几种检测技术在禽蛋残留检测中的应用

王俊菊，阎 芳

（天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心 300402）

目前，禽蛋中的兽药残留主要包括抗生素类、兽药及其代谢物、激素类药物等。其中，抗生素是目前使用最广泛的药物，同时也是造成禽蛋兽药残留的主要原因之一。由于抗生素对畜禽养殖的健康发展有重要作用，因此受到广泛重视，但其在禽蛋中的残留却对人体健康造成了极大的危害。近年来，随着人们食品安全意识的不断提高，禽蛋产品中抗生素残留、兽药残留、重金属和有害物质等问题引起了人们的广泛关注。因此，如何快速准确地检测这些问题，成为检验检疫工作人员所关心的问题。

1 禽蛋中残留兽药种类及残留检测方法

随着人们对食品安全问题的高度重视和对药物残留限量标准的不断提高，我国规定在禽蛋中限量使用抗菌药物（如恩诺沙星、土霉素等）。而在实际生产中，由于养殖技术不到位、饲料中添加抗生素等因素，造成兽药残留超标现象较为普遍。此外，一些家禽疾病也容易导致禽蛋中存在兽药残留。如鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病菌引起的一种以免疫抑制为主的传染病，主要危害禽类健康，导致禽蛋中兽药残留超标。目前，检测禽蛋中兽药残留常用的方法有气相色谱法、酶联免疫吸附试验等方法。气相色谱法是测定动物性食品中兽药残留的一种快速方法，但在实际应用中操作繁琐、检测速度较慢。液相色谱法是目前被广泛采用的一种检测方法，但其在分析测定时对样品提取溶剂和提取方法要求较高。酶联免疫吸附试验是一种灵敏度高、选择性好、简便快速的定性定量检测方法，但其检测结果受样品基质及样品量影响较大。

1.1 毛细管电泳-高效液相色谱法

毛细管电泳-高效液相色谱法（简称CPC-HPLC）是一种应用于复杂样品的高效液相色谱分析方法，在分析复杂的蛋白质、氨基酸、糖类、维生素以及一些金属离子时有较好的效果，具有分离效率高、线性范围宽、柱效高等优点。目前，CPC-HPLC 法已经被广泛应用于水产品中药物残留的检测。赵飒等[1]人通过研究发现：在鸭蛋中添加氯霉素可以降低鸭蛋中药物的残留量，如果添加量超过20 mg/kg 时，就会导致鸭蛋中药物残留量超标，造成食品安全隐患。在使用氯霉素后，有2%的鸭蛋被检测出超标，而其他被检测出超标的禽蛋中残留药物都在50 mg/kg 以下。李秋萍等人通过对蛋清和蛋黄中的药物残留进行测定，证明了蛋清和蛋黄中兽药残留在使用氯霉素后都有一定程度的升高。石志斌等[2]人通过对禽蛋中盐酸环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星和氧氟沙星残留检测分析表明，该方法灵敏度高，能满足日常检测要求。但是，该方法不能完全替代国家相关标准。罗海强等[3]人通过测定蛋清和蛋黄中恩诺沙星、诺氟沙星和氧氟沙星残留分析结果表明，该方法不能完全替代国家相关标准。因此，在实际检测过程中应当根据实际情况对检测方法进行适当的选择。

1.2 液相色谱-串联质谱联用法

液相色谱- 串联质谱联用法（LC-MS/MS）是近年来发展起来的一种高灵敏度、高选择性、快速的检测方法，具有简便、准确、快速等优点。通过液相色谱柱分离目标物，利用串联质谱仪将目标物与质荷比完全一致的内标离子进行质谱定量，在串联质谱仪上获得质荷比不同的碎片离子信息。与传统的气相色谱-质谱联用（GC-MS）相比，液相色谱-质谱联用技术具有检测灵敏度高、分析速度快、分离效能高、易于实现多残留同时测定等优点，因而在兽药残留检测中被广泛应用。在禽蛋中常用的药物包括抗生素类（如四环素类、磺胺类等）、喹诺酮类、抗寄生虫药等。该方法可实现对食品中微量甚至痕量的分析检测，能同时测定多类化合物，适用于复杂样品中兽药残留的定性和定量分析。田蕴等[4]采用LC-MS/MS 技术对禽蛋中硝基呋喃类和四环素类药物残留进行检测，结果表明，该方法准确可靠，灵敏度高，线性范围宽。目前已用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋等禽蛋产品中硝基呋喃类药物及四环素类药物残留的检测，其回收率均在80%以上。张崇威等[5]利用LC-MS/MS法检测禽蛋中四环素类药物残留。结果表明：该方法灵敏度高，灵敏度比传统的气相色谱法提高10 倍以上；线性范围宽（5～2000μg/L）；检测限低至1μg/kg，最低检出限可达0.5μg/kg；日内精密度和日间精密度均较低；可用于禽蛋中硝基呋喃类和四环素类药物残留的定性及定量检测。

1.3 气相色谱-质谱联用仪

气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）是将气相色谱（GC）和质谱仪进行有机结合的一种仪器，它在分离、分析和鉴定混合物中各组分时具有高效、快速、灵敏等特点，已广泛应用于食品、药品、环境等领域。在禽蛋中兽药残留的检测方面，气相色谱-质谱联用仪的应用已经十分广泛。目前，气相色谱-质谱联用仪在禽蛋中兽药残留检测的应用主要包括：蛋品中有机氯农药残留检测（包括有机磷和菊酯类）、蛋品中磺胺类药物残留检测（包括磺胺甲恶唑等）、蛋品中硝基呋喃类药物残留检测（包括呋喃妥因等）、蛋品中喹诺酮类药物残留检测（包括恩诺沙星等）。另外，气相色谱-质谱联用仪还可用于禽蛋中多氯联苯类污染物的检测。在对禽蛋中兽药残留分析过程中，色谱柱的选择及净化方法对检测结果的准确性有很大影响。因此，在选择色谱柱时，应考虑色谱柱的分离效率和样品前处理方法对兽药残留检测结果的影响。另外，目前国内禽蛋产品中兽药残留的主要检测方法有气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法等，但由于其价格较高，一般企业无法接受，因此还需进一步研究完善。

1.4 酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于抗体和抗原特异性反应的免疫测定技术，已广泛应用于动物性食品中兽药残留的检测。该方法的原理是利用抗原与抗体特异性结合反应后形成免疫复合物，再通过加入酶标记的抗血清或抗血清与酶标物结合后产生颜色反应，最后利用分光光度计测定颜色变化值，通过计算颜色变化值间接计算兽药残留量。目前，ELISA 方法已成为禽蛋中兽药残留检测的首选方法，其应用范围也逐渐扩大。刘彦青等利用酶联免疫吸附试验对鸡蛋中恩诺沙星和土霉素的残留量进行测定，结果显示，检测限分别为20 ng/g 和5 ng/g。另外，朱丽娜等利用ELISA 方法对鸡蛋中孔雀石绿残留进行了检测，结果显示其检测限为0.5μg/kg。

1.5 液相色谱法

液相色谱法是一种以高效液相色谱为分离手段，以固相萃取为前处理手段的分析检测方法，其检测结果准确性高、灵敏度强。目前，液相色谱法在禽蛋中兽药残留检测中应用广泛，被广泛采用的是液相色谱法，如气相色谱法和液相色谱法等。气相色谱法主要有两种类型：一是利用气体为流动相，在分析仪器的检测器中进行检测；二是利用惰性气体作为流动相，在分析仪器的检测器中进行检测。液相色谱法主要有三种类型：一是以气相色谱仪为基础的分析方法，主要包括液相色谱- 质谱法（LC-MS）、液相色谱- 串联质谱（LC-MS/MS）、液相色谱- 电喷雾电离（LC-ESI-ESI）等；二是以紫外检测器为基础的分析方法，主要包括紫外-可见分光光度法（UV-Vis）、荧光检测器（FID）等；三是以离子检测为基础的分析方法，主要包括离子对检测器、荧光检测器等。液相色谱法具有灵敏度高、选择性好、专一性强等优点，目前在禽蛋中兽药残留检测中应用最为广泛。

1.6 免疫层析技术

免疫层析技术是一种快速、灵敏的兽药残留检测方法，主要利用抗原和抗体之间特异性的结合反应来达到检测目的。免疫层析技术是通过对试纸条上固定的抗体或抗原之间结合反应来实现对样品中兽药残留的检测，其检测结果不受样品基质的影响，可用于兽药残留的定性和定量分析。目前，免疫层析技术广泛应用于兽药残留检测中。宋贵方等[6]利用胶体金免疫层析技术对鸡蛋中恩诺沙星和土霉素进行了快速检测，结果表明该方法具有良好的敏感性和特异性。龚蕾等[7]建立了基于胶体金免疫层析技术对鸡蛋中土霉素和恩诺沙星残留进行快速检测，该方法具有良好的特异性和灵敏度，适用于鸡蛋中土霉素和恩诺沙星残留的定性和定量分析。

2 禽蛋残留检测的步骤

2.1 样品制备

鸡蛋、鸭蛋和鹌鹑蛋是禽蛋产品的三大类，也是禽蛋检测中最常见的样品。样品制备是检验检疫工作的重要组成部分，其目的是将禽蛋中的残留兽药和污染物进行检测，并根据检测结果判定其是否合格，同时为下一步进行后续处理提供依据。色谱法操作简单、快速、准确，但检测成本高。质谱法灵敏度高，但仪器昂贵。

2.2 样品前处理

由于禽蛋中残留兽药种类繁多，残留浓度低，且样品基质复杂多样，因此前处理是影响检测结果的重要因素之一。样品前处理方法主要有：固相萃取法（SPE）、薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、液相-质谱联用法（LC-MS）。SPE 是一种将样品溶液进行净化的方法，具有操作简单、快速、灵敏度高等特点；TLC 和HPLC 是目前使用最广泛的前处理方法；LC-MS 可以同时测定多个目标物质，具有检测速度快、灵敏度高等特点。

2.3 检测方法

目前用于检测禽蛋中残留兽药的主要方法有薄层色谱法、固相萃取技术（SPE）、固相萃取净化技术（SPE）和液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）。其中薄层色谱法操作简单，成本低；SPE 具有操作简便，耗时短的特点；液相色谱-质谱联用技术具有分析速度快，灵敏度高等特点。但该方法存在的问题是检测成本高；薄层色谱法操作复杂，耗时较长。

2.4 检测结果

在禽蛋中残留兽药的检测中，有不少文献报道了检测结果与真实值不符的情况。例如，在一批从越南进口的鲜鸡蛋中检出孔雀石绿残留，经检测这批鸡蛋中含有孔雀石绿和氯霉素两种兽药残留。对于这一问题，笔者认为主要原因是：首先是由于样品前处理不规范导致。在对鲜蛋进行前处理时，样品没有完全去除蛋壳上的附着物；其次是由于样品稀释不规范导致。在样品稀释时没有将不同浓度的样品混合均匀；最后是由于仪器检测条件不匹配导致。

2.5 质量控制

对检测结果的分析和判定是检验检疫工作的重要组成部分。在检测过程中，检验检疫人员需要根据检测结果判定产品是否合格，并对不合格产品采取相应的措施进行处理。

3 兽药残留的控制措施

首先要加强源头管理，建立健全兽药生产、销售、使用的市场准入制度，严格执行休药期制度。兽药生产企业应当建立并执行兽药产品的进货查验和记录制度，严格按照产品使用范围、用法和用量使用。从事养殖的单位或个人，应严格遵守国家有关法律法规，禁止在饲料和动物饮用水中添加任何药物。其次需要加强对饲料、动物饮用水、兽药等相关产品的监督检查，规范生产经营行为。对兽药的使用及原料进行严格的监管，尤其是饲料中抗生素等药物的添加比例应严格控制在国家规定范围内。严厉打击非法添加和滥用兽药及其他添加剂的行为，确保禽蛋产品质量安全。再者还应该加强监测预警。国家相关部门应加大对禽蛋产品中兽药残留超标的监管力度，对于不符合检验检疫要求的禽蛋产品进行及时查处，防止不合格产品流入市场。同时加强对出口企业和出口禽蛋产品的监管，督促企业加强管理，严把质量关。最后要大力开展兽药残留检测技术研究和培训工作。一方面要加强对兽药残留检测技术方面的研究，另一方面要加强对检验检疫人员专业知识的培训，使检验检疫人员具备更高水平的检测能力和对兽药残留检测工作更全面深入地理解与认识。只有这样才能确保禽蛋产品质量安全、保障人民群众身体健康和生命安全。

4 结语

我国禽蛋产业发展迅速，生产规模和产量逐年增加，但同时也存在着许多问题，如产业集中度低、集约化程度低、加工落后等，致使禽蛋产品质量难以保障。为了解决这些问题，确保禽蛋产品质量安全，需要从以下几个方面努力：一是制定统一的禽蛋产品生产和加工技术标准，完善生产流通过程中的质量监管体系；二是提高饲料等原材料的质量，加强饲料、兽药、添加剂等产品的市场准入制度建设；三是加强对生产加工过程中技术工艺的研究；四是加强对禽蛋产品质量安全标准体系建设，使检验检疫部门能够更加及时有效地对禽蛋产品质量安全问题进行监管。