李 杨,纪荣超,张干生,吕海玲,陈 超,杨伟光
1.江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300 2.泰州丰达农牧科技有限公司,江苏 泰州 225300
在饲料中添加适量抗生素具有促进生长、减少疫病发生以及提高饲料转化率等优点[1],但是由于抗生素的不规范使用导致了细菌耐药、环境污染和食品安全等问题[2]。早在2006年欧盟就推行实施“禁抗”“减抗”行动[3],我国于2020年7月全面推行实施抗生素使用减量化行动,在饲料中全面禁止添加任何抗生素[4],寻找抗生素的替代品是当前畜禽养殖的必然需求[5]。饲用抗生素替代品主要有植物精油、抗菌肽、微生态制剂和中草药类等。微生态制剂作为饲用抗生素替代品有着很大的发展潜力,主要是通过增加肠道内益生菌数量[6]、改善菌群结构[7]、合成抗菌活性物质[8]以及竞争性占位[9-10]等综合机制来发挥多重调节功能,因此在禁抗和减抗的大潮中应用越来越广泛。
干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)属于乳杆菌属,是革兰氏阳性菌,不产芽孢,无鞭毛,不运动,兼性异型发酵乳糖,不液化明胶,主要存在于口腔、肠道内含物中。研究表明干酪乳杆菌可通过影响动物肠道结构与功能,提高动物营养物质消化利用率和动物的生长性能[11-12];可通过抑制肠道病原微生物增殖调节肠道微生物菌群结构[13];可调节免疫机能,刺激免疫细胞激活和增殖等[14]。目前日粮中添加干酪乳杆菌在蛋鸡、肉鸡、猪和水产等动物上的应用研究众多[15-17],但是在水禽上的研究还不多。为了扩大干酪乳杆菌在在动物生产中的应用范围,本研究选用北京鸭为研究对象,通过在基础日粮中添加不同水平的干酪乳杆菌,观察其对北京鸭生长性能、屠宰性能、免疫功能和肠道菌群的影响。
北京鸭购自江苏丽佳农牧股份有限公司;干酪乳杆菌购自山东向日葵生物工程有限公司,产品规格活性乳酸菌含量 1×1011CFU/g,铝箔袋包装,1 kg/袋。
购买1日龄雏鸭240只,完全随机分为4组,即对照组(基础日粮)、低剂量组(基础日粮加50 mg/kg干酪乳杆菌)、中剂量组(基础日粮加100 mg/kg干酪乳杆菌)和高剂量组(基础日粮加200 mg/kg干酪乳杆菌),每组6个重复,每个重复10只。试验周期为42 d。
试验前5天,对鸭舍彻底消毒灭菌。试验期间北京鸭实行网上平养,做到自由采食和饮水,饲养环境条件符合规范,做好日常免疫和定期消毒。
在试验开始时,称量试验鸭初始体质量。整个生长周期中,每周都称量饲料的重量,用于计算日平均采食量,并于42日龄清晨称重北京鸭空腹体质量,全部提前12 h进食,以重复为单位进行体质量测量,计算平均日采食量(average daily feed intake,ADFI)、平均日增重(average daily gain,ADG)和料重比(feed/gain,F/G)。
42日龄,禁食12 h,以重复为单位进行称重计算平均值,选取2只体质量与平均体质量相近的作屠宰测定,称量活重、屠宰重、半净膛重、全净膛重,剥离胸肌和腿肌并称重。参照家禽生产性能名词术语和度量统计方法,计算屠宰率、全净膛率、胸肌率和腿肌率。
屠宰前翅静脉采血,2 500~3 000 r/min离心5~8 min分离血清,血清免疫指标主要测定IgG、IgA、IgM、IL-2、IFN-γ和TNF-,使用ELISA检测试剂盒,按照说明书操作步骤测定,检测试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司。屠宰后摘取脾脏、胸腺以及法氏囊,去除水分、血液和脂肪后,用电子天平以克为单位进行分别称重,计算免疫器官指数,免疫器官指数(g/kg)=重量(g)/活重(kg)。
各重复选择1只接近该组平均体质量的北京鸭,放血致死,使用灭菌剪刀剪取2 cm盲肠,置于无菌离心管中,参考孟翠红 等[18]的方法,在EMB、MRS、SS培养基分别培养大肠杆菌、乳酸杆菌和沙门氏菌并计数,以lgCFU/g计。
由表1可知,与基础日粮对照组相比,日粮中添加100 mg/kg干酪乳杆菌和200 mg/kg干酪乳杆菌能显著提高北京鸭的ADG和ADFI(P<0.05),3种剂量的干酪乳杆菌均能显著降低北京鸭的F/G(P<0.05)。
表1 干酪乳杆菌对北京鸭生长性能的影响
由表2可知,与对照组相比,日粮中添加干酪乳杆菌对北京鸭屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率和腿肌率等指标无显著性影响(P>0.05)。
表2 干酪乳杆菌对北京鸭屠宰性能的影响 单位:%
由表3可知,与对照组相比,3种剂量的干酪乳杆菌均能显著提高法氏囊指数(P<0.05),中剂量和高剂量干酪乳杆菌能显著提高脾脏指数和胸腺指数(P<0.05)。由表4可知,与对照组相比,3种剂量的干酪乳杆菌均能显著提高IgG、IgA的抗体水平以及IL-2的水平(P<0.05),IgM的水平有提高的趋势,但是差异不显著(P>0.05),IFN-γ和TNF-α的含量显著下降(P<0.05)。
表3 干酪乳杆菌对北京鸭免疫器官指数的影响 单位:g/kg
表4 干酪乳杆菌对北京鸭血清免疫指标的影响
由表5可知,对于大肠杆菌来说,低剂量组、中剂量组和高剂量组与对照组相比盲肠中的数量显著下降(P<0.05),且3个剂量组之间的数量也显著下降(P<0.05);对于沙门氏菌,低剂量组、中剂量组和高剂量组与对照组相比盲肠中的数量显著下降(P<0.05),但3个剂量组之间的差异不显著(P>0.05);对于乳酸杆菌,低剂量组、中剂量组和高剂量组与对照组相比盲肠中的数量显著上升(P<0.05)。
表5 干酪乳杆菌对北京鸭肠道菌群的影响 单位:lgCFU/g
迄今关于干酪乳杆菌对北京鸭生长性能影响的研究鲜有报道。本研究结果表明,与对照组相比,饲料中添加100 mg/kg和200 mg/kg干酪乳杆菌ADG分别提高7.94%和4.65%(P<0.05),F/G最高可下降8.46%(P<0.05)。李阳 等[19]研究结果表明单独添加干酪乳杆菌或联合添加干酪乳杆菌与壳寡糖分别使AA肉鸡ADG提高7.90%和7.05%。林晗[17]研究表明单独添加干酪乳杆菌(100、200、400 mg/kg)可以提高白羽肉鸡ADG,降低F/G。本研究的结果与上述研究结果一致。王四新 等[20]研究报道干酪乳杆菌可以通过影响动物肠道结构与功能,从而提高动物营养物质消化利用率,提高动物的生长性能。血清免疫球蛋白和免疫相关细胞因子均可以反映机体免疫能力。与对照组相比,3种剂量的干酪乳杆菌可显著提高法氏囊、脾脏和胸腺等免疫器官指数(P<0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组鸭血清IgG含量分别提高了20.94%、30.36%和28.27%,血清中IgA含量分别提高了20.53%、23.21%和11.61%,IgM的水平也有提高的趋势。细胞因子中IL-2水平升高以及IFN-γ和TNF-α的含量显著下降(P<0.05),以上结果提示干酪乳杆菌可提高北京鸭的免疫功能主要与体液免疫相关。盲肠肠道菌群测定发现,可显著降低盲肠中的大肠杆菌和沙门氏菌的数量(P<0.05),显著提高乳酸杆菌的数量(P<0.05),这与曾献春 等[21]人的报道一致。
本试验结果表明:日粮中添加干酪乳杆菌能提高北京鸭的生长性能和免疫功能,改善肠道微生物菌群结构。