KASP技术在动物资源鉴定及标记辅助育种中的应用

符宏高，杨理程，吴锐琼，黄 镇

(福建师范大学生命科学学院/福建省发育与神经生物学重点实验室,福建 福州 350117)

动物遗传育种是改善动物经济性状和环境适应性的过程，而传统的人工育种方式受到遗传多样性的影响而效率低下。单核苷酸多态性(Singlenucleotide polymorphisms，SNP)是指DNA序列中的单个碱基的插入、缺失、转换及颠换，其在动植物基因组中广泛分布[1]。SNP作为第三代分子标记的代表，具有分析成本低、基因组丰度高、位点特异性强等优势，使其受到广大育种学家的青睐[2-3]。随着高通量测序技术(NGS)的发展，包括Golden GateTM、Taq ManTM、SNP streamTM、SNP WaveTM、KASPTM等在内的众多SNP基因分型平台不断被研发与应用[4]。

竞争性等位基因特异性PCR(KompetitiveAlleleSpecificPCR，KASP)是一种基于荧光的同质基因分型技术，该技术利用独特的竞争性等位基因特异性PCR与新型、同质、基于荧光的报告系统相结合，用于识别和测量发生在核苷酸水平的遗传变异，以检测SNP或插入和缺失(Insertion and Deletion，InDels)[5-7]。KASP技术在农作物中具有广泛的应用，包括种质资源鉴定、分子标记辅助育种、基因定位和种子纯度鉴定等，但对于其在动物中的应用缺少系统性的探究和指南[7]。通过阐述KASP技术在动物领域的研究与应用，有助于深入了解该技术在动物遗传育种中的潜在优势和限制，指导动物育种者在实际应用中的技术选择和实施，对于推动动物遗传育种的发展和应用具有重要意义。

1 KASP技术原理与优势

1.1 KASP体系组成与反应原理

KASP技术检测体系主要由以下部分组成：样品DNA模板、KASP master mix(包含5′端含FAM和HEX基团的荧光探针、两个淬灭探针)、KASP assay mix(两条正向引物和一条反向引物，每个正向引物的5′端包含一个标签序列，3′端末尾包含SNP位点特异性碱基)、反应酶等[5]。KASP的反应流程大致可以分为三轮PCR反应(图1)：第一轮反应，两个正向引物通过3′端特异性等位基因碱基与模板DNA相对应碱基位点结合，并进行延伸复制；反向引物与另一条模板链结合并延伸。第二轮反应，经过第一轮反应得到的产物为包含有标签序列的DNA模板，反向引物与该条链结合并进行延伸，合成标签序列模板SNP位点下游序列的互补序列，将SNP位点引入相对应的PCR产物中。第三轮，带有FAM/HEX荧光基团的寡聚核苷酸与带有猝灭基团的寡聚核苷酸分离，随后带有FAM/HEX荧光基团的探针与第二轮反向引物延伸合成子链的SNP位点下游的尾部序列互补结合，荧光基团不再被淬灭，通过荧光检测系统进行检测，并转化成信号输出。随着这一步反应呈指数式增长，越来越多的荧光信号被检测到，信号逐渐增强，从而根据荧光信号的构成对基因类型进行判断。

图1 KASP技术反应原理

1.2 KASP技术相对于传统SNP检测技术的优势

随着测序技术的不断发展，SNP的检测方法也从原始的基于PCR的检测，到现在的高通量测序检测。纵观SNP检测方法的发展历史，通量由低到高、分析步骤复杂到便捷、耗时长到短是其主旋律。表1系统性地列举出几种具有代表性的SNP检测方法的优缺点及适用范围。

表1 几种具有代表性的SNP检测方法的优缺点与适用范围

1.2.1精确灵活、背景噪点低 通过将KASP技术与基于芯片的IlluminaGolden Gate平台进行比较发现：(1)在KASP检测结果中，阴性对照始终聚集在一起，且几乎不会产生超过等位基因调用阈值信号。因此其背景噪点对基因分型结果影响较小，而Golden Gate则与此相反。(2)在阳性对照DNA样品中，KASP技术的平均基因分型误差为0.7%～1.6%，低于使用GoldenGate平台观察到的误差(2.0%～2.4%)。(3)相比于主流的基于芯片的基因分型技术(如Affymetrix公司的Gene ChipTM微阵列技术和Illumina公司的BeadArrayTM技术等[21])，KASP技术在需要少量到中等数量SNP标记的应用中提供了经济高效和灵活的选择；如质量控制分析、双亲群体中的数量性状位点(Quantitative Trait Locus，QTL)作图、标记辅助选择(Marker Assisted Selection，MAS)、标记辅助回交(Marker Assisted Backcrossing，MABC)等[4，22]。

1.2.2通量高、成本低、分析时间短 KASP技术的另一大优势是通量高、成本效益低和综合分析耗时短。KASP反应体系适用于96、384、1536孔板，每个反应孔每次可检测单个SNP位点信息。Broccanello等[23]通过rhAmp-based、Taqman、KASP这3种基因分型技术对12个甜菜近交群体中的33个SNP进行检测。结果显示，KASP技术能够在每个反应低至0.9 ng DNA情况下成功对SNP进行基因分型。该反应基于384孔板进行，每次反应体系为5 μL，KASP每样本约0.85元，而Taqman检测花费每样本2.24元。此外，从384板反应体系制备到数据分析完成仅需115 min，略低于Taqman的125 min。与此同时，通过KASP技术进行标记辅助选择时，其成本比BeadXPress和Golden Gate平台低7.9%～46.1%[4]。在小规模基因分型检测领域，基于凝胶电泳对SNP区域进行分型昂贵且耗时；而KASP基因分型技术并不依赖于凝胶检测，使用常规的q-PCR仪器即可进行检测分析，独具优势[24]。

2 KASP技术在动物领域中的研究进展

2.1 遗传多样性鉴定

遗传多样性(Genetic Diversity)是指种内不同种群之间或一个种群内不同的个体的遗传变异总和。遗传多样性越高或遗传变异(Genetic Variation)越丰富，生物对环境变化的适应能力就越强，而KASP技术可以检测DNA水平上(SNP)的遗传多样性情况。由于KASP技术的便捷与高效性，近些年越来越多的研究利用其开展遗传多样性鉴定与应用分析，如烟粉虱群体鉴定、西花蓟马抗性突变鉴定、荷斯坦牛群遗传缺陷鉴定。

在昆虫中，Munguti等[25]使用KASP基因分型技术，针对线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ(Mitochondrially Encoded Cytochrome C OxidaseI，MT-CO1)的SNP序列，将肯尼亚烟粉虱(Bemisiatabaci)单倍型代表性样本分为两个单倍群，并研究了不同群体与该地区木薯病毒病的发病率和严重程度之间的相关性[26]。此外，Wosula等[27]也利用KASP技术设计了7组引物，用来区分非洲木薯上的6种烟粉虱单倍型群体。其检测结果与NextRAD测序结果一致，表明KASP技术可以用来快速诊断或监测木薯粉虱，这也是KASP技术首次用于昆虫鉴定。Sun等[28]根据西花蓟马(Frankliniellaoccidentalis)的烟碱型乙酰胆碱受体α6亚单位G275E的突变情况，设计了易感野生型和抗性突变型引物，通过KASP技术对过去收集的62个野外种群进行基因分型，发现其中有44个携带G275E突变。G275E的突变赋予了中国西花蓟马种群对化药杀伤的抗性，因此对突变种群的抗性分子诊断有利于管理生物入侵和精准防治。

在奶牛中，Khan等[29]使用KASP基因分型技术对中国6个荷斯坦牛群中9种遗传缺陷的携带者频率进行评估。结果发现1633头奶牛中，HH1、HH3、CVM、HH5、HCD、BS、HH6和BLAD的遗传缺陷携带者频率分别为6.92%、5.76%、4.46%、4.30%、3.62%、2.94%、1.86%和0.37%，未发现HH4携带者。类似地，吕小青等[30]与和玉伟等[31]也通过该方法对北京地区奶牛养殖群体的HH1和HH6遗传缺陷进行鉴定，其中HH1遗传缺陷的携带率为12.66%，而HH6遗传缺陷仅在母牛群体中检测到，携带率为1.93%，未在公牛中检测到。这些遗传缺陷的存在提示奶牛育种工作者需要对奶牛种群及个体进行常规分子检测，并采取有效措施管理遗传缺陷，避免生产畜群中的高频率携带者互相交配。通过标记辅助选择等措施，可以消除或降低遗传缺陷等位基因的频率。

2.2 功能基因分析

功能基因是指在生物体中具有特定功能的DNA分子序列，其通过转录和翻译过程将DNA信息转化为蛋白质，从而发挥特定的生物学功能。功能基因的遗传变异程度将影响生物体的遗传稳定性与发育方向。而SNP广泛分布于基因组中，对基因的时空表达具有重要影响。基于KASP技术在成本和通量方面的优势，其适用于功能基因的SNP变异检测与分析。KASP技术被广泛应用于鸟类和部分偶蹄类动物中基因多态性的筛选和分析，为动物的育种计划、功能基因研究和繁殖力的改良提供了重要的研究方法。

在鸟类中，乐雅磬[32]为探究位于基因RAD51AP2的单倍型在固始鸡中的突变情况，选取候选单倍型中的标签SNP Chr3：100032105 A>C进行KASP基因分型。结果显示，在检测的106个固始鸡个体中，除3个没有检测到的信号外，基因型AA、AC、CC的个体数分别为95、6、2个。随后对已有KASP分型结果的样品进行酶切验证，发现KASP检测为CC基因型的个体，酶切结果均为AC基因型，其余结果一致，表明该突变CC纯合型同样为致死基因型，检测准确率为98.06%。Chang等[33]采用KASP技术和专门设计的引物分析了先前报道的赛鸽优良遗传特性有关的基因(LDHA、DRD4、MTYCB)并进行鉴定，在测定的107个赛鸽样本中，与传统的PCR-RFLP方法结果100%吻合。表明KASP技术作为一种可替代的快速、可靠、经济有效的方法来检测赛鸽优良基因的多态性，能大大地减少时间与成本。刘继强等[34]通过对鸡的性连锁矮小基因(dw基因)和非性连锁矮小基因的核苷酸序列比对后设计了1对KASP引物，通过KASP基因分型技术对鸡群体进行检测，成功检测出性连锁矮小基因纯合子的位点。由于矮小鸡具有基础代谢率低、耗料少、饲养密度大、适应性和抗应激强等优势，通过该方法在地方鸡种中引入矮小基因，进行矮小型配套系的选育和开发具有重要的生产和研究意义。张俪萍[35]利用KASP技术对吉林黄鸡和北京油鸡杂交子代F1代鸡LEPR基因和A-FABP基因的多态性与屠宰性能进行分析，结果表明LEPR内含子8的G/A与C/T突变和A-FABP外显子1和内含子2的C/T突变均为影响屠宰性状的潜在位点，该两个位点可以作为鸡IMF筛选分子标志。该研究为利用北京油鸡和吉林黄鸡杂交后代培育优质鸡配套系提供部分科学的理论依据。

在羊类中，Ilie等[36]利用KASP技术对150只山羊中10个基因(PTX3、IL6、CLEC4E、IL8、IL1RN、IL15RA、TNFSF13、SOCS3、TNF、TLR3)进行SNP筛选，共获得16个多态性SNP。这些SNP分布于不同的染色体上，与山羊的抗寄生虫和乳腺感染相关，以及与生产性状有关，或对重要的代谢状况有潜在贡献。这些多态性SNP可用于未来基于基因组的山羊育种计划。Zhang等[37]在绵羊IL-18基因内含子区域发现了3个新的变异位点，且3个SNP处于强连锁状态，对其中的一个SNP位点利用KASP技术进行基因分型，并结合统计软件分析不同基因型和血液学指标之间的关系。结果表明多态性g.24991651 A>G与RBC、MCV、MCHC、RDW_CV(P<0.05)等血气指标显著相关，且AA基因型羊群RBC、MCHC、RDW_CV的所有表型测量值均明显高于具有GA和GG基因型(P<0.05)的试验羊群，而GA和GG基因型个体的MCV表型值差异不显著。这些结果提供了绵羊血液学参数的参考信息，并确定了绵羊IL18基因作为改善绵羊育种计划免疫性状的候选基因的潜力。Zhao等[38]对341只湖羊和391只藏羊的HIF-1α基因的3个外显子测序得到了3个SNP位点，并通过KASP技术对这3个SNP位点进行基因分型。结果发现，单倍型组合H2H3和H1H3在藏羊群体中更为常见，H2H3通过增加红细胞压积和血红蛋白浓度来增加携氧能力；H1H3通过降低氧分压和氧饱和度使O2更容易从氧合血红蛋白离解。这些结果表明，HIF-1α基因的变异提高了藏羊的氧利用能力，这可能是藏羊在青藏高原生存和繁殖的基础。王琼等[39]基于前期挖掘到的3个与产羔数相关的SNP位点，利用KASP技术对由不同产羔数组成的2个绵羊群体阿勒泰羊、吐鲁番黑羊进行检测，并与产羔数进行相关性分析。结果显示，GUCY11A1基因g.43266624C>T位点与绵羊产羔数密切相关，可望作为显著影响阿勒泰羊、吐鲁番黑羊产羔数关联的有效分子标记。储明星等[40]对山羊的RBP4基因5′调控区的36491960位点碱基G/C多态性进行KASP分型检测，将具有高产羔数性状的CC基因型和较高产羔数的GC基因型个体选留下来，淘汰产羔数较低的GG基因型个体，从而提高山羊的繁殖力。此外，羊中的FSHR基因、FecB基因相关SNP位点也被研究者者通过KASP技术进行相似研究与应用[41-42]。Kusza等[43]使用KASP技术对罗马尼亚饲养的法国阿尔卑斯山和萨南山羊的40个基因的48个SNP进行了初步研究，还分析了13个多态性遗传变异与羊奶产量和成分的关联情况。该研究为山羊产业中SNP标记辅助选择育种的发展提供了新的见解，并证实了使用GHRHR、IL1RN、SOCS3和IL15RA基因的SNP位点作为分子育种标记的潜力。

He等[44]对新疆驴4个关键性基因(LGALS2、NUMB、ADCY8和CA8)的15个SNP利用KASP技术进行基因分型，并将成功分类的14个SNP与新疆驴产奶量进行相关性分析。结果显示，NUMBg.46709914T>G与新疆驴早、中、后期日产奶量显著相关，而ADCY8g.48366302T>C、CA8g.89567442T>G和CA8g.89598328T>A与后期泌乳显著相关。因此，NUMBg.46709914T>G可以作为驴泌乳性状候选基因的标记，而ADCY8和CA8的SNP可作为后期泌乳候选基因标记。该结果不仅有助于确认驴产奶性状的关键基因，而且为未来驴基因组的选择提供了依据。

Schrimpf等[45]筛选了11匹马的下一代全基因组测序数据，以期寻找与雄性生育有关的马遗传变异。对筛选得到的17个SNP，使用KASP技术对19个品种的337匹可育种马进行基因分型。结果发现，NOTCH(g.37455302G>A)变体鉴定为高影响SNP，对汉诺威种马生育力有显著影响。该种NOTCH突变体仅在许多不同品种的可育种马中罕见地存在。因此，早期鉴定未经选择的年轻种马的携带者，以提高种马的繁殖力，对于优质种马选育具有重要意义。Liu等[46]采用KASP技术对哈萨克斯坦马中的NUMB、ADCY8、CA8、LGALS2、SLC25A30等5个基因中的13个SNP进行遗传多态性研究，发现其中6个SNP位点具有多态性；只有2个SNP位点与哈萨克斯坦马的产奶量显著相关，该研究为选育日高产奶量的哈萨克斯坦马提供了新的分子标记。

2.3 标记辅助选择(MAS)育种

传统的育种方式通常是将群体中具有优良性状或目标性状的个体筛选出来，通过不断繁育与再筛选最终培育出目标品种。传统育种不仅耗时、过程烦琐，且效率低下。基于KASP技术的灵活与高通量的优势，其被广泛应用于经济性状种群选育、性别鉴定等标记辅助选择育种工作中，为育种工作提供了新的思路和方法，促进了育种效果的提高和优质品种的培育。

在昆虫中，孙成等[47]对野生地熊蜂(Bombusterrestris)和来自荷兰科伯特公司的商业化地熊蜂进行基因组重测序，利用生物信息学的方法，检测到地熊峰参考基因组序列连锁群LG B04(GenkBank编号：NC_015765.1)上的第2379545位碱基位点为SNP位点，在商业化地熊蜂中的基因型为TT，野生型地熊蜂的基因型为CC，利用KASP基因分型技术可以快速鉴别地熊蜂个体是野生型还是商业化型。该发现对于筛选易于室内饲养、授粉能力强的育种材料以及进行优良雄峰品种的选育具有一定意义。

在水产中，丁君等[48]以刺参(Stichopusjaponicus)全基因组序列为参考，分别对母本中国辽宁庄河刺参和父本俄罗斯海参崴刺参进行个体重测序，通过与对应刺参参考基因组比对，获得中、俄刺参群体SNP标记位点。针对该刺参群体SNP标记位点进行KASP引物设计和基因分型。利用获得的10个高质量SNP标记，通过KASP技术对不同批次中俄杂交刺参进行检测，该标记在群体中检出率和品种鉴别率均为100%，为杂交子代刺参或不同批次中俄杂交刺参的育种及鉴定提供了新的分子标记。尹绍武等[49]利用KASP技术检测瓦氏黄颡鱼12连锁群141cM位置基因68bp处的SNP位点基因型(GG/GA/AA)，而目前已有研究发现待测3种基因型的瓦氏黄颡鱼低溶氧耐受性能力为GA>GG>AA，肥满度大小为AA>GG>GA。为此，根据基因分型结果确定其低溶氧耐受性和肥满度大小，可有效应用于瓦氏黄颡鱼的亲本选育和分子标记辅助育种。SONG等[50]在候选中华舌鳎生长相关基因中，对随机选择的9个极显著SNP位点利用KASP技术对测序样本进行基因分型，其中8个位点的分型结果与测序结果一致，验证了重测序结果的可靠性。郭金强[51]基于KASP技术对25对白梭吻鲈父母本与混养子代(共598尾)进行基因分型，成功鉴定出25个家系的538个个体，鉴定率高达89.97%。通过建立家系，对家系后代的经济性状进行有目的的选择和比较分析，并且分步筛选出生长快速家系和慢速家系，将有利于白梭吻鲈育种工作的进一步进行。丁君等[52]对刺参进行基因组重测序，进行筛选过滤与统计学分析，在50个分子标记中，剔除掉多棘性状基因型为杂合的标记，筛选出检出率最多的5个标记。随后将5个标记在60只原批次刺参群体进行检测与验证，结果显示多棘刺参标记覆盖率为100%，多棘刺参每个样品品种平均标记为3.5个。按照上述方法，选择携带至少3个多棘标记(且不携带少棘标记)的种参，进行后续繁殖、育种，可快速培育多棘刺参新品种。吕建建等[53]经过对三疣梭子蟹原始测序数据分析后，获得了一种三疣梭子蟹耐副溶血弧菌的分子标记C104，其特征在于C104第301位碱基为G/A，其中AA基因型为副溶血弧菌耐受型。据此利用KASP基因分型技术对三疣梭子蟹进行筛选可以加快其耐副溶血弧菌优良性状选育的速度，促进三疣梭子蟹良种培育进程。该检测方法不受生长阶段的限制，有利于三疣梭子蟹的健康养殖及可持续发展，对于预防食物中毒也有重要意义。陆俊锴等[54]提供了一种三疣梭子蟹性别鉴定标记的SNP位点(PtS2)，分布在scaffold片段上的第878位的性别连锁SNP位点，其碱基为T>C。该标记在雄性个体中呈现等位基因杂合型，而在雌性个体中均呈现等位基因纯合型。通过KASP技术对92只野生三疣梭子蟹基因分型，成功扩增个体中分型正确率为100%，为三疣梭子蟹全雌苗种的繁育提供重要工具，具有重大的经济价值。

在牛当中，颜泽等[55]利用KASP技术，对39头牛样本中3种不同类型无角基因的SNP位点同时进行检测。通过对采自国内外不同牛品种的样本检测，并与PCR扩增测序和凝胶电泳等传统检测方法的结果相对比，证明该KASP检测方法可以对3种无角基因准确分型，适于规模化检测应用。庞春英等[56]基于KASP技术针对河流型水牛的牛β酪蛋白(β-Casien)基因80位点和55位点碱基类型的不同，设计了6种KASP引物，分别对应于SNP1和SNP4中的一种未突变基因型、两种突变基因型；经过PCR扩增后检测DNA样品的荧光强度从而进行基因分型。β-Casien常见AA、AB、BB 3种亚型，其在乳蛋白含量、乳脂肪含量、消化性能、抗氧化性能等方面各有优劣。通过KASP分型方法可以快速筛选培育优质河流型水牛种牛，为发掘奶牛特色种质资源和提升牛奶品质提供便捷。研究发现，具有15枚胸椎和5枚腰椎(T15L5)性状的金川多肋牦牛(Bosgrunniens)个体相较于正常个体(T14L5)其产奶量、产肉量、繁殖率，抗逆性均高于正常个体，且比一般牦牛提前一年投产，具有很高的生产效益[57-59]。赵睿骁[60]利用KASP技术将重测序筛选出的7个SNP分子标记用于金川多肋牦牛进行基因分型，其中6个SNP分子标记检测结果与基因测序结果100%一致，准确度较高。该方法为金川多肋牦牛的优质育种与繁育提供了分子选择依据。

在鸡当中，聂庆华等[61]发现鸡基因组7号染色体第21948753位点发生G向T的的点突变，并对该SNP位点设计KASP引物，通过KASP基因分型技术，可以快速筛选丝羽乌骨鸡中的杂合玫瑰冠基因型，高效剔除具有单冠等位基因的杂合子，保证其玫瑰冠稳定遗传。刘继强[62]通过对固始鸡、丝羽乌骨鸡与海赛克斯A系鸡青胫基因和黄(白)胫基因的核苷酸序列(Id基因)比对后设计引物，利用KASP技术对163只鸡进行基因分型，检测到青胫基因纯合子、青胫基因杂合子[表型为青黄(白)胫]、黄(白)胫基因纯合子数量分别为77、65、21，与表型一致率达100%。目前已知的几种基于PCR的方法可用于鸡和其他鸟类的性别鉴定，但大多数仍成本高且耗时[63]。Dierks等[64]在鸡CHD1基因中观察到一个性别特异性等位基因[Z，NC_052572.1：g.51980364；W，NC_052571.1：g.5554096(反向)]，该等位基因似乎在鸟类中高度保守。在Z染色体的序列中检测为G，在该位置的W染色体的相应序列中检测为A。基于此，设计了合适的KASP体系引物，将KASP基因分析技术用于鸟类性别分析，且非常适合于鸡、鸭、鹅、鹌鹑和火鸡的大规模性别鉴定应用。类似的，Bourgeois等[65]根据大象粪便中大肠杆菌的ZFX和ZFY基因序列的SNP位点差异，将KASP技术用于非洲草原象和森林象、亚洲象的性别鉴定。

3 展望

KASP技术作为一种高通量、高灵敏度、高效和低成本的分子标记分型技术，在动物遗传育种领域的应用越来越广泛。然而，目前KASP技术还存在一些限制，如受到SNP位点前后碱基序列的限制，以及对KASPmastermix供应的垄断问题。未来的研究可以针对这些限制进行改进和优化。

首先，可以进一步改进KASP技术的引物设计方法，以提高SNP位点的设计成功率。这可以通过引入更精确的算法和分析工具，结合更全面的基因组数据进行引物设计。此外，可以利用高通量测序技术获取更多的基因组数据，以便更准确地预测SNP位点的存在和分布情况。其次，可以拓宽其研究领域，探索KASP技术在不同动物种群中的应用潜力。虽然KASP技术应用于动物领域中开始逐渐盛行，但大部分研究还是集中在植物方面。因此，可以进一步延伸到更多的动物种类中，如家畜、家禽、野生动物、水产动物和昆虫等。这将有助于丰富KASP技术在动物遗传育种中的应用领域，并为不同物种的育种工作提供更多的分子标记辅助选择手段。同时，应继续改进KASP技术分型的操作流程和试验条件，以提高其在实际应用中的准确性和稳定性。这包括优化反应体系的组成和反应条件的控制，以确保分型结果的准确性和可重复性。此外，可以探索更多的技术改进和创新，以提高KASP技术的自动化程度和高通量性能，以满足大规模育种项目的需求。最后，可以进一步研究KASP技术与其他分子标记分型技术的结合应用。不同的分子标记技术各有优势，结合使用可以进一步提高育种效果和准确性。例如，可以结合KASP技术与全基因组测序、SNP芯片等技术，开展更深入的遗传变异分析和基因组选择研究。

总之，KASP技术在动物领域中具有广阔的应用前景。通过改进引物设计方法、拓展应用物种范围、优化试验流程和结合其他分子标记技术，可以进一步提高KASP技术的准确性和高通量性能，为动物育种工作提供更多的选择和支持。