UPLC法分析比较栀子和水栀子中主要成分的含量

蔡晓洋，刘聪，李敏

栀子为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoidesEllis）的干燥成熟果实，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效[1]。研究表明，栀子中含量较高的主要是环烯醚萜类和西红花苷类成分，其代表成分是栀子苷和西红花苷-1、西红花苷-2。其中栀子苷具有保肝利胆、降血糖、抗氧化、抗肿瘤等作用，西红花苷-1、西红花苷-2成分具有抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗炎等作用，这二者均为栀子中最主要的有效成分[2-5]。

水栀子为茜草科植物水栀子（G·jasminoides ElIis var·grandiflora Nakai）的成熟果实，是栀子的变种，自古以来多不作药用，主要用于工业上的染料和色素[6,7]。但研究发现，水栀子在化学成分上与栀子极为相似[8]，且有药理研究表明，水栀子与栀子一样具有利胆抗炎作用，且利胆作用较栀子更强[9]。而在栽培上，水栀子结果率更高、果实长而大，产量远高于栀子。因此，水栀子应有较好的药用开发前景。

近年来，国内针对栀子与水栀子的对比研究主要集中在药理、鉴别、栀子苷的含量方面[9-12]，而关于栀子苷和西红花苷-1、西红花苷-2等多个成分和主要成分的含量对比研究鲜见报道。本研究首次采用UPLC法对栀子和水栀子中的主要成分进行含量测定和分析对比，为充分开发利用水栀子的药用价值提供科学依据。

1 材料

美国Waters ACQUITY UPLC H-Class System（包括四元高压泵系统、自动进样器、柱温箱、TUV检测器、Empower色谱工作站）；BP-12l s精密电子天平（浙江精密仪器有限公司）；KQ-500DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

乙腈为色谱纯，水为超纯水， 其余试剂均为分析纯；栀子苷对照品（批号130428，纯度≥98%）购自四川省维克奇生物科技有限公司；西红花苷-1对照品（111588-201202）、西红花苷-2对照品（111589-201304）均购自中国食品药品检定研究院。

栀子、水栀子果实共收集15批（见表4），分别经成都中医药大学李敏教授鉴定为茜草科植物栀子（Gardenia jasminoidesEllis）和水栀子（G·jasminoides ElIis var·grandigflora Nakai）的成熟果实，所有样品经统一的方法加工并干燥。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1X50 mm，1.7 μm)，流动相乙腈（A）—水（B）；梯度洗脱：0～5 min（5%～20%A），5～10 min（20%～30%A），10～15 min（30%～5%A）；检测波长240 nm(0～5min)，440 nm(5～15 min)；流速0.3 mL·min-1；柱温30 ℃；进样量2 μL。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称定栀子苷、西红花苷-1、西红花苷-2适量，加甲醇溶解，制成栀子苷（161.6 μg·mL-1）、西红花苷-1（32.64 μg·mL-1）、西红花苷-2（10.5 μg·mL-1）的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取各样品粉末（过4号筛）约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，超声40 min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.22 μm滤膜滤过，取滤液即得。

2.4 线性关系考察

将混合对照品溶液分别稀释2,4,8,16倍，制成不同质量浓度的系列溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，分别以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得相应的回归方程，结果见表1。

表1 线性关系考察结果

2.5 精密度试验

取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，计算得到栀子苷、西红花苷-1和西红花苷-2的色谱峰面积的RSD分别为0.20%，0.36%，0.65%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取栀子和水栀子样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、16、24 h按“2.1”项下色谱条件测定各指标成分含量，以峰面积值为指标考察方法中的样品稳定性，栀子样品中栀子苷、西红花苷-1、西红花苷-2的RSD分别为0.22%、0.64%、1.07%，水栀子样品的栀子苷、西红花苷-1、西红花苷-2的RSD分别为0.35%、0.59%、0.76%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

分别取同一批次的栀子和水栀子样品各6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算得到栀子样品中栀子苷、西红花苷-1和西红花苷-2的色谱峰面积的RSD分别为0.45%，0.57%，0.96%，水栀子分别为0.52%，0.49%，0.78%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收试验

分别取已测定的栀子和水栀子样品粉末各6份（每份0.05 g），精密称定，每份加入相同量的栀子苷、西红花苷-1和西红花苷-2对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表2，表3，表明该方法准确可靠。

图1 UPLC色谱图A.混合对照品；B.水栀子；C.栀子；1.栀子苷；2.西红花苷-1；3.西红花苷-2

表2 栀子样品的3种成分回收率实验（n=6）

表3 水栀子样品的3种成分回收率实验（n=6）

2.9 样品测定

取所收集的15批样品，分别称取粉末约0.1 g，精密称定，按“2.3”项下方法操作，制备样品供试品溶液，每个批号3份，按“2.1”项下色谱条件进行测定，并计算样品中3种成分的含量，以均值作为最终结果，结果见表4。

表4 样品的成分测定结果(n=3)

测定结果显示，栀子与水栀子中栀子苷的含量分别在2.36%～5.98%，6.14%～7.81%，均高于药典规定的1.8%，西红花苷-1和西红花苷-2的总含量分别在0.84%～1.47%，1.28%～1.49%。水栀子的栀子苷含量与西红花苷-1、西红花苷-2总含量普遍比栀子高，其中栀子苷含量最高可达3倍。

3 讨论

通过对乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-水等多个洗脱系统进行比较，结果表明乙腈-水可很好的将3个成分分离。在样品处理中考察了不同浓度的甲醇和乙醇等多种提取溶媒，同时考察了不同时间的超声提取，最终确定了色谱条件和样品制备方法。

本研究采用UPLC方法同时进行栀子苷、西红花苷-1和西红花苷-2含量测定，与传统HPLC方法相比，明显缩短了出峰时间，仅为HPLC时间的1/3～1/4，且还具有检测效率高、灵敏度高、精密度好、重现性强、进样体积小、溶剂消耗少等优势。本方法快速、简便、准确，可用于栀子药材和水栀子的多指标、多成分检测和质量控制。

栀子与水栀子的含量测定结果表明：水栀子在栀子苷含量和西红花苷-1、西红花苷-2总含量上均高于栀子，这与HPLC法和薄层层析-紫外分光光度法分析比较栀子与水栀子中含量差异的研究结果是一致的[7,8,11]。因此，水栀子在主要化学成分含量上确实高于栀子，从此观点来看，若要进行药用资源开发，尚需进一步结合药理和临床疗效方面的对比研究。