摘" 要:为了解副猪嗜血杆菌病的流行情况,从全国48家猪场采集疑似副猪嗜血杆菌感染的组织样本285份,采取荧光定量检测infB基因的检测方法,并按照样本阳性率、猪场阳性率、猪年龄、采样季节、免疫与否等进行分类分析。结果出现:81.3%猪场存在副猪嗜血杆菌感染;副猪嗜血杆菌感染在猪的不同生长阶段均十分严重;冬春季节的副猪嗜血杆菌阳性率(77.6%)显著高于夏秋季节的(55.8%);疫苗免疫场的副猪嗜血杆菌阳性率比非免疫场的低59.3%。以上结果表明,当前国内副猪嗜血杆菌病流行情况较严重,且存在明显季节性,通过接种疫苗进行预防,可有效降低副猪嗜血杆菌检出率。
关键词:副猪嗜血杆菌;分离;流行病学
自2018年以来,养猪业集团化、规模化程度突飞猛进,从最初不足5%,到目前的30%以上;6年来,行业经历了超级红利和持续低谷,洗牌不断,为了生存,很多企业开始简单粗暴地降本增效,造成规模化猪场发病呈复杂化、多样化特点,给猪场带来巨大的经济损失。同时,随着国家限抗禁抗政策的落实,一些细菌性疾病正在卷土重来,例如副猪嗜血杆菌病。副猪嗜血杆菌病危害的群体广泛、致死性强,甚至成为很多猪场头号敌人,从业人员需多加关注。
副猪嗜血杆菌病又叫格拉瑟病,由副猪嗜血杆菌引起,在国内广泛流行[1],临床多表现为消瘦、炸毛和渐进性死亡,剖检可见多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎等。急性病例导致感染猪突然死亡,慢性病例会造成猪组织和器官持续性损伤、生长速度降低、料肉比提高[2]。该病多发生在保育阶段,但在哺乳期、育肥期也有出现,发病率和死亡率居高不下,治疗效果一般,给养猪业带来巨大威胁。
副猪嗜血杆菌是呼吸道正常菌群的一员,仔猪出生后通过与母猪接触该菌后会很快定植在仔猪的上呼吸道,在猪免疫力下降等情况下会大量增殖,导致猪发病。后备猪比例持续偏高、猪繁殖与呼吸综合征持续流行、长距离运输以及药物滥用带来的耐药性等问题,导致副猪嗜血杆菌感染的问题越来越严重,发病风险越来越大。了解副猪嗜血杆菌的感染情况及猪场疫苗防控方案的有效性,对该病的防控至关重要。本试验对2022-2023年全国48个规模化猪场进行采样检测和统计分析,以了解副猪嗜血杆菌病的流行情况,为规模化猪场的防疫工作提供参考。
1" 材料与方法
1.1 材料
2022-2023年,对四川、江苏、山东等地48个规模化猪场进行调查,其中2022年调查了16个猪场,2023年调查了32个猪场。将病猪剖检后,用棉签采集胸腔、腹腔积液或关节液样本,共计285份(2022年采集样本114份,2023年采集样本171份)。
1.2 主要试剂
基因提取试剂盒和FTA卡(flinders technology associates,FTA)均购自QiaGen公司。
1.3 主要设备
荧光定量PCR仪器QS-5购自ABI公司。
1.4 试验方法
用一次性棉签采集猪胸腔、腹腔积液或关节液后按压在FTA卡中央,自然干燥2 h,送至海博莱实验室检测。
在无菌条件下沿FTA卡圆圈剪下,提取细菌DNA并进行实时荧光定量PCR扩增。
利用实时荧光定量PCR方法检测样本中是否含有副猪嗜血杆菌特异性基因infB,同时为了进一步比较,将检测结果分为强阳性、中阳性、弱阳性以及阴性,详情见表1。
1.5" 数据处理
试验数据按照样本阳性率、猪场阳性率、猪年龄、采样季节、免疫与否等进行分类分析。
2" 结果
2.1 不同时期猪场和不同样本发病情况
从检测结果来看,81.3%(39/48)猪场存在不同程度副猪嗜血杆菌感染的情况,其中2022年为87.5%(14/16),2023年为78.1%(25/32);样本阳性率为62.8%(179/285)。2022年为69.3%(79/114),2023年为61.4%(105/171)。其中2022年强阳性率为13.2%(15/114),中阳性率为36.8%(42/114)。2023年强阳性率为13.5%(23/171),中阳性率为24.6%(42/171)。结果表明,副猪嗜血杆菌在规模化猪场的感染非常严重。
2.2 不同生长阶段猪发病情况
按照不同生长阶段划分,3~7周龄仔猪样本副猪嗜血杆菌阳性率为78.9%,8~10周龄仔猪样本阳性率为70.5%,11~15周龄仔猪样本阳性率为71.8%,15~20周龄仔猪样本阳性率为72.2%。结果表明,在保育育肥阶段,副猪嗜血杆菌感染十分严重。
此外,3~10周龄仔猪样本强阳性率为10.1%(17/168),10周龄以上仔猪的仅为7.6%(6/79),3~10周龄仔猪样本中阳性率为39.3%(66/168),10周龄以上仔猪的仅为12.7%(10/79),3~10周龄仔猪样本强阳性率和中阳性率均高于10周龄以上仔猪的,具体见表2。
2.3 不同季节猪发病情况
检测结果显示,冬春季节样本副猪嗜血杆菌阳性率为77.6%,夏秋季节样本阳性率为55.8%,冬春季节的阳性率显著高于夏秋的,说明副猪嗜血杆菌病具有明显的季节性。
冬春季节样本强阳性率为11.3%(13/115),而夏秋季节的为11.8%(20/170),冬春季节样本中阳性率为38.3%(44/115),而夏秋季节的为23.5%(40/170),不同季节差异不明显,表明在不同季节,猪感染副猪嗜血杆菌的严重性无明显差异,具体见表2。
2.4 是否免疫猪发病情况
未免疫副猪嗜血杆菌疫苗的猪场副猪嗜血杆菌病阳性率为96.7%,免疫猪场的阳性率仅为36.4%。免疫猪场样本强阳性率为22.2%(6/27),未免疫猪场的为16.3%(42/258),免疫猪场样本中阳性率为18.5%(5/27),未免疫猪场的为39.5%(102/258),具体见表2。
3" 讨论
副猪嗜血杆菌病在国内往往被看作猪繁殖与呼吸综合征的继发病,但实际上,副猪嗜血杆菌既是原发性病原体又是继发性病原体。副猪嗜血杆菌病不仅与混合感染有关,也可能与转群、混群等应激有关,在美国被认为是保育猪主要的传染病之一,也是保育猪非正常死亡的主要原因。副猪嗜血杆菌病的传统控制方案是抗生素治疗,由于通过饲料和饮水给药很难给感染猪提供足够剂量抗生素,注射治疗效果更好,但是一线操作难度大,且耐药性问题越发严重,可以考虑通过接种疫苗预防猪感染和死亡。
本研究结果显示,81.3%的猪场副猪嗜血杆菌检测为阳性,结合样本均来自表现消瘦、炸毛和喘息等症状的猪,说明副猪嗜血杆菌感染可能是导致猪场不稳定的重要原因。
本研究发现在不同生长阶段副猪嗜血杆菌阳性率差异不大,说明副猪嗜血杆菌感染在保育阶段和育肥阶段感染均十分严重,而非大家一直关注的保育阶段。3~10周龄仔猪样本强阳性率和中阳性率均显著高于10周龄以上仔猪的,表明副猪嗜血杆菌的感染和危害主要出现在保育阶段。
冬春季节的副猪嗜血杆菌阳性率显著高于夏秋季节的,这与赵占勤[3]研究结果相似,说明副猪嗜血杆菌病具有明显季节性。这可能与环境条件和猪群抵抗力不同有关。因此在冬春季节要做好环境控制和应激管理。但总体而言,副猪嗜血杆菌一年四季阳性率均较高,都需要做好综合防控工作。
免疫猪场的阳性率以及样本强阳性率和中阳性率均显著低于未免疫猪场的,说明接种副猪嗜血杆菌病疫苗可以显著降低感染程度,可以作为控制副猪嗜血杆菌感染的首选方案。
副猪嗜血杆菌病一直是我国猪群的重要威胁,传统的抗生素控制细菌病策略需要进行调整,而且药物滥用导致细菌的耐药性越来越强。接种疫苗是预防副猪嗜血杆菌病的有效途径,可以根据每个猪场不同的流行病学特点设计合适的免疫程序,并配合猪场全进全出、加强环境控制、减少猪群应激等措施,最大限度发挥猪的生长潜力,提高猪场生产效益。
参考文献
[1] 郭龙,宋文博,贾双,等.2017年我国规模化猪场副猪嗜血杆菌流行病学调查[J].中国兽医学报,2019,39(11):2152-2156.
[2] 史开志,杜春林,王婧,等.副猪嗜血杆菌持续慢性感染对仔猪生产性能的影响及肺组织损伤[J].中国动物传染病学报,2022,30(3):22-28.
[3] 丁文文,王乐,李飞跃,等.副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其流行病学研究[J].中国预防兽医学报,2019,41(8):789-795.