家畜口蹄疫抗体监测情况分析

龙威海，刘杏，刘元秋

（蒙阴县畜牧发展促进中心 山东临沂 276200）

口蹄疫（Foot and Mouth，FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，我国主要流行O 型、A 型和亚洲Ⅰ型3种血清型[1]，一年任何季节均可发生[2]。该病多次在世界范围内暴发流行，在我国也偶有发生，严重影响畜牧业健康发展，被世界动物卫生组织（WOAH）列为法定报告动物传染病，我国列为一类动物疫病。

山东省对家畜口蹄疫开展强制免疫，保障动物强制免疫的有力措施是合适的免疫计划和有效的抗体监测方案。开展免疫效果监测，及时了解全县免疫水平，对动物疫病综合防控具有重要意义[3]。根据《蒙阴县动物疫病监测净化与流行病学调查计划（2022—2025 年）》要求，为进一步检测蒙阴县重大动物疫病防控成效，确保辖区内重大动物疫病质量，通过随机抽取10 个乡镇街区的规模养殖场和散养户猪、牛、羊血清进行抗体检测，综合评估全县口蹄疫免疫效果及感染风险，为全县口蹄疫的防控工作提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 样本来源

2022 年春季集中免疫后采集样本，覆盖全县10 个乡镇街区。随机抽取8 个猪场、2 个羊场、2 个牛场和47 个自然村，每个规模场采集样品30 份、自然村抽查5 个散养户，总计采集样本595 份。

表1 样本采集情况（份）

1.2 仪器耗材

自动洗板机（北京普朗新技术有限公司）、酶标仪（Tecan）、超纯水仪（北京普析通用仪器有限责任公司）、移液器（Eppendorf）、恒温培养箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）、96 孔板等。

1.3 免疫抗体监测

1）检测方法及试剂。按照改进型口蹄疫病毒O 型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（内蒙古金迈诗生物科技有限公司，批号2022E23-001）说明书检测。

2）试验成立条件。病毒抗原对照OD450nm值≥0.8；阳性对照抗体效价在1∶1024±1 滴度以内；阴性对照抗体效价＜1∶8。

3）临界值。在6 孔病毒抗原对照中，选取4 孔相对稳定的值，弃去最高和最低的OD450nm值，计算剩余2 孔的平均OD450nm值，再除以2，即为临界值。

4）结果判定标准。牛羊抗体效价≥1∶128，99%以上保护；抗体效价≤1∶16，不保护；抗体效价在1∶22～1∶90 之间，50%保护。猪抗体效价≥1∶64，99%以上保护；抗体效价＜1∶8，不保护；抗体效价在1∶8～1∶45之间，50%保护。

1.4 感染抗体监测

按照口蹄疫病毒非结构蛋白（NSP）3ABC 间接ELISA 抗体检测试剂盒（洛阳莱普生信息科技有限公司，批号TE211203）说明书进行检测。在免疫状态下，对NSP 抗体检测阳性的，需进一步确认。猪可在非结构蛋白抗体首次监测2～4 周后（期间不能进行免疫）进行二次采样检测（两次采样检测的猪要保持一致）。若猪群NSP 抗体阳性率等于或低于首次检测结果的，可排除感染；也可活体采集扁桃体进行病原学检测。牛、羊采集0-P 液进行RT-PCR 或荧光RT-PCR 检测，病原学检测结果为阴性的，判定为阴性畜；病原学检测结果为阳性的，判定为阳性畜[4]。

2 结果与分析

2022 年春季动物疫病强制免疫监测O 型口蹄疫抗体595 份，合格532 份，合格率89.4%。全县猪、羊、牛O 型口蹄疫个体免疫合格率均在85%以上，高于农业农村部相关规定，结果基本反映了全县口蹄疫免疫现状。

2.1 不同家畜抗体数据

从表2 可以看出，猪、羊、牛型口蹄疫抗体合格率分别为85%、96%、100%，牛合格率最高，其次是羊，猪最低。牛羊O 型口蹄疫抗体水平高于猪，蒙阴县猪多数以育肥为主，饲养周期较短，而牛羊饲养周期长，免疫次数较多，从而导致牛羊免疫抗体水平较高。

表2 不同家畜O型口蹄疫抗体数据

2.2 不同场点抗体数据

散养户O 型口蹄疫抗体水平略低于规模场，差距不大（表3）。原因分析：蒙阴县口蹄疫属于强制免疫，每年春秋各免疫一次，散养户免疫过程中可能存在免疫剂量不足和操作不当等问题，从而影响免疫效果。

表3 不同场点O型口蹄疫抗体数据

2.3 群体抗体数据

规模羊场和规模牛场群体合格率均为100%，规模猪场群体合格率87.5%，散养户群体合格率93.6%（表4）。

表4 群体O型口蹄疫抗体数据

2.4 感染抗体数据

规模猪场和规模羊场口蹄疫感染抗体结果均为阴性，规模牛场口蹄疫感染抗体阳性率为5%（表5）。

表5 不同家畜感染抗体数据

3 讨论与建议

3.1 全县口蹄疫整体免疫效果

从检测结果看，被检测规模养殖场（户）的免疫抗体合格率均在85%以上，达到了山东省口蹄疫免疫抗体合格率全年保持在80%以上的要求，蒙阴县春季口蹄疫集中免疫达到预期目标。蒙阴县自2019 年启动免疫无口蹄疫区建设以来，不断提升实验室检测能力，进一步改革和完善了村级动物防疫员管理制度，规模养殖场积极推进强制免疫“先打后补”政策，动物疫病强制免疫工作重视程度进一步提升，因而才能取得理想的成果。

3.2 口蹄疫免疫效果

猪、羊、牛O 型口蹄疫强制免疫抗体检测合格率均符合国家、省要求，但也存在1 家猪场、3 家猪散养户免疫抗体合格率分别为6%和0%没达标的场点，可能是由于操作不规范、村级动物防疫员免疫密度低等原因造成。对于不达标的场（户）根据免疫效果通报情况进行及时补免重新采样监测，确保免疫抗体合格率达到80%以上。

不同畜种间O 型口蹄疫抗体合格率存在一定差距，羊、牛场（户）的免疫效果明显优于猪场（户），规模猪场和猪散养户都存在免疫抗体较低的现象。羊、牛养殖周期较长，每年春季两季各进行一次强制免疫，对家畜进行多次免疫，可以使免疫抗体水平维持在较高水平[5]。生猪上半年价格波动较大，调动频繁，存在对补栏猪漏免的情况，同时也存在采血时还未达到口蹄疫抗体免疫应答的最佳时间，从而导致猪免疫抗体水平低于羊、牛。

3.3 感染抗体阳性处置

本次共检测猪、牛、羊血清390 份，结果显示：全县口蹄疫非结构蛋白抗体阳性率为0.77%，其中牛羊阳性率为2%，远低于报告的我国牛羊口蹄疫3ABC 抗体阳性率低于39.44%这一水平[6]，目前来看，蒙阴县口蹄疫3ABC 抗体阳性率处于较低水平。

本次检测牛的3ABC 抗体阳性率为5%，猪、羊的3ABC 抗体阳性率均为0%。对检测阳性场点，按照3ABC 阳性复核工作流程要求，对牛场牛只限制流通，并进一步采样检测。对阳性血清样品对应的牛只采集0-P 液封存，送上一级业务部门采用荧光PCR 方法进一步检测，检测结果为阴性。3 周后再次对该养牛场进行采样、送样，仍采用口荧光PCR 方法进行检测，检测结果仍为阴性。

3.4 提高蒙阴县免疫质量的建议

山东省免疫无口蹄疫和免疫无禽流感区建设已通过国家评估，建设过程中蒙阴县进一步健全了动物防疫队伍专业能力、全面提升了兽医实验室建设、持续增强了检测能力。但要做到高标准维持无疫，做好无疫区的维持运行，现对蒙阴县的口蹄疫防控工作提出3 点建议：①全县口蹄疫免疫抗体合格率均在80%以上，但各乡镇免疫水平不均衡。2020 年对村级防疫员改革以来，每名防疫员负责6～7 个村，防疫人员素质参差不齐，导致免疫质量存在一定差距。下一步应加大防疫员的培训力度，全面提升动物防疫水平。同时加大督导检查力度，确保免疫水平较低的乡镇及时补免，保证抗体水平合格率；②全面推进强制免疫“先打后补”工作。应按规模全面推行养殖场户强制免疫“先打后补”，切实落实畜禽生产经营者动物防疫主体责任。同时应加大自购自免养殖场户免疫效果抽检力度，及时公布监测评价结果；③进一步强化检测能力。蒙阴县动物疫病检测工作起步较晚，人员队伍相对薄弱、对检测技术关键点的掌握还不够成熟。需加强系统培训，通过走出去、请进来、自己学等多种方式全面提升蒙阴县兽医实验室检测技术水平。■