拉萨大黄中曲札茋苷的提取工艺研究

周剑 方芳 刘建文 付彬彬 龚云麒 刘军锋 （昆药集团股份有限公司 昆明 650100）

拉萨大黄Rheum lhasaenseA. J. Li et P. K. Haiao属于亚大黄，是传统藏药［1］。《新修晶珠本草》中记载：“亚大黄，苦、涩、锐、寒，清腑热，泻疫疠、消肿、愈疮。”具有治疗腑热、胆热、腹痛、便秘、伤口不愈等作用［2］。拉萨大黄主要分布在中国陕西、四川、湖北、贵州、云南、河南等地［3］。

白皮杉醇-3'-O-β-D- 吡喃葡萄糖苷（Piceatannol-3'-O-β-D-glucopyranoside，PG），又名曲札茋苷，是拉萨大黄主要有效成分，是植物体内产生的天然二苯乙烯类物质，具有抗炎［4］、抗肿瘤［5］、保护心血管［6］等作用。传统提取方法有煎煮法、渗滤法、蒸馏法、回流法［7］。目前对曲札茋苷的提取工艺研究较少，本实验采用单因素实验与正交试验相结合的方式，以曲札茋苷提取转移率为考察指标，对曲札茋苷的提取工艺参数进行优化，为拉萨大黄的工业化提取提供参考，也为曲札茋苷的进一步研究提供基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（岛津LC-2030）；电子天平（梅特勒-托利多公司，XSE205DU）；电热套、循环冷却水真空泵(巩义市予华仪器有限公司) ；旋转蒸发器（瑞士Buchi，R-3）。

“老先生，我已经看了核磁共振结果了，您看这张图，白色的是椎管，可以看到脊髓和马尾神经都受到了压迫，基本可以确诊为腰椎管狭窄症了。咱们啊，先保守治疗三个月，看看效果如何，如果效果不佳，就得考虑手术治疗了。当然，如果这期间出现了下肢肌肉力量的减退，也是手术治疗的绝对适应症。因为肌力下降以后如果不及时手术，神经长时间受压迫，肌力恢复的可能性就比较小了。”

1.2 原料及对照品

拉萨大黄干燥根，产自西藏自治区，2～3 年生拉萨大黄的根部，经中科院昆明植物所鉴定为蓼科植物拉萨大黄Rheum lhasaenseA. J. Li et P. K. Haiao，批号20110505。曲札茋苷标准品（批号20140104，昆药集团股份有限公司药物研究院自制）。

2 方法

2.1 对照品溶液制备

精密称取曲札茋苷对照品19.8 mg，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，取对照品溶液0.25、0.5、1、2、2、1、2、5 mL 分别置100、100、100、50、25、10、10、10 mL 量瓶中，加甲醇稀释成一系列浓度梯度的溶液，分别进行HPLC 检测，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

2.2 色谱条件

提取溶剂、提取时间、料液比是影响曲札茋苷提取率的重要因素，不同因素对提取率的影响不同，通过单因素实验考察每个因素的重要性，确定各因素水平的设定范围。

清代的《红楼梦》更是为后人所称道，无论是艺术上，还是思想上都成为古典小说的经典之作，鲁迅在《中国小说的历史变迁》中就讲：“自有《红楼梦》出来以后，传统的思想和写法都打破了。”其中，涉及到爱情、婚姻方面，曹雪芹讲述了宝、黛、钗的爱情婚姻故事，以宝玉、黛玉追求的“木石前盟”与贾薛两家期望的“金玉良缘”相对抗，也演绎了宝玉、黛玉这一对才子佳人反对封建礼教，追求自由爱情的故事。

表1 洗脱梯度

2.3 提取转移率计算

测定提取时间对曲札茋苷转移率的影响，结果见图3。结果显示，在2 h 以内，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，2 h 时达到最大值，可以看出提取时间对曲札茋苷的提取影响较大，但在2 h 以后，转移率变化差别不大。综合考虑生产需求，确定提取2 h 为最佳提取时间。

式中：C 为提取液中曲札茋苷的浓度，V 为提取液的体积，M 为拉萨大黄药材重量，N 为药材中曲札茋苷含量

2.4.5 溶剂用量对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末50 g，分别以5、6、7、8 倍量药材的95%乙醇回流提取3 次，每次提取2 h，合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。

2.4 曲札茋苷提取工艺单因素实验法考察

2.4.1 提取溶剂对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末50 g，分别加入6倍量药材的水、50%乙醇、95%乙醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。

2.4.2 提取方法对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末50 g，加入8 倍量药材的95%乙醇，分别采用热回流提取、超声波提取、冷浸进行提取3 次，每次2 h。合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。

2.4.3 提取时间对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末50 g，加入8 倍量药材的95%乙醇回流提取3 次，每次提取时间分别为1、2、3、4 h，合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。

2.4.4 提取次数对曲札茋苷转移率及含量的影响 精密称取拉萨大黄药材粉末50 g，以8 倍量药材的95%乙醇回流提取2 h，分别提取2、3、4、5 次，合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率。

解法4 直接求出三角形和梯形的面积，从而直接得出两者的面积比.此种方法没有用到问题1的结论，并且需要设出边长，虽然计算过程较复杂，但是解题思路直接明了.

根据产权特性，王名（2002年）首次提出“公共财产”和“公益产权”的概念。其中，公益财产是有别于国有资产、集体资产的，基于公益捐赠而形成的社会公共财产；公益产权是公益财产的权属关系，以基金会为例，捐赠行为一旦成立，就形成“三权分离”的特殊产权形式：委托人享有对捐赠财产的委托权；受托人承担对受赠财产的受托责任；受益人享有对受赠财产的最终受益权。王名（2013）进一步阐释了公益产权的本质特征在于“三权分离”以及由此带来公益财产的所有者缺位、使用权受限、无自由转让权等特征。

2.5 曲札茋苷提取工艺正交试验

以提取转移率为指标，采用热回流提取法，分别对溶剂用量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）3 个因素进行考查，根据单因素实验结果，每因素选取3 个水平，按L9（33）进行正交试验，影响因素及水平见表2。

测定不同提取溶剂对曲札茋苷转移率及含量的影响，结果见图1。结果显示，随着乙醇浓度的增加，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，当采用95%乙醇提取时，曲札茋苷的转移率基本达到了最高值，从经济性方面考虑，采用95%乙醇是最合理的，既能达到最大的转移率，也能解决溶剂回收的问题，从而降低生产的经济成本。

表2 影响因素水平

3 结果

以十八烷基键合硅胶为填充剂，以水为流动相A，乙腈为流动相 B，按表1 中的梯度洗脱，流速为1 mL /min，柱温为30℃，检测波长为319 nm，进样体积20 μL。理论塔板数按曲札茋苷峰计算应不低于2 000。

3.1 标准曲线

测定不同提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响，结果见图2。结果显示，热回流提取法提取曲札茋苷转移率达到了97.40%，效果最佳。此外，从实际生产条件来讲，最终确定热回流进行提取。

3.2 提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响

图8的横轴、纵轴分别代表训练数据集中目标框的宽、高。从图8中可以看出训练集中车辆目标框的宽与高值近似,且小目标居多。

图1 提取溶剂对曲札茋苷转移率的影响

3.3 提取方法对曲札茋苷转移率及含量的影响

以对照品的浓度（µg/mL）为横坐标，以峰面积的平均值为纵坐标进行线性回归计算，得到线性回归方程：Y=43.164X+2.756 1，r=0.999 9（n=9），且曲札茋苷在0.495～198 µg/mL 线性关系良好。

图2 提取方法对曲札茋苷转移率的影响

3.4 提取时间对曲札茋苷转移率及含量的影响

提取转移率（%）=（C×V）/（M×N）×100%

图3 提取时间对曲札茋苷转移率的影响

3.5 提取次数对曲札茋苷转移率及含量的影响

测定提取次数对曲札茋苷转移率的影响，结果见图4。结果显示，随着提取次数的增加，曲札茋苷提取转移率逐渐升高，在提取5 次时转移率最大，可以看出提取次数对曲札茋苷的提取影响较大。综合考虑生产需求，提取3 次为最佳提取次数。

我们取{O;e1,e2,e3}为仿射坐标系的一组基.记c=e1×e2并设c=xe1+ye2+ze3,则

图4 提取次数对曲札茋苷转移率的影响

3.6 溶剂用量对曲札茋苷转移率及含量的影响

测定溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响，结果见图5。结果显示，随着溶剂用量的增加，曲札茋苷的转移率逐渐增加，当溶剂用量为7 倍时，曲札茋苷转移率基本达到了最大值，随后增长缓慢，考虑使用7 倍溶剂作为最佳溶剂用量。

图5 溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响

3.7 正交试验结果与分析

以曲札茋苷转移率为指标，通过极差R 和均值K 的比较，优化曲札茋苷的最佳提取工艺，结果见表3。结果显示，以曲札茋苷转移率为指标，极值最大的是5.913，可以看出提取工艺中主要的影响因素是溶剂用量（A），各因素影响顺序是A＞C＞B，方差分析显示无显著性影响。经过正交试验设计可知，最佳提取工艺A3B3C3。即溶剂用量为8 倍，提取时间为3 h，提取次数为4 次。

随着数据科学的深入发展，欧美等众多发达国家都意识到作为国家战略资产的数据的重要性，分别发布了大数据发展战略。美国于2012年颁布了《大数据研究和发展计划》，包括约 150余个项目类别，计划项目涵盖国防、卫生、能源等诸多领域。我国也把大数据技术也提到了国家的战略发展日程。2013年，国内多位院士联合建议设立国家专项，开展大数据技术研究。事实上，大数据技术已经应用在互联网、商业智能、金融业以及医疗、零售等行业，并对社会、经济产生了巨大的影响[5]。

表3 正交实验表

表4 方差分析表

3.8 验证实验

分别称取3 份拉萨大黄粗粉2 kg，加入8 倍体积的95%乙醇，加热回流提取4 次，每次3 h，合并滤液，减压浓缩，测定曲札茋苷的含量，计算提取转移率分别为97.12%，96.20%，97.54%，平均为96.95%，RSD值为0.71%，表明工艺具有良好的稳定性。

4 讨论

本实验以拉萨大黄为原料，研究了曲札茋苷的提取工艺。分析曲札茋苷转移率的极差R 和均值K，提取次数、溶剂用量对曲札茋苷转移率的影响较显著。综合考虑采用加8 倍量95%乙醇，提取4 次，每次3 h。验证试验结果可见小试最佳的工艺一定程度适合于生产工艺，为中试提供了相应的数据支持，该提取工艺为后续的生产及中药材的开发利用提供了一定的借鉴意义。