沙门氏菌分离株生化反应结果
接种细菌的雏鸡在3 d 之内死亡8 只,雏鸡精神沉郁,食欲减退,绒毛松乱,排白色粪便,肛门周围羽毛粘有粪便,发出尖叫声,陆续死亡,而接种肉汤的雏鸡正常生活,各种生命活动指标正常(表2)。将死亡的雏鸡进行解剖,发现肝脏淤血坏死,培养与镜检结果显示为鸡白痢沙门氏菌,病菌具有致病性。
表2 毒力试验结果
药敏试验结果显示,分离菌对阿莫西林、诺氟沙星、氟苯尼考、庆大霉素、四环素、头孢唑啉、头孢哌酮、复达欣敏感,其中诺氟沙星、氟苯尼考敏感性更高,可推荐用于临床治疗;对红霉素、头孢拉定为中介;对阿米卡星耐药(表3)。
表3 药敏试验结果
对150 只病鸡进行治疗,病鸡使用诺氟沙星混合饲料50 ppm、氟苯尼考口服0.1~0.15 g,2次/d,3 d 后病情得到了基本的控制,精神好转,其中病情较轻的72 只鸡恢复健康状态,继续使用3 d 基本痊愈。治疗后大约138 只病鸡恢复健康状态,治疗率为92%,12 只死亡,死亡率为8%(表4)。
表4 治疗结果
药敏试验结果显示,分离菌对阿莫西林、庆大霉素、诺氟沙星、氟苯尼考、四环素、头孢哌酮、头孢唑啉、卡那霉素、复达欣敏感,其中诺氟沙星、氟苯尼考敏感性更高;对红霉素、头孢拉定为中介;对阿米卡星耐药。对于患鸡白痢的病鸡,大多数鸡场采用抗生素药物进行治疗,但要注意剂量,避免产生耐药性,注意交替、穿梭用药,在治疗时应选择平时不用或少用的药,并结合药敏试验进行选择,以达较好的治疗效果。同时也要注意治疗过程中的用药禁忌,不恰当的用药会使蛋鸡产生严重的副作用,给养殖场户造成严重的经济损失。我国农业部在多个文件列出兽药禁用药40 多种,诺氟沙星、氟苯尼考不在禁用药范围之内。通过使用诺氟沙星、氟苯尼考进行治疗,使92%的病鸡恢复健康状态,8%的病鸡死亡。诺氟沙星、氟苯尼考不可在蛋鸡产蛋期内使用,在产蛋鸡期间,尽量少用或不用药物预防,过量使用药物或不恰当的使用会使产蛋鸡的产量下降,也不能保证养殖的安全性。本研究的药敏实验与李静怡[4]药敏试验结果有很大的差异,药敏试验结果显示头孢他啶、氯霉素、头孢吡肟、庆大霉素、多黏菌素B、卡那霉素和阿米卡星等药物敏感,氨苄西林、复方新诺明、四环素、甲氧苄啶、青霉素耐药。与张志文[5]的药敏试验有一定的差异,分离菌对青霉素等药物高度耐药,对阿米卡星、苯唑青霉素耐药,对复达欣特别敏感。致病菌的耐药程度可能与养殖场的用药习惯、养殖场的饲养环境密切相关。孙书静[6]使用呋喃酮(痢特灵),在病雏饲料中按0.01%~0.04%添加或是在饮水中按0.01%~0.02%添加,连续饮7 d,治愈率为90%。唐彬[7]用链霉素治疗,放入饮用水中,混水比例为0.1%~0.2%,连续用药3~4 d,94%的病鸡可恢复到健康状态。周武全[8]治疗鸡白痢采用中草药进行治疗,可将白头翁、白术、茯苓等研磨成粉末状,拌于饲料中,服用数天,可获得较好的治疗效果。杨定坤[9]用葱、大蒜治疗鸡白痢也具有较好的治疗效果,将去皮的洋葱或大蒜碾碎拌于饲料中,抗生素混合使用效果会更好,可使95%的病鸡获得痊愈。
鸡白痢沙门氏菌病的预防是关键一步。严格挑选健康无疾病的种蛋、种鸡。坚持自繁自养,不从有疫情的地区引进种鸡、种蛋。养殖人员要对种鸡定期进行春秋两季的血清凝集试验,进行全面检疫或不定期接种。加强饲养管理,保持合理的禽舍温度,做好防寒保暖措施,温度不要过低,低温可导致鸡白痢的发病率升高。经常通风,保持空气流通,保证禽舍处于干燥的状态[10]。垫草应该勤晒和勤换。饲养密度要合理,避免禽舍过度拥挤。要经常对禽舍进行消毒,特别是雏鸡的保育室,对种蛋的孵化器进行消毒,对饲养槽和净水器定期消毒并每天进行清洗,以免粪便污染饲料与饮水。时刻关注雏鸡的生活状态,一旦发现排白色粪便,病鸡糊肛等症状应立即进行合理治疗[11]。保证鸡的营养均衡,提高鸡体免疫力,可以添加抗生素的饲料添加剂,不仅有预防作用,还可促进动物生长,但要注意地区抗菌株的出现。
进行细菌分离纯化培养、革兰染色试验、生化试验确诊病鸡感染鸡白痢沙门氏菌,毒力试验结果反应鸡白痢沙门氏菌具有致病性,通过药敏试验发现鸡白痢沙门氏菌对诺氟沙星、氟苯尼考高敏。使用诺氟沙星、氟苯尼考进行治疗,获得良好的效果,治愈率为92%,死亡率为8%。