嘉兴地区970 例疑难配血问题及意外抗体分布特征

罗振 倪修文 屠佳燕 孙佳怡 李筱园 徐睿 高闻 李璋

输血治疗是纠正各种血液成分缺乏的主要措施。在实际临床工作中，交叉配血环节经常出现疑难配血的现象，若不能及时处理不仅会延误病情甚至可能导致患者死亡[1,2]。为了解嘉兴地区输血前检测过程中出现的各种疑难问题及意外抗体分布特点，本次研究对地区各临床医院送检的疑难配血患者标本的血型血清学检测结果进行回顾性分析，旨在探究意外抗体的分布特征，以保障临床精准、安全、有效输血。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2018年1 月至2023年1 月期间嘉兴地区各医院送检的交叉配血不相合的疑难配血标本970 份，其中促凝管及EDTA 抗凝管标本量各5 ml。

1.2 仪器与试剂 仪器包括：恒温水浴箱（由上海跃进公司生产），KH120离心机（由长沙湘至公司生产），KA-2200离心机（由日本久保田公司生产），免疫微柱孵育器、血型血清学离心机（由美国伯乐公司生产）；主要试剂包括：抗球蛋白检测卡（由美国伯乐公司生产），聚凝胺介质试剂（由珠海贝索公司生产），ABO血型反定型试剂盒（由长春博迅生物技术有限责任公司生产），IgM+IgG抗-D试剂（由加拿大宜美康公司生产），IgM 抗-D 试剂（由英国阿尔巴公司生产），抗A抗B标准血清、抗体筛选细胞、国产谱细胞、抗IgG+C3 d、各种抗血清（由上海血液生物医药有限责任公司生产），进口谱细胞（由荷兰三昆公司生产），所有试剂均在有效期内。

1.3 方法 严格按照《全国临床检验操作规程》操作[3]。采用玻璃试管直接离心法进行血型鉴定，采用盐水法、抗球蛋白法、聚凝胺法进行意外抗体筛选和鉴定，必要时加做微柱凝胶法、酶法、吸收放散法以确认抗体特异性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 26.0 软件对数据进行统计分析，计数资料采用例数（构成比）表示，组间差异采用χ2检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 疑难配血患者的抗体检出分布情况 970 例疑难配血标本中，非特异反应475 例，其中冷自身抗体263 例、温自身抗体93 例、冷/温自身抗体108 例、药物抗体3 例、试剂抗体1 例、蛋白凝集7 例；特异性反应495 例（包括自身抗体合并特异性意外抗体33 例），特异性意外抗体分布情况见表1。

表1 疑难配血患者特异性意外抗体分布特征

2.2 疑难配血患者特异性意外抗体产生的影响因素见表2

表2 疑难配血患者特异性意外抗体产生的影响因素

由表2 可见，性别因素与疑难配血患者特异性意外抗体产生无明显相关（χ2=2.86，P＞0.05）。年龄、输血史和科室因素与疑难配血患者特异性意外抗体产生明显相关（χ2分别=42.08、31.19、44.83，P均＜0.05）。

3 讨论

为保证临床输血安全有效，输血前常规检测包括ABO、RhD 血型鉴定、抗体筛查和交叉配血等[4]。但实际检测中常常受多种因素的影响使得检验结果难以判断，如患者自身因素、供血者血液因素、试剂因素、实验条件及方法选择等。

保障输血安全的基础是受血者免受同种异体免疫对红细胞抗原的不良反应，因此排除自身和非免疫因素影响，检出特异性意外抗体尤为重要[5]。本研究共检出非特异反应475 例，包括非免疫因素11 例和自身抗体464 例。非免疫因素：检出试剂抗体1 例，患者血清与试剂筛选细胞呈广谱性反应，筛选细胞洗涤后再次反应，凝集均消失；检出药物抗体3 例，分别为抗-CD38 抗体2 例、抗-CD47 抗体1 例，排除抗-CD38 抗体干扰可选用二硫苏糖醇或2-巯基乙醇破坏红细胞表面的CD38 分子，阻断抗-CD38抗体的结合[6]。排除抗-CD47抗体干扰可选择红细胞吸收法（易漏检其他意外抗体）或血小板吸收法[7]（易漏检HLA抗体）；蛋白凝集7 例，均为多发性骨髓瘤患者，因异常球蛋白增生导致红细胞产生缗钱状假凝集。排除缗钱状假凝集干扰可用生理盐水置换的方法，即试管法加入血清和红细胞离心后，将多余血清用等量生理盐水进行置换，假凝集即可消散，而特异性反应引起的真凝集不受影响[8,9]。自身抗体：检出冷自身抗体263 例、温自身抗体93 例、冷温自身抗体混合型108 例，自身抗产生原因有很多种，可与免疫性疾病、恶性肿瘤、感染以及药物有关。自身抗体阳性患者血清可与自身红细胞、供血者红细胞和试剂红细胞凝集，可导致血型鉴定困难、交叉配血不合。排除了自身抗体的干扰，可选用患者红细胞反复吸收血清自身抗体，亦可选用2-巯基乙醇裂解IgM 型冷自身抗体，再进行抗体检测。排除自身抗体对输血前检测的影响，确定无特异性意外抗体之后，再进行交叉配血，选择最小不相容（即反应最弱）的血液输注[10,11]。

本研究疑难配血案例中共检出特异性意外抗体475 例，发生率为51.03%，主要涉及Rh、MNS、ABO、Lewis、P1PK、Kidd、Diego、Duffy 等8 个血型系统，Rh 系统相关抗体比例最高，为70.51%。由此可见Rh系统的单特异性抗体、多重抗体是导致疑难配血主要因素[12]，Rh系统单特异性频率从高到低依次为：抗-E、抗-c、抗-e、抗-D、抗-C。目前临床输血常规检测RhD 抗原，而未对患者做Rh 分型抗原检测，患者输血时抗原不合导致反复刺激使得免疫产生抗体的机会增多。为解决这一问题，本中心与临床输血机构正在开展献血者及患者Rh 分型抗原检测，进行Rh分型抗原同型配合输注，以此减少Rh系统产生意外抗体的概率，促进精准化输血治疗。Rh系统具有较强的免疫原性，对于已经产生Rh抗体患者，特别是妊娠患者，应定期监测抗体效价，必要时可选择免疫球蛋白注射治疗，以防止新生儿溶血病的发生[13]。其他特异性抗体检出率较多为MNS 系统和Lewis 系统，相关抗体比例分别为20.40%和3.84%，两种抗体性质大多为IgM 类，通常情况下37 ℃时凝集反应减弱或消失，但也有在37 ℃有活性、新生儿溶血病的报道[14，15]。特异性抗体检出率较少的为P1PK系统、Kidd系统、Diego系统、Duffy系统和Hh 系统，其中产生的抗-Dib、抗-Tja、抗-Fya、抗-H属于抗高频抗原抗体，此类抗体一旦产生会造成临床鉴定困难、输血困难，可选择自体输血或稀有血型库匹配输血[16]。需要指出的是，抗-Tja、抗-Dib、抗-H 所对应的P1PK 系统、Diego 系统和Hh 系统的分子生物学检测在浙江省血液中心输血研究所的帮助下完成。ABO 血型系统特异性抗体检出率为4.44%，患者均为亚型个体，血清中伴有IgM 型意外抗体，产生抗-A1 意外抗体12 例（A亚、A亚B 个体），产生抗-B意外抗体12 例（B亚、AB亚个体）[17]。

为了研究不同患者意外抗体阳性检出率有无差异，本次研究对年龄、性别、输血史和科室进行分层，结果显示，不同性别患者意外抗体阳性检出率无明显差异（P＞0.05），提示性别与之无明显关系。年龄高于66 岁时意外抗体阳性率明显降低（P＜0.05），推测其可能原因与免疫机制有关，部分意外抗体会随时间的推移效价降低或消失[18]。有输血史患者意外抗体阳性率比无输血史患者高（P＜0.05），分析其原因为输注异型抗原概率增加，免疫刺激后产生意外抗体。妇产科意外抗体阳性率明显增高（P＜0.05），分析原因为妇产科患者接受免疫剌激概率增加，如受妊娠、流产和分娩等免疫剌激，使机体产生相应的免疫应答，从而产生意外抗体的概率增加。故临床更应重视有年龄低于66 岁、有输血史的患者和妇产科患者，其输血前宜进行意外抗体筛查。