弓形虫病的免疫学诊断方法

阿斯喀·夏热甫汉，叶尔保勒，王振宝，达·达布西力图

（伊宁海关技术中心 835000）

弓形虫病是一种人畜共患病，其传播会严重影响动物的生长繁育，甚至造成大规模死亡，给畜牧业造成巨大的损失，而且也会造成人类感染，对人类的健康造成巨大威胁[1]。当前针对此疾病尚未形成有效的治疗方案，对此加强弓形虫病的诊断非常必要。相关研究表明，弓形虫病临床症状多变，并且缺乏特异性[2]，加之常规的病原学检测方法准确率不高，耗时较长，让此疾病的诊断愈加困难。而免疫学诊断不仅具有较高的诊断准确率，而且操作便捷，能够快速呈现检测结果，成为弓形虫病主要的诊断方式，当前免疫学诊断方法较多，如间接血细胞凝集试验 （IHA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等已在我国得到广泛的推广应用。对此笔者查阅有关弓形虫病免疫学诊断方法的研究文献，对各种弓形虫免疫学诊断方法的研究进展进行综述，为弓形虫病的有效防治提供借鉴。

1 染色试验（DT）在弓形虫病诊断中的研究与应用

DT 法是弓形虫所独有的一种免疫学诊断方法，具有较高的灵敏性和特异性，被认为是弓形虫诊断的标准方法。其原理是通过特异性的抗体和补体的协同作用使弓形虫虫体发生变性，不能被碱性美蓝染色，从而实现弓形虫的检测。但由于此方法检测过程中必须使用活的滋养体，检测过程中伴有一定程度的生物安全风险，从而限制该方法的使用，难以实现大范围的推广应用[3]。

2 间接血细胞凝集试验（IHA）在弓形虫病诊断中的应用

IHA 法检测的原理是利用弓形虫可溶性抗原致敏于红细胞表面，在与特异性抗体进行结合后会出现明显的凝集现象而实现对弓形虫的检测。此检测方法检测成本较低，操作较为方便，检测时间较短，被广泛应用于弓形虫病的大规模筛选当中。全敏秀[4]在对湖南省弓形虫感染情况调查研究中使用IHA 法进行弓形虫病的诊断，其研究表明湖南省弓形虫总抗体阳性率为33.6%（457/1360）。张克传[5]选取弓形虫感染的家兔作为研究对象，分析IHA 法的检测效果，研究指出此检测方法检测总符合率为86.6%，特异性为93.3%，敏感性为47.6%。向忠菊等[6]对安徽部分地区猪弓形虫病的血清学进行调查研究，并对IHA 检测效果进行分析，其研究指出此方法存在致敏红细胞稳定性较差，易与血清产生交叉反应等不足，导致易出现非特凝集情况，影响检测的稳定性，从而造成此检测方法所用检测试剂难以标准化，限制此方法的推广应用。

3 改良凝集试验（MAT）在弓形虫病诊断中的研究与应用

MAT 法在弓形虫检测方面具有较高的准确性以及特异性，在国际上公认为弓形虫检测“金标准”。佐思[7]自主研制了改良的MAT 试剂盒，并对其性能进行分析，其研究指出自主研究的试剂盒在检出率方面显著优于ELISA 试剂盒，准确率方面与进口的MAT 试剂盒相一致，此试剂盒检测结果具有良好的特异性和灵敏性，并且检测结果重复性较好。杨娜等人[8]利用3789 份来源于辽宁省各个地区多种动物的血清样品对MAT与IHA 两种弓形虫检测方法的检测性能进行对比，其研究结果表明，与IHA 相比，MAT 法用于弓形虫检测不仅具有更高的准确率，而且具有更好的灵敏性和特异性。王仁通[9]利用弓形虫感染的猪血清作为实验对象，对比分析MAT 与IHA 两种弓形虫检测方法的检测性能，并且将检测结果与PCR 检测结果进行对比，研究表明MAT 检测结果明显优于IHA 法，与PCR 检测结果较为一致，并指出IHA 法在弓形虫检测中具有较高的漏检率和假阳性率。Fernandes 等[10]对89 只家猫进行弓形虫检测，其中应用MAT 与IHA 两种弓形虫检测方法，研究指出MAT 法的阳性检出率为26 %，高于IHA法的18%，并且虽然IHA 法在弓形虫检测中的相对特异性为100%，但相对敏感性只有70%。

4 间接荧光抗体试验（IFAT）在弓形虫病诊断中的研究与应用

IFAT 方法在国外已经生产出商业化的试剂盒，并且取得较好的应用效果，但我国对此检测方法的应用较少，没有市场基础，为此商业化程度明显低于国外一些发达国家[11]。我国也有研究者进行弓形虫IFAT 法试剂盒的研发工作，但相应报道较少，其中卢致民等人[12]研发了针对弓形虫检测的IIFA 试剂盒，其在研究中将此试剂盒的检测性能与德国Viro-Immun 的试剂盒Youden 进行了对比，两种试剂盒具有较为一致的敏感性和特异性，而且卢致民等人研发的试剂盒在4℃条件下保存期能够达到6 个月。虽然我国对于IFAT 法的应用和研究略显不足，但此检测方法操作较为方便，制片染色后就能够利用显微镜进行检测结果的判定，具有较为广阔的应用前景。

5 酶联免疫吸附试验（ELISA）在弓形虫病诊断中的研究与应用

ELISA 法是当前弓形虫检测中使用最多最为广泛的一种诊断方法。罗才庆等人[13]对ELISA 法在弓形虫抗体检测中的应用效果进行调查分析，调查结果表明此检测方法具有较高的符合率，能够有效应用于猪弓形虫病的诊断。张静[14]对32 份猪血清利用自主构建的弓形虫阻断ELISA 检测方法进行检测，其中检测方法中应用的抗体为弓形虫单克隆抗体B6G，检测结果表明此检测方法的阳性符合率为87.5 %，与MAT 法结果相一致。李祎等人[15]对ELISA 检测方法进行改良，构建循环抗原双抗体夹心ELISA 法，研究表明此检测方法与nPCR 法的检测结果对比无显著差异，并且此检测方法可以对血清中最低1.5 ng/mLGRA1 抗原进行检测，明显优于商品化的试剂盒检测结果。Liyanage 等人[16]对4 个数据库当中的57 篇弓形虫ELISA 法检测相关文献进行分析，其调查结果表明，当前间接ELISA 和自制ELISA 是弓形虫检测最为常用的ELISA 法。当前国内生产的诊断试剂盒在质量方面仍与一些发达国家进口的试剂盒存在差异，但也具有较好的诊断准确率，能够满足国内的应用需求。其中黄翠琴等人[17]对国内三种不同企业生产的弓形虫抗体检测试剂盒的检测稳定性进行分析，研究指出国内生产的弓形虫IgG 抗体检测试剂盒具有较为稳定的检测性能，能够满足我国猪场的弓形虫日常检测需求。

6 胶体金快速诊断技术在弓形虫病诊断中的研究与应用

胶体金快速诊断技术是胶体金标记、免疫检测与层析分析三种不同技术相结合的产物，检测过程中不会产生污染，而且操作方便，能够呈现直观的结果，从而应用较为广泛。卢爱桃等[18]人利用254 只犬猫作为实验对象，对胶体金免疫层析法（GICA）在弓形虫抗体检测中的检测性能与ELISA 法进行对比，研究结果显示两种检测方法的检测结果无显著差异。与ELISA 相比，GICA 法不仅具有较为一致的灵敏性，而且操作更为简单，且无需专业设备，更适合进行推广应用。张宁[19]以289 份血清作为样本，对自主研制的弓形虫抗体胶体金试纸进行检测分析，其中自制胶体金试纸使用GRA6-GRA2 蛋白作为标记抗原，其研究表明自制胶体金试纸阳性检出率为2.42%，高于市售间接血凝试剂盒的2.07%，并且两种检测方法符合率达到99.5%。卓国荣[20]应用280 份犬血清作为实验样本对胶体金快速诊断技术的检测效果进行分析，其研究表明此检测方法的检测阳性率与IHA 法较为一致，并且此检测方法所用的测试试纸制作更加简便，而且检测更加灵活快捷，比IHA 法更适合进行弓形虫的快速诊断。

7 小结

本文对当前弓形虫病免疫学诊断方法的相关研究进行综述，发现当前应用于弓形虫病诊断的免疫学方法较多，并且一些成果已经得到广泛的推广应用，在防控弓形虫病传播中发挥积极作用。但当前弓形虫病诊断中使用的免疫学检测方法并不统一，各种检测方法均有各自的优缺点，很多研究方法仍只局限于试验阶段，并未有大量的应用实践，一些研究方法虽然经过试验验证，但选取的研究对象较少，无法确保适应于实际检验。对此，弓形虫病免疫学诊断方法仍需继续进行深化研究，其后研究方向应重点放在：一是可进行市场推广应用的弓形虫病免疫学诊断试剂盒研究；二是多种检测方法结合提升弓形虫病免疫学诊断的敏感性和特异性；三是借鉴国外经验，优化我国当前的弓形虫病免疫学诊断方法。