45%甲维·虱螨脲水分散粒剂高效液相色谱分析

张 喆，孙甜甜，马 超，王 娟，李 静，陈冬梅，白 亮，徐 军，2*，陈 昶，2*

（1.河北中保绿农作物科技有限公司，廊坊 065000；2.中国农业科学院植物保护研究所，北京 100193）

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（Emamectin benzoate）（甲维盐）是一种高效、低毒、低残留的十六元大环内酯类杀虫剂[1]，与氯虫苯甲酰胺、虱螨脲、虫螨腈等其他常规农药无交互抗性[2]。目前甲维盐在我国广泛应用于防治棉铃虫、烟草天蛾和小菜蛾等蔬菜上的害虫[3]。虱螨脲（Lufenuron）属新一代高效低毒的苯甲酰脲类杀虫剂，是通过影响昆虫幼虫的脱皮过程而杀死害虫，主要用于防治玉米、蔬菜、棉花、果树等鳞翅目幼虫[4]。

45%甲维·虱螨脲水分散粒剂是一种新型复配杀虫剂，两者复配，兼具胃毒和触杀作用。通过影响昆虫表皮的形成达到杀虫作用，还能阻碍害虫神经信息传递，杀死害虫，对甘蓝菜青虫具有良好的防治效果[5-6]。目前关于甲维盐和虱螨脲单剂的检测方法国内外已有诸多报道，主要以高效液相色谱分析法为主[7-9]。但是两者复配制剂分析方法尚未见报道。本研究采用反相高效液相色谱法，使用外标法同时测定45%甲维·虱螨脲水分散粒剂中两种有效成分的质量分数。该方法操作简便、快速，分离效果好，结果重现性好，定量准确，是较为实用的分析方法。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

甲醇（色谱级）、乙腈（色谱级）、氨水（色谱级），科密欧试剂有限公司；虱螨脲标准品（含量≥98%）、甲维盐标准品（含量≥97%），沈阳化工研究院有限公司；45%甲维·虱螨脲水分散粒剂，河北中保绿农作物科技有限公司。

LC-20A高效液相色谱仪、Wondasil C18Column不锈钢色谱柱（4.6 mm×250 mm，粒径5 μm），日本岛津公司；0.45 μm孔径有机过滤器和滤膜，上海密粒膜分离技术有限公司；AL104电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；KQ500DB超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 液相色谱分析条件

色谱柱为Wondasil C18Column不锈钢柱（4.6 mm×250 mm，粒径5 μm）；流动相为甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15（V/V）＋0.1%氨水，流动相溶液经滤膜过滤，并进行脱气；柱温为40℃，流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm，进样量为5 μL。

1.3 溶液配制

分别称取甲维盐标准品0.02 g（纯度为97.7%，精确至0.000 02 g）和虱螨脲标准品0.16 g（纯度为98.4%，精确至0.000 02 g）于100 mL容量瓶中，加入80 mL甲醇，超声溶解5 min，待标准品完全溶解后，定容并上下颠倒摇匀，制得浓度为1.6 mg/mL的甲维盐标准溶液，过滤后存于4℃冰箱备用。

称取含甲维盐0.02 g（精确至0.000 02 g）和含虱螨脲0.16 g（精确至0.000 02 g）的45%甲维·虱螨脲WDG于100 mL容量瓶中，处理手段与标准溶液相同，制得浓度约为5 mg/mL的溶液，过滤后存于4℃冰箱备用。

1.4 标准曲线的绘制

称取一定质量的甲维盐和虱螨脲标准品，配制不同浓度的标样溶液。用1.2节色谱条件下分别进行分析，以甲维盐和虱螨脲的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算甲维盐和虱螨脲的线性回归方程。

1.5 计算

试样中有效成分甲维盐和虱螨脲的质量分数w1（%）按式（1）进行计算：

式中：A1为标样溶液中甲维盐（或虱螨脲）峰面积的平均值，mAU·min；A2为试样溶液中有效成分甲维盐（或虱螨脲）检测峰面积的平均值，mAU·min；m1为甲维盐（或虱螨脲）标准品的质量，g；m2为试样的质量，g；w为甲维盐（或虱螨脲）标准品的质量分数，%。

分别称取5份含0.02 g甲维盐或0.04 g虱螨脲试样于100 mL容量瓶中定容，再分别加入甲维盐标准品（约0.02 g）或虱螨脲标准品（约0.04 g），对其有效成分含量进行测定，按式（2）计算回收率。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

分别对甲维盐和虱螨脲标样溶液在190～300 nm范围内进行全波长扫描，获得了二者的紫外吸收光谱（图1）。在254 nm处，甲维盐和虱螨脲的吸光度较高，且杂质影响较小。因此，本方法选择254 nm作为检测波长。

图1 甲维盐和虱螨脲紫外全波长扫描图

2.2 流动相的选择

在45%甲维·虱螨脲水分散粒剂有效成分质量分数检测中，通过不断的调整流动相中甲醇、乙腈和水以及氨水的比例，观察不同流动相组分对应的峰型变化和保留时间，依次进行筛选。最终检测结果表明，当甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15＋0.1%（V/V）时，分离效果最佳，色谱峰峰形尖锐，此条件下，虱螨脲的保留时间为6.5 min，甲维盐B1b的保留时间为13.6 min，甲维盐B1a的保留时间为16.4 min，出峰时间短满足分析要求[10]（见图2、图3）。

图2 甲维盐和虱螨脲标样液相色谱图

图3 45%甲维·虱螨脲水分散粒剂的液相色谱图

2.3 分析方法的线性关系

甲维盐的质量浓度在0.2～2.0 mg/mL范围内，与其相应的峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=0.353x-0.650，R2=0.996 0；虱螨脲的质量浓度在0.2～2.0 mg/mL范围内，与其相应的峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y=1.061x+9.566，R2=0.998 0。

2.4 分析方法的精密度

在1.2节所述色谱条件下，对45%甲维·虱螨脲水分散粒剂试样重复进行5次独立测试，分析方法的精密度由表1可知，样品中甲维盐的相对标准偏差为0.82%，虱螨脲的相对标准偏差为0.45%，分别小于NY/T 2887—2016《农药产品质量分析方法确认指南》中规定的有效成分相对标准偏差RSD[11]，即2(1-0.5logC)×0.67，其中C为样品中有效成分含量。以上结果均符合该规定的要求，说明该分析方法的精密度良好。

表1 方法精密度测定结果（n=5）

2.5 分析方法的准确度

回收率计算结果见表2。甲维盐和虱螨脲的平均回收率分别为98.67%和100.16%，均可以满足分析方法[11]的要求，说明该分析方法准确度良好。

表2 分析方法的回收率测定结果（n=5）

3 结论

本文建立了能够同时对45%甲维·虱螨脲水分散粒剂的有效成分甲维盐和虱螨脲进行检测的高效液相色谱分析方法，并对此方法进行了合理的验证。结果表明，甲维盐和虱螨脲在该方法下分离效果较好，精密度和准确度较高，线性关系良好，相对标准偏差分别为0.82%和0.45%，回收率均达到了98%以上，本方法准确度较高，摆脱了当前使用两种方法分别测定的复杂步骤，因此该方法在含有甲维盐和虱螨脲的复配产品的质量控制中具有很强的可行性和实际应用价值。