GeneX-pertMtb/RIF 检测技术与抗酸染色和BD960培养、药敏的效果分析

陈千红 厦门市第三医院 （福建 厦门 361000）

内容提要： 目的：探究GeneX-pertMtb/RIF检测技术与抗酸染色和BD960培养、药敏的效果。方法：研究选取2022年1月～2022年12月医院收集的确诊结核病的80例患者痰液标本，均实施GeneX-pertMtb/RIF检测技术、抗酸染色、BD960培养以及药敏检验，对比三种方法检验的阳性率、检验敏感性以及药敏检验结果。结果：抗酸染色涂片、BD960培养、GeneX-pertMtb/RIF阳性例数分别为29例、44例、51例，阳性率分别为36.25%、55.00%、63.75%，GeneXpertMtb/RIF检验＞BD960检验＞抗酸染色涂片检验；抗酸染色涂片检验、BD960检验、GeneXpertMtb/RIF检验的敏感性分别为36.25%（29/80）、55.00%（44/80）、63.75%（51/80）；经GeneXpertMtb/RIF检测51例阳性结果中利福平耐药17例（33.33%），BD960药敏试验44例阳性结果中利福平耐药患者8例（18.18%），GeneXpertMtb/RIF检测耐药性较好。结论：GeneX-pertMtb/RIF检测技术在应用过程中具有准确性高、灵敏性好、操作简单、使用便捷等优势，能够进行结核菌排查，同时还可以展开药敏实验，而且交叉污染发生率低，更加具有生物安全性。

结核病是由结核分枝杆菌感染所引起的慢性传染性疾病，该疾病可以发生在任何年龄，且机体免疫力低下者其发生风险更高。疾病发生后对患者肺脏以及其他部位，例如脑部、淋巴结器官、肝脏、肾脏等均产生损伤，如果不能及时进行诊断，并给予科学治疗，极易导致患者病症加重，增加疾病传染风险。不典型的结核病是现阶段临床疾病诊断过程中需要重点关注的问题，尽管我国临床诊断技术逐渐完善发展，但仍然以结核菌为确诊标准[1]。利用传统的菌培养能够起到一定的诊断效果，但由于该种方式耗费时间长，极易导致患者错过最佳治疗时机，增加患者死亡风险，因此该技术在临床疾病诊断过程中存在一定弊端。GeneX-pertMtb/RIF检测技术是基于cepherd公司的GeneXpert系统的一种检验方案，作为全自动一体化的PCR体外诊断技术，在结核病诊断以及药敏实验中均有重要作用，对患者疾病治疗方案有重要指导价值[2]。基于此，研究选择医院收集的确诊结核病的80例患者痰液标本，均实施涂片、BD960培养、BD960药敏试验及GeneXpertMtb/RIF检测，对比其检验敏感性以及药敏效果，为今后结核病检验以及药敏实验奠定基础。

1.资料与方法

1.1 临床资料

研究选择2022年1月～2022年12月医院收集的确诊结核病的80例患者痰液标本为研究样本。80例中男性50例，女性30例，年龄42～78岁，平均（55.25±2.45）岁，体重48～68kg，平均（60.25±2.45）kg。研究在不违背医学伦理要求基础上实施。参与研究者知情本次研究内容，表示自愿参与研究。

纳入标准：肺结核病者均符合《肺结核诊断和治疗指南》[3]中相关诊断内容；数据资料完整；具备正常交流沟通能力。

排除标准：肺结核者合并其他肺部疾病；存在严重脏器器质性损伤；精神障碍性疾病；拒绝医学观察。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

本次研究过程中使用的仪器以及试剂详细内容如表1。

表1.仪器以及试剂

表2.三种方法检验的阳性率比较

表3.三种方式敏感性对比

1.2.2 涂片与抗酸染色

依据《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》中相关内容为依据实施涂片抗酸染色处理。

1.2.3 培养及菌种鉴定

利用行BD960液体进行快速培养，针对培养过程中产生的阳性标本需要实施BD960药敏实验。操作内容主要包括：①在进行痰液标本的处理前，需要将5mL痰液放置500mL的已经被标记的离心管中，向其中加入前处理液（2%NALCNaOH）而后进行强力涡旋震荡，时间控制在20s，将其放置在室温下，静置15～20min。向其中加入无菌的pH值为6.8的PBS，直至液体约为50mL后，将盖子盖紧后对其进行离心处理，离心过程中3500r/min，15min，将上层清液处理后向其中加入无菌的pH值为6.8的PBS1-3mL，进行混悬液制备；②标本接种，在开展标本这种前，首先需要在7mL培养管中，加入0.8mLGrowthSupplement溶解后的PANTA（杂菌抑制剂），将已经完成接种0.5mL，处理后的标本放置在BBLMGIT培养管中然后进行检测。如果检测结果为阳性，则需要进行涂片抗酸染色确认。需要注意的是并不是所有涂片染色阳性的分枝杆菌均为结核菌，只是抗酸染色阳性。针对阳性标本进行菌种鉴定，鉴定过程中采用硝基苯甲酸培养。

1.2.4 药敏试验

报阳的1d或者2d，不需对样本进行稀释，直接颠倒混匀后进行直接接种。报阳的3～5d，选择阳性肉汤1mL与无菌生理盐水4mL进行混合，并进行1:5的稀释规律混匀。向其中加入0.8mLBACTECTMMGITTM960SIRE添加剂，并且将利福平药物100μl加入已经进行标记的MGIT管，再向其中加入0.5mL菌液，将其放置在AST试管架，进行BACTECMGIT960仪器检查。

1.2.5 GeneXpertMtb/RIF检测

收集痰液样本1mL，后将其放入具有50mL容量的离心管中，向离心管内部加入GeneXpert样品试剂，保证其比例在2:1即可，将盖子盖好，进行10～20次的剧烈摇晃，保持室温状态进行培养，时间控制在15min，而后利用无菌移液管吸入液化样品，将检验盒子打开后，把已经处理完成的样品放入检验盒中，并进行缓慢加入，注意整个过程中不能产生气泡，而且需要保证盒子盖盖紧，以此保证检验结果的准确性。

1.3 观察指标

对比三种方法检验的阳性率、敏感性及特异性和药敏检验结果。

1.4 统计学分析

2.结果

2.1 三种方法检验的阳性率

抗酸染色涂片、BD960、GeneX-pertMtb/RIF阳性例数分别29例、44例、51例，阳性率分别为36.25%、55.00%、63.75%，GeneXpertMtb/RIF检验＞BD960检验＞抗酸染色涂片检验，见表2。

2.2 三种方式敏感性对比

抗酸染色涂片检验、BD960检验、GeneXpertMtb/RIF检验的敏感性分别为36.25%（29/80）、55.00%（44/80）、63.75%（51/80），见表3。

2.3 药敏检验结果比较

经GeneXpertMtb/RIF检测51例阳性结果中利福平耐药17例(33.33%)，BD960药敏试验44例阳性结果中利福平耐药患者8例（18.18%），GeneXpertMtb/RIF检测耐药性较好。

3.讨论

流行病学调查发现，结核病迄今为止仍然是威胁人类健康的重要疾病和重大公共卫生问题。2018年统计全球新发肺结核患者约为1000万，结核病年发病率约为130/10万，而且结核病已经成为全球前十位死因之一，对患者日常工作以及生活乃至生命安全造成严重影响[4]。临床中针对结核病的诊断多以分枝杆菌培养为主，但是在培养过程中，时间需要耗费4～6周才能获得结果，因此在疾病早期诊断过程中使用受到限制，这一背景下需要寻找新的结核病早期诊断方式。抗酸染色涂片作为目前结核病诊断的重要方式，由于该种方法具有较低的敏感性，而且在使用过程中受到检验人员主观操作因素影响，易造成疾病漏诊和误诊情况发生，因此同样存在使用限制[5]。

GeneX-pertMtb/RIF检测技术作为现阶段全自动一体化PCR体外诊断技术，具有较高的临床疾病诊断价值。技术应用过程中通过GeneX-pert系统检验，利用GeneX-pert系统内部PCR分析系统能够在一定程度上自动完成核酸的提取扩增及目标序列检验等过程，该技术目前被广泛应用于结核病临床诊断过程中，同时还能够通过检验了解患者是否存在结核菌以及利福平的耐药性[6]。分析此次研究结果，发现抗酸染色涂片、BD960、GeneX-pertMtb/RIF阳性例数29例、44例、51例，阳性率分别为36.25%、55.00%、63.75%，GeneXpertMtb/RIF检验＞BD960检验＞抗酸染色涂片检验，说明针对肺结核阳性诊断技术中相较于抗酸染色涂片、BD960，GeneX-pertMtb/RIF技术使用价值更高，有效识别结核菌标本，并且实现疾病的诊断，有效减少疾病漏诊和误诊情况的发生。与此同时，对比三种检验方式的检验敏感性，发现GeneX-pertMtb/RIF技术检验敏感性更高。结核病耐药性研究一直属于临床研究的重要课题，目前抗结核药物的应用过程中其效果较好，但是受到部分耐药性影响，导致药物应用疗效降低。利福平作为重要的抗结核药物，通常被广泛应用于抗结核病治疗中，世界卫生组织将同时对利福平和异烟肼耐药的结核病称为MDR-TB，这种结核病在一定程度上具有治疗时间长、难度大、费用高以及治愈率低等特点，因此需要加强关于结核病耐药性研究[7]。XpertMTB/RIF技术在应用过程中通过核酸检测，能够实现DNA自动提取，以rpoB基因作为靶基因，对基因的片段（192bp）进行提取并检测，同时利用对6种探针采用6种分子信标进行检验，对基因片段进行选择性覆盖，用于利福平耐药性检验中，相关研究发现该种方式检验有超过95%利福平耐药株存在rpoB基因变异，这种情况说明利福平耐药在一定程度上能作为MDRR—TB的监测指标[8]。在检验技术的使用速度上分析，GeneXpert-MTB/RIF检测速度相较于BD960更快，能够快速确定患者是否存在结核病以及是否对利福平药物耐药。而在本次研究中经GeneXpertMtb/RIF检测51例阳性结果中利福平耐药17例(33.33%)，BD960药敏试验44例阳性结果中利福平耐药患者8例（18.18%），尽管其对比不具有统计学差异，但是也进一步证实了GeneXpertMtb/RIF的使用优势。

综上所述，当前结核病诊断技术较多，其均能起到良好的诊断效果，但是因不同的诊断技术原理不同，其阳性检查情况存在差异。GeneXpertMtb/RIF技术目前在结核菌检验中有较高的使用价值，既能够实现疾病的排查以及诊断，同时还能通过药敏实验对耐药性进行分析，具有较好的生物安全性。与抗酸染色涂片检验、BD960检验结果相比更加具有科学性以及准确性，在临床使用中，需要依据实际情况为患者使用技术。