血清因子表达与乙肝纤维化及病理变化程度的关系

安仲武 薄维波 李 欣 常焕显

（南京医科大学康达学院附属连云港东方医院，江苏 连云港 222042）

乙肝是一种感染性疾病，乙型肝炎病毒阳性，在世界范围内均较常见，极易向肝硬化或肝细胞癌发展，严重威胁患者生命健康[1]。在肝硬化进展中，肝纤维化是必经阶段，具有可逆性，积极治疗能延缓疾病向肝硬化进展[2]。本研究探讨了血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达与乙肝纤维化及病理变化程度的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年2 月至2023 年2 月我院乙肝患者100 例，年龄25～52 岁，平均（34.25±5.16）岁，女40 例，男60 例。炎症活动度：G0～G1 10 例，G2 30 例，G3 45 例，G4 15 例；肝纤维化病理分期：SO 10 例，S1 20 例，S2 25 例，S3 30 例，S4 15 例。

1.2 方法

1.2.1 血清25（OH）D3 表达测定 采集患者清晨空腹静脉血6 mL，离心将上层血清分离出来，在-70℃冰箱中保存样本，采用全自动生化分析仪（AU680，贝克曼）测定血清25（OH）D3 水平。

1.2.2 血清miR-25-3p 表达测定 依据RNA 提取试剂盒说明书将患者血清总RNA 提取出来，对RNA 浓度与纯度进行检测，合格后逆转录500 μg 总RNA，将cDNA 合成。荧光定量PCR 反应，miR-25-3p 与U6引物序列：正向分别为5’-CGTGCATAGACACAGGGAGTT-3’、5’-CTGGCATCCGCTGGAGA-3’，反向分别为5’-GGAGGTTACATTCAGCGAT-3’、5’-TTCGGTTGTCGATATTCGGT-3’。反应总体系10 μl，cDNA 模板、正向引物、反向引物、Master Mix、双蒸水分别1 μl、1 μl、1 μl、5 μl、2 μl。反应程度：在95℃、95℃、60℃、70℃温度下分别与预变性、变性、退火、延伸各2 min、20 s、30 s、30 s，共40 个循环。用2-△△Ct 值表示miR-25-3p 表达[3]。

1.2.3 血清CHI3L1 表达测定 采用酶联免疫吸附试剂盒，运用酶联免疫吸附法测定血清CHI3L1 表达。

1.2.4 肝纤维化指标测定 采集患者清晨空腹血6 mL，离心将上层血清分离出来，在-70℃冰箱中保存样本，采用化学发光仪（Mindray CL-6000i）测定Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CIV）、层黏连蛋白（LN）、透明质酸（HA）等肝纤维化指标水平

1.3 观察指标（1）不同炎症活动度患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达；（2）不同肝纤维化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达；（3）不同肝纤维化分期患者的肝纤维化指标；（4）血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达与肝纤维化及病理变化程度的关系。

1.4 肝纤维化病理分期评定 依据中华医学会肝病学分会与传染病和寄生虫病学分会制定的标准及肝脏穿刺病理活检结果，无纤维化评定为S0，纤维增生伴汇管区扩大评定为S1，小叶结构保留且汇管区周围纤维化评定为S2，小叶结构紊乱且纤维间隔但无肝硬化评定为S3，确定肝硬化或重度纤维化评定为S4[4]。

1.5 统计学分析 采用SPSS28.0 软件分析，计数资料用（%）表示，用χ2检验；计量资料用（）表示，用t检验，P＜0.05 具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同炎症活动度、肝纤维化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达比较 炎症活动度G0～G1、G2、G3、G4 患者血清25（OH）D3 表达逐渐降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表达均逐渐升高（P＜0.05）；肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表达逐渐降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表达逐渐升高（P＜0.05），见表1。

表1 不同炎症活动度、肝纤维化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达比较 （）

表1 不同炎症活动度、肝纤维化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达比较 （）

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2.2 不同肝纤维化分期患者的肝纤维化指标比较 肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ表达分别为（96.55±13.31）μg/L、（130.58±22.21）μg/L、（187.88±26.97）μg/L、（216.73±33.68）μg/L、（315.56±54.88）μg/L，血清CIV 表达分别为（103.78±18.55）μg/L、（139.67±5.53）μg/L、（220.22±34.76）μg/L、（331.28±41.41）μg/L、（417.30±59.30）μg/L，血清LN 表达分别为（93.11±11.50）μg/L、（121.52±19.55）μg/L、（139.68±30.70）μg/L、（232.22±40.31）μg/L、（300.28±50.38）μg/L，血清HA 表达分别为（83.55±17.58）μg/L、（120.88±20.55）μg/L、（251.36±40.08）μg/L、（342.75±51.75μg/L、（533.56±63.88）μg/L。肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者的血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表达均逐渐升高（P＜0.05）。

2.3 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达与肝纤维化及病理变化程度的关系分析 血清25（OH）D3表达与炎症活动度、肝纤维化分期均呈负相关关系（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表达与炎症活动度、肝纤维化分期均呈正相关关系（P＜0.05），见表2。

表2 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表达与肝纤维化及病理变化程度的关系分析

3 讨论

有研究表明[5-6]，乙肝患者炎症活动度、肝纤维化程度与血清25（OH）D3 表达呈负相关，血清25（OH）D3 表达降低说明患者体内具有剧烈的炎症活动、严重的肝纤维化程度。研究结果表明，炎症活动度G0～G1、G2、G3、G4 患者的血清25（OH）D3 表达逐渐降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表达均逐渐升高；肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表达逐渐降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表达逐渐升高。肝纤维化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表达均逐渐升高。血清25（OH）D3 表达与炎症活动度、肝纤维化分期均呈负相关关系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表达与炎症活动度、肝纤维化分期均呈正相关关系，和上述研究结果一致。

综上，血清25（OH）D3 与乙肝炎症活动度、肝纤维化分期均呈负相关关系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表达与乙肝炎症活动度、肝纤维化分期均呈正相关关系。