血清HOXC9和AFP在早期肝癌患者中的水平及临床意义*

关 辉,薄维波

南京医科大学康达学院附属连云港市东方医院检验科,江苏连云港 222042

肝细胞癌(HCC)由于其较高的发病率和病死率,给全世界公共卫生系统造成沉重负担[1]。HCC治疗方案主要包括手术切除、射频治疗、经动脉治疗、化学疗法和放射疗法,由于其具有易转移、易复发和耐药等特点,长期生存率较低。KOUROUMALIS等[2]建议对高危人群进行HCC监测;来自一家肝癌研究机构的16年队列报告显示,早期HCC的诊断率呈增加趋势[3]。因此,寻找高灵敏度、高特异度的肿瘤标志物对HCC的诊断,尤其是早期HCC的诊断具有重要的临床意义。甲胎蛋白(AFP)是目前HCC辅助诊断的重要血清标志物,在肝脏良性疾病如慢性肝炎、 肝硬化中也有部分患者会出现不同程度的升高,在肝硬化发展为HCC的早期阶段,其灵敏度仍不理想。HOX基因属于同源盒基因,在编码进化保守的转录因子中发挥重要作用,能确保细胞分化的平衡[4]。HOXC9作为HOX家族中的一员,在多种肿瘤中存在异常表达[5-6],提示失调的HOXC9基因与癌症的发展和转移密切相关。HOX的失调表达体现在HCC发育的不同方面,包括乙型肝炎病毒(HBV)感染、丙型肝炎病毒(HCV)感染、上皮间质转化(EMT)和免疫耐受性[7],但目前为止,HOXC9在早期HCC中的诊断价值尚不清楚。本研究通过分析血清HOXC9在早期HCC患者、良性肝病患者和健康受试者之间的水平差异,旨在进一步分析其在早期HCC诊断中的价值,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年1月至2021年12月就诊于连云港市东方医院(以下简称本院)的120例肝病患者作为研究对象,包括58例早期HCC患者(早期HCC组)和62例良性肝病患者(良性肝病组)。纳入标准:(1)符合《原发性肝癌诊断规范(2019)诊断标准》[8],临床分期Ⅰ～Ⅱ期;(2)临床资料完整;(3)未进行放、化疗等治疗。排除标准:(1)合并其他系统肿瘤;(2)妊娠期女性及未成年人。早期HCC组中男43例、女15例,年龄40～68岁;良性肝病组中男32例、女30例,年龄39～71岁,肝囊肿21例、肝血管瘤24例、肝内钙化灶10例、肝腺瘤7例。另选取同期在本院体检的健康者60例作为对照组,其中男35例、女25例,年龄28～69岁。3组研究对象的性别、年龄比较,差异均无统计学意义(P<0.05),具有可比性。本研究经本院伦理委员会审核通过(伦理批准号:2022-013-01),所有研究对象均知情并签署知情同意书。

1.2方法 分别抽取3组研究对象清晨空腹静脉血3 mL,室温静置30 min,4 000 r/min离心15 min,收集血清标本并置-80 ℃低温冰箱中保存待测,避免反复冻融。采用贝克曼Dxl800 Access全自动化学发光分析仪及配套试剂盒检测血清AFP水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HOXC9水平,试剂盒购自上海科澄维生物科技有限公司,生产批号:KCW21039,检测设备为瑞士帝肯TECAN 150型酶标仪。

2 结 果

2.1各组研究对象血清HOXC9、AFP水平比较 3组研究对象血清HOXC9、AFP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);早期HCC组血清HOXC9、AFP水平显著高于良性肝病组和对照组,且良性肝病组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组研究对象血清HOXC9、AFP水平比较[M(P25,P75)]

2.2血清HOXC9和AFP单独及联合检测对早期HCC的诊断效能 血清HOXC9单独检测诊断早期HCC的曲线下面积(AUC)为0.821(95%CI:0.722～0.878)、灵敏度为91.8%、特异度为72.6%,血清AFP单独检测诊断早期HCC的AUC为0.611(95%CI:0.538～0.794)、灵敏度为77.8%、特异度为94.1%,血清HOXC9和AFP单独诊断早期HCC的AUC比较,差异有统计学意义(P<0.05);血清HOXC9和AFP联合检测诊断早期HCC的AUC为0.956(95%CI:0.840～0.984),明显高于血清HOXC9和AFP单独检测(Z=0.871、0.511,P<0.05)。表2、图1。

图1 血清HOXC9和AFP单独及联合检测诊断早期HCC的ROC曲线

表2 HOXC9和AFP单独及联合检测对早期HCC的诊断效能

2.3血清HOXC9和AFP水平的相关性分析 Spearman相关性分析结果显示,血清HOXC9水平与血清AFP水平无相关性(r=0.015,P=0.129)。

3 讨 论

HCC作为恶性程度较高的一类肿瘤,出现临床症状时已处于晚期,此时,治疗往往无效,且中位生存率较低(<3个月)[9]。目前,一大部分HCC患者的肝脏储备较差和(或)门静脉流量受损。随着早期HCC检测技术和检测项目的进步,5年生存率已提高至75.0%[10]。尽管传统的治疗方法已经大大改善了HCC的预后,但疾病复发和肝内转移继续对这些患者的治疗构成挑战。血清AFP作为HCC最常用的肿瘤标志物,在HCC的筛查中发挥重要作用。术后AFP水平>200 μg/L提示HCC组织切除不完全,或发生转移[11]。然而,相关研究发现并非所有的HCC患者都可以单独通过AFP进行诊断,AFP的假阴性率约为30.0%,其假阳性也发生于一些患有非恶性疾病(如病毒性肝炎和肝硬化)的患者[12]。因此,临床迫切需要寻找新的肿瘤标志物来提高早期HCC的检出率。

HOX家族由HOXA、HOXB、HOXC和HOXD组成,其中HOXC9位于人类染色体12q13.13,在癌症进展中发挥着关键作用。LI等[13]研究发现HOXC9与胶质母细胞瘤的恶性程度有关,可以作为胶质母细胞瘤诊断和预后的生物标志物。ZHAO等[14]研究发现HOXC9在胃癌组织中过表达并促进胃癌细胞的转移和干细胞样表型,证明了miR-26a表达缺失导致血清HOXC9水平的上调,该研究首次证明了miR-26a/HOXC9轴在胃癌细胞恶性行为中的作用。石峰等[15]研究发现HOXC9在HCC癌组织及HCC细胞系中高表达,干扰HOXC9后,HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力降低。本研究结果显示早期HCC组患者血清HOXC9水平显著高于良性肝病组和对照组(P<0.05),说明血清HOXC9水平在良、恶性肝病中表达存在差异。

单项血清肿瘤标志物检测的灵敏度和(或)特异度往往欠佳,因此为减少漏诊、误诊的发生,可采用多项血清肿瘤标志物联合检测诊断HCC。本研究利用二元Logistic回归模型,通过拟合最佳回归曲线,结合ROC曲线,分析血清HOXC9和AFP联合诊断早期HCC的价值。结果显示,HOXC9单独检测诊断早期HCC的AUC为0.821(95%CI:0.722～0.878),血清HOXC9和AFP联合检测诊断早期HCC的AUC为0.956(95%CI:0.840～0.984),显著高于血清HOXC9和AFP单独检测(Z=0.871、0.511,P<0.05),这说明二者联合检测对HCC高危人群的筛查及早期诊断有重要的临床参考价值。Spearman相关性分析结果显示,血清HOXC9水平与血清AFP水平无相关性(r=0.015,P=0.129),说明二者在诊断早期HCC时可以互相补充。但本研究是一项回顾性病例对照研究,病例数量较少且为单中心研究,后期有待多中心大样本量研究进一步验证。

综上所述,血清HOXC9与AFP联合检测可显著提高对早期HCC的诊断效能。