不同添加量葡萄渣对苜蓿青贮发酵品质及CNCPS蛋白组分的影响

摘要：为探究添加葡萄渣对苜蓿（Medicago sativa）青贮发酵品质及蛋白组分的影响，本试验将0，50，100和150 g·kg-1（CK，C1，C2和C3）的葡萄渣与苜蓿进行混合青贮，在青贮的第60 d测定发酵品质和蛋白组分，第1，3，7，15，30和60 d测定青贮微生物数量和蛋白酶活性。结果表明：添加葡萄渣处理的青贮干物质、粗蛋白和乳酸含量要显著高于CK组（P＜0.05）；C3组的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、pH值、氨态氮和游离氨基酸态氮含量显著低于其它处理（P＜0.05）；添加葡萄渣能降低苜蓿青贮非蛋白氮含量，增加快速降解蛋白和中速降解蛋白含量，其中添加葡萄渣的苜蓿青贮过瘤胃蛋白含量要高于CK组；添加葡萄渣对苜蓿青贮蛋白酶活性具有抑制作用。本研究表明，添加葡萄渣对苜蓿青贮品质具有改善作用，其中添加150 g·kg-1葡萄渣较为合适。

关键词：紫花苜蓿；葡萄渣；缩合单宁；CNCPS；蛋白酶活性

中图分类号：S816.53""" 文献标识码：A"""" 文章编号：1007-0435（2024）06-1986-09

Effects of Different Additions of Grape Pomace on the Fermentation Quality

and CNCPS Protein Fractions of Alfalfa Silage

GAO Cheng-ze2， ZHAO Lu-jie2， CHEN Wei-wei3， SUN Xin-chang2， XIE Kai-yun2，

YAN An2， WAN Jiang-chun1，2*

（1. Postdoctoral Station of Herbology of Xinjiang Agricultural University， Urumqi， Xinjiang 830052， China； 2. College of Grassland

Sciences of Xinjiang Agricultural University/Xinjiang Key Laboratory of Grassland Resources and Ecology， Urumqi， Xinjiang

830052， China；3. Sheqi County Secondary Vocational School， Nanyang， Henan Province 473399， China）

Abstract：To investigate the effects of adding grape pomace on the fermentation quality and protein fraction of alfalfa silage，alfalfa mixed silage was mide by adding grape pomace at 0，50，100 and 150 g·kg-1 （CK，C1，C2 and C3） in this experiment. The fermentation quality and protein fractions were measured at the 60 days of silaging，and the number of silage microorganisms and protease activity were measured at the 1 st，3rd，7th，15th，30th and 60th days. The results showed that the dry matter，crude protein and lactic acid contents of silage treated with grape pomace were significantly higher than those of the CK group （Plt;0.05）. the neutral detergent fiber，acid detergent fiber，pH，ammoniacal nitrogen and free amino acid nitrogen contents of C3 group were significantly lower than those of other treatments （P＜0.05）. The addition of grape pomace could reduce the content of non-protein nitrogen of alfalfa silage and increase the content of fast-degradable and medium-degradable protein. The content of alfalfa silage with grape pomace was higher than that of CK group. The addition of grape pomace had an inhibitory effect on protease activity of alfalfa silage. Our results showed that the addition of grape pomace improves the quality of alfalfa silage，the addition of 150 g·kg-1 grape pomace is more appropriate.

Key words：Medicago sativa;Grape pomace;Condensed tannin;CNCPS;Protease activity

紫花苜蓿（Medicago sativa L.）作为牧草之王，是一种多年生优质豆科牧草，同时也是我国牧草栽培面积最大的品种之一［1］。将苜蓿制作为干草是其主要的加工利用方式，但在整个加工和存放过程中，会因雨淋、落叶及微生物等影响，造成营养大量的损失［2-3］，将其调制为苜蓿青贮，可减少营养的损失，也可提高适口性，并能长期保存［4］。青贮是一种比较成熟的饲料调制技术，已广泛应用于牧草和饲料作物的加工贮藏，但将苜蓿单独调制成青贮存在很多制约因素，如苜蓿水溶性碳水化合物含量低、缓冲能高等，常规青贮很难达到最佳发酵状态［5］。在苜蓿青贮过程中，由于植物及微生物蛋白酶的作用，会导致大量的真蛋白被降解为非蛋白氮［6］，这个过程中真蛋白的损失量高达44%～87%［7］。

新疆得天独厚的自然条件，使其成为我国最早栽培葡萄（Vitis vinifera L.）的地区，是我国优质葡萄主产区和葡萄酒酿造大区。到2025年，新疆酿酒葡萄的种植面积将达到6.7×108 m2，葡萄酒的年产量达到70万千升［8］。葡萄酒加工过程中产生的副产物“葡萄渣”，约占酿酒葡萄加工量的25%左右，其主要由葡萄的皮、籽和果梗构成。葡萄渣价格低廉且营养丰富，但作为葡萄酒厂的废弃物而言，绝大多量的葡萄渣并未合理利用，将其作为动物饲料应用，不仅解决了酒厂废弃物排放问题，还扩充了饲料资源，为葡萄渣的高效利用提供一种选择［9］。

葡萄渣中富含多酚类物质单宁，大量研究表明，单宁可以抑制青贮中植物及微生物蛋白酶的活性，减少蛋白质的降解，降低非蛋白氮的产生［10-13］。此外，单宁对青贮中pH值、有机酸及微生物含量也有着调控作用［14］。张海铉等［15］向苜蓿青贮中添加葡萄籽单宁，发现可以提高青贮粗蛋白、小肠可吸收氨基酸及总氨基酸含量，并降低总挥发性脂肪酸和氨态氮含量，对青贮品质起到一定的改善作用。李平等［16］将葡萄渣与甜高粱（Sorghum saccharatum Moench）混合青贮后发现，添加葡萄渣与乳酸菌处理可以延迟青贮有氧腐败，提高甜高粱青贮品质和有氧稳定性。

已有的研究表明，将葡萄渣与苜蓿进行混合青贮，不但可以改善苜蓿青贮品质，还能有效解决葡萄渣资源的浪费，但目前两者混合青贮的相关研究较少。本研究将紫花苜蓿与不同比例葡萄渣进行混合青贮，探究不同比例葡萄渣对苜蓿青贮品质、康奈尔净碳水化合物-净蛋白质体系（Cornell net carbohydrate and protein system，CNCPS）及蛋白酶活性的影响，为提高苜蓿青贮品质及葡萄渣饲料化的利用与推广提供参考。

1 材料与方法

1.1 原料与添加剂

苜蓿原料采自新疆昌吉回族自治州呼图壁县种牛场（北纬44°18′8″，东经87°0′37″），为当年第一茬收获的初花期紫花苜蓿（品种：‘6010’）；葡萄渣（品种：‘赤霞珠’）由新疆中信国安葡萄酒业有限公司玛纳斯县分公司提供，新鲜葡萄渣取回实验室后风干备用；添加剂为青贮复合菌剂，由新疆农业科学院提供，主要成分由植物乳杆菌、布氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等构成，每克活菌数≥1 000亿CFU，添加量为0.001 g·kg-1。

1.2 试验设计

试验采用单因素完全随机设计，设四个处理：添加50 g·kg-1葡萄渣苜蓿混贮组（C1）；添加100 g·kg-1葡萄渣苜蓿混贮组（C2）；添加150 g·kg-1葡萄渣苜蓿混贮组（C3）；苜蓿单独青贮为对照组（CK）。每个处理均添加等量的青贮添加剂，每个处理组设18个重复处理。

1.3 青贮调制

将刈割后的紫花苜蓿自然阴干24 h，后用铡草机切短至2 cm左右备用，根据试验设计按不同添加量葡萄渣与苜蓿充分混合，并均匀喷洒添加剂。将混合均匀的样品取400 g装入聚乙烯袋中，用真空机抽真空密封，在室温避光条件下青贮60 d后测定青贮常规营养品质、发酵品质及蛋白组分，并在青贮的第1，3，7，15，30和60 d测定微生物数量和蛋白酶活性。

1.4 测定项目及方法

1.4.1 营养成分测定 取部分青贮原料和青贮样放置在烘箱中65℃干燥48 h，用粉碎机粉碎过筛（40目），后参考Zhang等［17］描述的方法进行下列营养成分的测定：干物质（Dry matter，DM）含量采用烘干法测定；粗蛋白质（Crude protein，CP）含量采用凯氏定氮法测定；中性洗涤纤维（Neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗涤纤维（Acid detergent fiber，ADF）含量采用Van Soest洗涤纤维素分析法测定；可溶性碳水化合物（Water soluble carbohydrates，WSC）含量采用蒽酮-硫酸比色法测定。葡萄渣中缩合单宁（Condensed tannin，CT）的含量采用盐酸-正丁醇比色法进行测定［18］。

1.4.2 发酵指标测定 取青贮样20 g，加入蒸馏水180 mL，混合均匀后用榨汁机粉碎1 min，将汁液经4层纱布过滤后在经定性滤纸过滤，滤液用于后续相关发酵指标测定。pH值采用雷磁酸度计进行测定；乳酸（Lactic acid，LA）、乙酸（Acetic acid，AA）、丙酸（Propionic acid，PA）和丁酸（Butyric acids，BA）含量采用高效液相色谱法测定［19］。依据蒋慧［20］的方法进行乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）、酵母菌（Yeast）和霉菌（Mould）数量的测定。

1.4.3 氮组分、蛋白组分和蛋白酶活性测定 依据李旭娇［21］的方法取1.4.2中的滤液40 mL与10 mL 25%（r/v）的三氯乙酸溶液混合后，在室温下静置1 h来沉淀滤液中的真蛋白。再将混合液在4℃，18 000 g下离心15 min，得到不含真蛋白的上清液进行氨态氮（Ammonia nitrogen，NH3-N）、游离氨基酸态氮（Free amino acid nitrogen，FAA-N）和肽氮（Peptide nitrogen，Peptide-N）的测定，再取1.4.1中的粉碎样品进行非蛋白氮（Non-protein nitrogen，NPN）、可溶性蛋白（Soluble protein，SOLP）、中性洗涤不溶蛋白（Neutral detergent insoluble protein，NDIP）和酸性洗涤不溶蛋白（Acid detergent insoluble protein，ADIP）的测定。

在根据CNCPS蛋白体系用以下公式计算得出蛋白组分［22］（式中PA为NPN，PB1为快速降解蛋白，PB2为中速降解蛋白，PB3为慢速降解蛋白及PC为结合蛋白）。

PA=NPN

PB1=SOLP－PA

PB2=100－PA－PB1－PB3－PC

PB3=NDIP－ADIP

PC=ADIP

羧基肽酶（Carboxypeptidases，CPs）、氨基肽酶（Aminopeptidases，APs）及酸性蛋白水解酶（Acid protease，AcPr）的活性测定采用对应的ELISA检测试剂盒进行。

1.5 数据分析

利用Excel 2016进行相关数据的汇总处理，GraphPad Prism 9完成图表的绘制，SPSS 26进行方差分析，采用Duncan’s法对测定数据进行多重比较，并通过正交多项式对比分析，对苜蓿青贮中葡萄渣的添加比例进行线性和二次曲线拟合。使用Origin 2021进行相关性图制作。试验数据用平均值±标准差表示，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 青贮原料的养分含量

青贮原料苜蓿和葡萄渣的养分含量如表1所示，其中苜蓿的WSC，DM，NDF和ADF含量均低于葡萄渣，分别低65.92%，71.25%，1.35%和24.08%，但葡萄渣的CP含量要低于苜蓿，低21.50%，并且葡萄渣还有较为丰富的CT。

2.2 添加葡萄渣对苜蓿青贮营养成分的分析

由表2可知，随着葡萄渣添加量的增加，混合青贮的DM和CP含量逐渐升高，C1，C2和C3组的DM和CP含量均显著高于对照组（P＜0.05），其中含量最高的为C3组；C1和C3组的NDF含量显著低于对照组（P＜0.05），C1，C2和C3组的ADF含量显著低于对照组（P＜0.05），但三组间无显著性差异；对照组的WSC含量显著低于添加葡萄渣处理组（P＜0.05），且随着葡萄渣添加量的增加而降低。此外，随着葡萄渣添加量的增加，青贮饲料的DM和CP含量呈线性增加（P＜0.05），而NDF和ADF含量呈线性下降（P＜0.05）；同时，葡萄渣的添加量与青贮饲料的DM和WSC含量之间存在显著的二次曲线效应（P＜0.05）。

2.3 添加葡萄渣对苜蓿青贮发酵品质的分析

由表3可知，pH值和NH3-N含量随着葡萄渣添加量的增加而降低，C3组的pH值显著低于其它三个处理组（P＜0.05）；C2和C3组LA含量显著高于对照组（P＜0.05），且AA和PA含量显著低于对照组（P＜0.05）；各组处理中均未检测到BA。此外，随着葡萄渣添加量的增加，青贮饲料的pH值，AA和PA含量呈线性下降（P＜0.05），LA含量呈线性增加（P＜0.05）；同时，除未检测到的BA外，葡萄渣的添加量与青贮饲料其余各发酵指标之间，均存在显著的二次曲线效应（P＜0.05）。

2.4 添加葡萄渣对苜蓿青贮氮组分的分析

如表4可知，除TN含量随着葡萄渣添加量的增加而升高外，其它氮组分含量均随着葡萄渣添加量的增加而下降。其中，C1，C2和C3组的NPN，Peptide-N，NH3-N和FAA-N含量显著低于对照组（P＜0.05），TN含量显著高于对照组（P＜0.05）。此外，随着葡萄渣添加量的增加，青贮饲料氮组分中的NPN，Peptide-N，NH3-N和FAA-N含量呈线性下降（P＜0.05），TN含量呈线性增加（P＜0.05）；同时，葡萄渣的添加量与青贮饲料氮组分中的NPN和Peptide-N存在显著的二次曲线效应（P＜0.05）。

2.5 添加葡萄渣对苜蓿青贮CNCPS蛋白组分的分析

如表5可知，随着葡萄渣添加量的增加，PB1，PB2和PC含量也随之上升，对照组显著低于添加葡萄渣处理组（P＜0.05）；C2组的PB3含量显著高于其它处理组（P＜0.05）。此外，随着葡萄渣添加量的增加，青贮饲料蛋白组分中的PB1，PB2和PC含量呈线性增加（P＜0.05）；同时，葡萄渣的添加量与青贮饲料蛋白组分中的PA，PB2，PB3和PC含量之间存在显著的二次曲线效应（P＜0.05）。

2.6 添加葡萄渣对苜蓿青贮蛋白酶活性的影响

如图1a所示，只有C2和对照组在青贮发酵的第1～3 d，AcPr活性有稍许上升情况，其余各时期各处理AcPr活性均呈下降趋势，并且在青贮发酵的第3～7 d，各处理AcPr活性迅速降低，后在缓慢降低至青贮发酵结束。此外，只有在青贮发酵第7 d，C1组的AcPr活性显著高于其它处理组（P＜0.05），其余时期对照组AcPr活性均显著高于其它处理组（P＜0.05）。在青贮发酵的前期与后期，C3组的AcPr活性均显著低于其它处理（P＜0.05）。

如图1b所示，CPs活性在青贮发酵第3～7 d表现与在该时期的AcPr活性表现一致，均呈迅速下降趋势。除C1，C2和C3组在青贮发酵第7～15 d，CPs活性有轻微上升趋势，其余各时期各处理CPs活性均表现为下降趋势。在青贮发酵的第7，15和30 d，C2组的CPs活性显著低于其它处理（P＜0.05），其它时期均表现为C3组的CPs活性显著低于其它处理（P＜0.05），而在整个青贮发酵过程中，对照组的CPs活性最高。

如图1c所示，整个青贮发酵过程中，APs活性呈下降趋势，在发酵的第1～3 d快速下降，后期呈缓慢下降趋势。在发酵的第3，15和30 d，C2和C3组APs活性显著低于其它各处理（P＜0.05），其余各时期C3组的APs活性显著低于其它各处理（P＜0.05）。在整个青贮发酵过程中，对照组的APs活性显著高于其它处理（P＜0.05）。

2.7 添加葡萄渣对苜蓿青贮过程中微生物数量的影响

如图2a所示，在青贮发酵过程中，LAB含量呈先升高后降低的趋势，除第1 d各处理之间差异不显著，其余各时期C2和C3组LAB含量均显著高于对照组（P＜0.05）。在青贮发酵的第60 d，C3组的LAB含量显著高于其它组处理（P＜0.05）。

如图2b所示，霉菌含量在青贮发酵过程中逐渐降低，在第1～3 d，C1，C2和C3组的霉菌含量要显著高于对照组（P＜0.05）。在第15～30 d，对照组的霉菌含量要显著高于C2和C3组（P＜0.05）。第60 d，仅对照和C3组检测出极少量的霉菌。

如图2c所示，在青贮发酵的第1～3 d，对照组的酵母菌含量显著低于C2组（P＜0.05），与C3组差异不显著。第7～15 d，C3组的酵母菌含量显著低于对照组（P＜0.05）。第60 d，C3组的酵母菌含量要显著低于其它组处理（P＜0.05）。

2.8 微生物数量、蛋白酶活性和蛋白组分的相关性分析

将青贮第60 d的微生物数量、蛋白酶活性和蛋白组分进行相关性分析，得到图3。由图3可知，LAB和Yeast，CPs，APs，AcPr，PA呈极显著负相关关系（P＜0.01），和PB1，PB2，PC呈极显著正相关关系（P＜0.01）；CPs和Yeast，Mould呈显著正相关关系（P＜0.05）；APs，AcPr和PA分别与Yeast和CPs呈极显著正相关关系（P＜0.01），APs，AcPr和PA之间也呈极显著正相关关系（P＜0.01）；PB1，PB2和PC与Yeast，CPs，APs，AcPr和PA呈极显著负相关关系（P＜0.01），PB1，PB2和PC之间也呈极显著正相关关系（P＜0.01）。

3 讨论

3.1 添加葡萄渣对苜蓿青贮营养成分和发酵品质的影响

本试验中，添加葡萄渣的苜蓿混合青贮DM，CP和WSC含量都要明显高于苜蓿单贮，而NDF和ADF含量则要低于苜蓿单贮，因此从营养成分方面来看，向苜蓿中添加葡萄渣进行混合青贮，对苜蓿青贮品质具有一定的改善作用。青贮DM含量是决定青贮饲料成败的关键因素，DM含量能够反映青贮中所含水分的多少，水分含量的高低会对青贮发酵过程和最终的品质产生影响，同时水分的多少也会影响细菌数量和发酵速率［23］。在本试验中，添加葡萄渣的苜蓿混合青贮具有较高的DM含量，是由于风干葡萄渣本身就具有较高的DM含量。饲料中NDF和ADF通过影响家畜的咀嚼时间和唾液分泌等，来间接影响家畜对饲料的适口性和消化率，对饲料营养的评定有着重要的作用［24］。在本试验中，添加葡萄渣后的苜蓿青贮NDF和ADF含量要明显低于苜蓿单贮，这与董文成等［25］研究结果一致，可能与葡萄渣中含有的脲酶有关。

青贮是牧草基于乳酸发酵的一种贮存方法，其主要利用乳酸菌的产酸作用，在厌氧条件下使原料迅速发酵，产生大量的LA，从而降低饲料的pH值，抑制有害微生物的生长［26］。在本试验中，向苜蓿中添加葡萄渣可以迅速降低青贮的pH值，且随着葡萄渣添加量的增加pH值呈线性下降趋势，可能与葡萄渣发酵后会产生柠檬酸有关，也有可能与葡萄渣富含CT有关。因为有研究发现，将富含CT的绿茶渣与苏丹草进行混合青贮，试验结果表明绿茶渣中的CT可以提高青贮乳酸菌的数量，促进乳酸的生成［27］。李成云等［28］将榛子叶中提取出的CT作为添加剂与苜蓿进行青贮发现，添加单宁可以显著降低青贮pH值，促进乳酸发酵，并明显改善苜蓿青贮发酵品质。

3.2 添加葡萄渣对苜蓿青贮氮组分的影响

苜蓿在青贮过程中蛋白质的降解会造成NPN含量的升高，NPN又会造成真蛋白的损失，且构成NPN的NH3-N，FAA-N和Peptide-N等均会影响反刍动物对饲料蛋白的吸收利用［29］。在本试验中，NPN含量随着葡萄渣的添加逐渐减少，说明葡萄渣的添加可能有着抑制蛋白水解的作用。谢小来等［30］向苜蓿青贮中添加不同计量的单宁酸，发现单宁酸可以抑制NPN升高，且随着添加量的增加，抑制效果越好，这与本试验研究结果一致。也有研究选用了12种豆科牧草与不同浓度的单宁酸进行混合青贮，发现添加单宁酸可以显著降低豆科牧草NPN的含量［31］。这可能与葡萄渣含有单宁有关，单宁与蛋白质相结合，形成单宁-蛋白质复合物，可以达到抑制蛋白质降解的功效，减少NPN的产生。

青贮饲料中NH3-N含量过多会影响青贮的品质，李平等［16］向甜高粱青贮中添加不同水平的葡萄渣进行混合青贮，结果发现随着葡萄渣添加水平的增加，混合青贮的NH3-N含量显著降低，这与本试验结果一致。在本试验中，添加葡萄渣有效地抑制了NH3-N的产生，并且添加量越多，抑制效果越好，这可能是由于葡萄渣中的缩合单宁会对游离氨基酸脱氨基产生影响，使其转化作用减弱，从而抑制NH3-N的产生。

3.3 添加葡萄渣对苜蓿青贮蛋白组分的影响

CNCPS蛋白组分可以用来预测苜蓿青贮饲料在反刍动物瘤胃中的降解速率及动物对蛋白的利用效率［32］。由于苜蓿青贮自生蛋白酶的作用，在青贮过程中大部分蛋白质被分解为PA组分，PA含量过多会影响动物的采食量［33］。在本研究中，随着葡萄渣添加水平的不断增加，PA不断减少，表明了适宜的葡萄渣添加量可以减少PA的生成。PB2和PB3为中速、慢速降解蛋白，这部分蛋白组分可形成过瘤胃蛋白，能够进入到反刍动物的小肠吸收利用，对提高反刍动物的生产性能有很大的作用［34］。在本试验PB组分中，添加葡萄渣的苜蓿青贮PB2和PB3组分所占比例要高于对照组，表明混贮饲料的过瘤胃蛋白含量较高。综上表明适量葡萄渣的添加可以降低苜蓿青贮蛋白质的降解，提高苜蓿青贮饲料品质。

3.4 添加葡萄渣对苜蓿青贮蛋白酶活性的影响

植物在青贮过程中，由于氧气和底物的存在，植物蛋白酶仍然有着呼吸和蛋白降解的作用［35］。有研究发现，在苜蓿青贮中至少存在CPs，APs和AcPr等3种植物蛋白酶，这些酶的活性会造成苜蓿青贮蛋白质不同程度的降解，从而影响苜蓿青贮品质［36］。植物蛋白酶活性在青贮中会受到pH、温度和添加剂等多种因素的影响，研究表明单宁对植物蛋白酶活性具有抑制作用［37］，而葡萄渣中富含单宁。杨智明等［38］在探索苜蓿青贮蛋白酶活性规律时发现，3种酶活性均随青贮时间的延长呈下降趋势，其中CPs和AcPr对蛋白的降解有着重要作用，APs只在苜蓿青贮的前7 d有活性，本试验研究结果与之略有不同，本试验中APs在前3 d迅速降低后，仍保持较低活性，直至第60 d逐渐失活，可能是由青贮温度和使用添加剂等原因导致。整个青贮过程中，添加葡萄渣组蛋白酶活性要低于对照组，可能是青贮后期pH值降低，抑制了蛋白酶活性［39］，也有可能是葡萄渣中的缩合单宁与酶结合，从而抑制了植物蛋白酶的活性［40］。

3.5 葡萄渣苜蓿混贮微生物数量和蛋白酶活性的相关性分析

青贮饲料发酵是一个极其复杂的微生物变化过程，LAB是调制青贮饲料的重要有益菌，提高LAB数量和增加LAB发酵原料是促进LAB发酵、提高青贮品质的重要途径［41］。在青贮发酵过程中LAB快速增殖，产生大量LA进而快速降低pH值，这为LAB自身生长创造条件，产生的LA也会抑制其它微生物生长繁殖［42］。本试验中LA的大量产生会抑制酵母菌和霉菌的产生，较低的pH值和葡萄渣中的单宁成分也会抑制蛋白酶的活性，使LAB和三种蛋白酶活性呈显著负相关关系，酵母菌含量和三种蛋白酶活性呈显著正相关关系，这与李旭娇等［21］、董文成等［25］和王坚等［35］在苜蓿和柱花草青贮中的研究结果相一致。三种蛋白酶之间呈显著正相关，这与Yuan等［43］、Guo等［44］其他学者对苜蓿青贮中蛋白酶活性的研究结果相似。

4 结论

添加葡萄渣有助于提高苜蓿青贮的营养成分含量和发酵品质，能够有效抑制植物蛋白酶活性，减少苜蓿青贮的蛋白质的降解，对苜蓿青贮发酵中的PA，PB2和PB3均具有改善作用，且青贮中LAB与三种蛋白酶活性呈显著负相关关系。综合所有指标，添加150 g·kg-1的葡萄渣对改善苜蓿青贮品质效果最佳。

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（责任编辑 闵芝智）