pH 胁迫对菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)耗氧率、排氨率、免疫和抗氧化酶活性以及组织形态的影响*

陈 强 林 毅 黎中宝 黄张帆 孔鲁闽 周思顺 龙中英

(1.集美大学水产学院 福建厦门 361021; 2.福建省海洋渔业资源与生态环境重点实验室 福建厦门 361021)

自工业革命后, CO2急剧增长的排放量已经大幅度超过了海洋碳循环的自我平衡调节能力(Sabineet al,2004), 空气中近50%的CO2被海洋吸收, 严重破坏了海洋中的碳酸盐体系, 造成海洋酸化(Doneyet al,2009)。政府间气候变化专门委员会(Intergovernmental Panel on Climate Change, IPCC)预测在20 世纪末海水pH 由原本的8.1 下降到7.8, 如果未控制CO2排放量,到2300 年pH 可能持续下降0.8～0.9, 到2500 年pH可能会下降到6.4～6.5 (Caldeiraet al, 2003), 将严重影响海洋生态系统的平衡。为了控制CO2的增加, 国际上正在开展 CO2封存技术(Carbon Capture and Storage, CCS) (Regueraet al, 2009), 而因为技术的发展不同, 在运输或封存过程中会导致CO2的泄漏, 这将会使周围海域的pH 降低。有模拟实验表明CO2的泄漏会使海水pH 急剧降低到5.6 左右, 恢复过程中会在pH 6.4 保持很长一段时间(Widdicombeet al,2007)。近几年已经有较多海洋生物受到海洋酸化的影响: 如海水pH 的降低使生物的耗氧率、排氨率降低(杨杰青等, 2016; 陆莉莉等, 2022), 海水酸化能通过干扰双壳动物的能量代谢途径来影响免疫功能(Bibbyet al, 2008; Lanniget al, 2010), 海水酸化还是一种促氧化的胁迫源, 会影响海洋生物机体的氧化作用(Ricevutoet al, 2016; Nardiet al, 2017; Munariet al, 2018)。海水酸化已经严重影响到海洋生物的生活和生存环境, 也影响到了海洋经济发展。

随着主题畅销书的出现，主题出版的经济效益凸显。在市场经济条件下，特别是在出版单位完成转企改制后，实现社会效益与经济效益的双赢是出版单位追求的终极目标。党的十九大召开后，十九大文件及学习辅导读物持续热销，发行总量突破7000万册。人民出版社出版的党的十九大报告单行本《决胜全面建成小康社会 夺取新时代中国特色社会主义伟大胜利》发行量已突破2000万册，《党的十九大报告辅导读本》发行量达到493万册。[3]可见，只要主题出版的选题有特色、内容质量好且宣传到位，就能产生巨大的经济效益。

高级醇是一类含有三个碳原子以上的一元醇类物质，在猕猴桃果酒中可以起到呈香、呈味的作用，适度含量的高级醇可以支撑猕猴桃果酒的口感、丰富酒体的香气[35]。但过量的高级醇会造成饮酒后“上头”反应，也会导致饮酒后不适[36]。文献报道，某些酒中异丁醇、异戊醇是主要的高级醇，超过总含量的70%[37]。因此，本研究仅测定了异丁醇和异戊醇的变化。

贝类作为海洋碳循环的重要参与者, 对海洋环境的变化具有较强的适应性, 目前贝类是研究海洋和海岸生态系统的重要“模式生物”(Jiet al, 2006)(高山等, 2017; 王婷等, 2022), 能够作为海洋指示生物来反映海洋酸化的影响。菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)亦称马尼拉蛤仔、花蛤, 常栖息于潮间带或潮下带泥沙底部(庄启谦, 2001), 为我国四大养殖贝类之一, 是重要的经济物种之一。目前关于酸化对菲律宾蛤仔生理生化影响的研究较少, 本研究选择菲律宾蛤仔作为受试生物, 通过使用HCl调节海水pH (pH 6.4、7.1 和7.7)探究菲律宾蛤仔生理生化的变化情况, 明确菲律宾蛤仔对海洋酸化的反应, 期望为菲律宾蛤仔的养殖管理提供可靠的数据, 为未来研究海洋酸化对海洋生物的影响提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)购自厦门市高崎水产批发市场, 取活泼无损伤个体, 体型规格为: 壳长(3.3±0.2) cm, 壳宽(2.1±0.1) cm, 壳高(1.8±0.2) cm, 体重(8.5±0.5) g。试验开始前蛤仔均在水箱中暂养1 周, 暂养期间保持连续充气, 每日投喂足量小球藻(Chlorellasp.), 投喂1 h 后100%换水1 次,暂养温度(25±1) °C, 盐度31±2, pH 8.0±0.1 (正常海水pH)。试验期间所用海水均为海水晶配置海水, 海水晶均购买自浙江蓝海星盐制品有限公司, 是以天然海盐经过添加少量Mg、K、Ca、Zn、Se、Mo 等微量元素研制而成。

1.2 试验设计

1.2.1 生理试验设计 试验采用静水密封的方法,设置pH 为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 共5 个梯度, 每个梯度设3 个重复, 1 个空白对照, 以pH 8.0 组为对照组; 通过滴加NaOH 和HCl 调节海水pH, 稳定后挑选90 个健康、规格一致的蛤仔, 随机放置到1.1 L的PE 广口塑料瓶中, 待蛤仔伸出水管6 h 后测量水体溶解氧和氨氮浓度。

1.2.2 生化试验设计 本试验设置4 个pH 梯度,对照组(pH 8.0±0.1), 6.4 组(pH 6.4±0.1), 7.1 组(pH 7.1±0.1), 7.7 组(pH 7.7±0.1), 每组3 个重复; 酸化组通过滴加1 mol/L HCl 降低水体pH。菲律宾蛤仔暂养驯化一周后挑选600 个健康无损害, 规格一致个体,随机放置到12 个水缸中, 每缸蛤仔数量为50, 实验共进行42 d, 每天投喂足量小球藻, 投喂1 h 后吸污换水1/3, 试验在第14、28 和42 天采样。

1.2.3 采样与样品制备 用已灭菌剪刀和镊子在冰盒中快速取每个菲律宾蛤仔的内脏团和鳃组织,用预冷的生理盐水(0.9%)冲洗, 滤纸吸干水分, 每组重复分别取6 个菲律宾蛤仔组织, 每个组织用分析天平称重0.2～1.0 g 分装到2 个离心管中, 每个离心管中含有3 个蛤仔的相同组织(进行混样), 加入9倍体积的 0.9%生理盐水, 用组织研磨器低温下研磨。低温高速离心机4 °C 下3 000 r/min, 离心10 min取上清液测酶活性。此外, 每组重复取3 个蛤仔的鳃组织放置于4%多聚甲醛溶液中固定, 用于组织形态观察分析。

1.3 计算方法

式中, OR 为单位菲律宾蛤仔干重耗氧率[单位:mg/(g·h)], DO0、DOt分别为实验开始和实验结束时实验水体中溶解氧含量(单位: mg/L),V为实验PE 广口塑料瓶中所用水的体积(单位: L),W为实验蛤仔软组织干重(单位: g),t为实验持续的时间(单位: h)。

酸性磷酸酶(ACP)活性趋势各组不相同; 第14 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1 组显著低于7.7 组和对照组(P<0.05), 7.7 组显著低于对照组(P<0.05);第28 天6.4 与7.1 组无差异性, 皆显著低于7.7 和对照组(P<0.05), 7.7 组显著低于对照组(P<0.05); 第42天6.4 组显著低于其他组(P<0.05), 7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著低于对照组(P<0.05)。

1.4 指标测定

碱性磷酸酶(AKP)活性趋势各组不相同; 第14天6.4 组显著高于其他酸化组(P<0.05), 与对照组无差异性, 7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著低于对照组(P<0.05); 第28 天6.4、7.1 和对照组无差异性, 皆显著低于7.7 组(P<0.05); 第42 天6.4 组显著高于7.1和对照组(P<0.05), 显著低于7.7 组(P<0.05), 7.1 组显著高于对照组且显著低于7.7 组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05)。

AKP 活性变化趋势为持续下降; 第14、28 天6.4组与7.1 组无差异性, 显著低于7.7 组(P<0.05), 显著高于对照组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05);第42 天各组间无差异性。

2016年、2017年2年秋播均用新育成的不育系9171A作母本，与恢复系699C作父本开展小面积试验，制种行比按1∶3，育苗移栽，移栽密度8 000株/667m2。于每年收获前按5点抽样法每点取样10株考查母本的结实情况。结果表明(表2)，2016年平均结实率为93.7%，平均每角粒数为21.63，千粒重为4.19 g；2017年平均结实率为91.8%，平均每角粒数为22.30，千粒重为4.27 g。2年的制种产量分别为203.5 kg/667m2和198 kg/667m2。鉴定其种子不育株率分别为2.3%和2.7%，不育株均为异源花粉串粉结实(并非不育系微量花粉自交结实)。

2.1.1 pH 对菲律宾蛤仔耗氧率的影响 pH 对菲律宾蛤仔耗氧率的影响见图1。由图1 可知, pH 5.0～8.0 时耗氧率呈上升趋势, pH 8.0～9.0 时耗氧率呈下降趋势, 在pH 8.0 时达到顶峰为0.34 mg/(g·h), 显著高于pH 5.0、6.0、7.0、9.0 (P<0.05)。

过氧化氢酶(CAT)活性通过南京建成试剂盒(钼酸铵法)检测。利用钼酸铵与H2O2产生黄色络合物,使用分光光度计测出的吸光度值计算出过氧化氢酶活性。

超氧化物歧化酶(SOD)活性通过南京建成试剂盒(WST-1 法)检测, 丙二醛(MDA)含量通过南京建成试剂盒(TBA 法)检测。

2.1.2 pH 对菲律宾蛤仔排氨率的影响 pH 对菲律宾蛤仔排氨率的影响见图2。由图2 可知, pH 5.0～8.0 时耗氧率呈上升趋势, pH 8.0～9.0 时耗氧率呈下降趋势, 当 pH 为 8.0 时, 排氨率达到峰值为0.071 mg/(g·h), 显著高于pH 5.0、6.0、7.0、9.0 (P<0.05)。

1.5 切片制作

将取好的组织样品迅速裁成规定大小后放入多聚甲苯中, 固定24 h; 用水和70%的乙醇将固定液洗去, 水洗后将上述组织依次浸入75%乙醇/1 h, 95%乙醇/30 min, 100%乙醇/30 min, 进行脱水; 脱水后将组织浸蜡和包埋, 室温冷却后进行切片后使用苏木精伊红染色。

认为群众路线教育实践活动与毛泽东时代的做法有相似之处，是“中国共产党正在更深入地钻研已故领导人毛泽东的遗产，以寻求清理党员队伍的灵感”［1］的有效方法，是国外媒体看待此次群众路线活动的一个重要观点。当然，从这一角度出发认识“群众路线”活动，显然带有强烈的表面化和片面化倾向，因此需要我们认真甄别。

1.6 数据分析

试验数据于EXCEL 中进行初步处理统计, 之后使用SPSS 19.0 软件进行方差分析。运用Duncan test对数据进行显著性检验, 显著性水平为0.05。试验数据以平均值±标准误表示。

2 结果

2.1 pH 对菲律宾蛤仔生理指标的影响

总抗氧化能力(T-AOC)通过南京建成试剂盒(ABTS 法)检测, 利用ABTS 会被氧化剂氧化成显色的ABTS+, 使用酶标仪测出ABTS+吸光度即可计算样品抗氧化能力。

人的眼神有很多，不同的眼神可以表达出不同的情感，演员在表演的过程中要善于用自己的眼睛向观众传达情感。[2]演员要让自己的眼睛有神，通过看远近高低不同的地方，与观众形成一种交流，通过眼神的变化，使观众从中察觉出其内心的变化。这样通过眼睛的表现，就把歌曲唱活了，唱出了真实的情感，也就抓住了观众的心。

图1 pH 对菲律宾蛤仔耗氧率的影响Fig.1 Effect of pH on oxygen consumption rate of R.philippinarum

电子商务作为重要的新兴产业，带动了很多嘉兴市中小型物流企业的发展。2017年嘉兴电子商务交易额1454.25亿元，在全省排名第4，同比增长30.7%。跨境电子商务网络零售出口额7.44亿元，网店4.94万家。近年来，嘉兴市委市政府在推进“电商换市”战略中，“出政策、搭平台、引人才、促发展”，使得嘉兴电子商务成为全省网路零售增长幅度最明显的三个城市之一。

图2 pH 对菲律宾蛤仔排氨率的影响Fig.2 Effect of pH on ammonia excretion rate of R.philippinarum

2.2 pH 对菲律宾蛤仔鳃组织结构的影响

经过石蜡切片以及H.E 染色, 观察经过42 d pH胁迫菲律宾蛤仔的鳃组织的主要结构发现: 对照组的鳃丝较为正常(图3a, 箭头所示); 7.7 组的鳃丝间距扩大, 鳃丝间的空腔变大(图3b, 箭头所示); 7.1 组相对对照组鳃丝间距扩大(图3c, 箭头所示); 6.4 组的鳃丝不规则变形, 间距更大, 鳃上皮细胞损伤, 鳃丝纤毛排列紊乱黏合(图3d, 箭头所示)。

图3 pH 对菲律宾蛤仔鳃组织结构的影响Fig.3 Effects of pH on the tissue structure of R. philippinarum

2.3 pH 对菲律宾蛤仔生化指标的影响

2.3.1 pH 对菲律宾蛤仔鳃免疫酶活性的影响 由图4 可得, 鳃组织中的溶菌酶(LZM)活性趋势为先升后降, 第14 天酸化组显著低于对照组(P<0.05), 6.4 组显著低于其他酸化组(P<0.05), 7.1 组显著低于7.7 组(P<0.05); 第28、42 天6.4 组显著低于其他组(P<0.05),7.1 与7.7 组间无差异性, 皆显著低于对照组(P<0.05)。

图4 pH 对菲律宾蛤仔鳃组织免疫酶活性的影响Fig.4 Effect of pH on immunoenzyme activity in gill of R.philippinarum

式中, NR 为单位蛤仔干重排氨率[单位: mg/(g·h)],Nt、N0为实验结束时和实验开始水中氨氮的浓度(单位:mg/L),V为实验PE 广口塑料瓶中所用水体积(单位:L),W为实验蛤仔软组织干重(单位: g),t为实验持续的时间(单位: h)。

7.雏鸡7日龄第一次免疫后，一旦出现肠炎，雏鸡拉水现象，可用速效肠毒清(恩诺沙星、头孢等)，1 500只鸡1袋，溶于40～50 kg水中自由饮用，在14～17日龄更换Ⅱ号料后出现的球虫肠炎，可使用肠安康，按每瓶对水150～200 kg计算用药量，21～24日龄前后的球虫肠炎，轻微病例可单用肠毒克(地克珠利、胺丙啉、甲硝唑等)，按每袋对水150～200 kg计算用药量，有明显小肠球虫时，可配合使用杀球威或球肠安(磺胺嘧啶)，40日龄到出栏前，可用痢停(地美硝唑、丁胺)。

酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性使用南京建成试剂盒(微量酶标法)检测, 利用酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物的原理, 在酶标仪520 nm 测定吸光度后可计算酶活性。

2.3.2 pH 对菲律宾蛤仔内脏团免疫酶活性的影响由图5 可得, 内脏团LZM 活性变化趋势为先升后降;第14 天6.4 组显著高于7.1 组(P<0.05), 显著低于7.7和对照组(P<0.05), 7.1 组显著低于 7.7 和对照组(P<0.05), 7.7 组显著低于对照组(P<0.05); 第28 天6.4组显著高于7.1 和对照组(P<0.05), 显著低于7.7 组(P<0.05), 7.1 组显著低于7.7 组(P<0.05), 显著高于对照组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05); 第42天6.4 组显著低于其他酸化组(P<0.05), 与对照组无差异性, 7.1 与7.7 组无差异性。

ACP 活性变化趋势为先升后降; 第14 天6.4 与7.1 组无差异性, 显著高于7.7 组和对照组(P<0.05),7.7 与对照组无差异性; 第28 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著高于对照组(P<0.05); 第42 天各组间无差异性。

溶菌酶(LZM)活性使用南京建成试剂盒(比浊法)检测, 因为溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低, 透光度增强, 使用分光光度计透光度值计算溶菌酶活性。

2.3.3 pH 对菲律宾蛤仔鳃抗氧化酶活性的影响由图6 可得, 超氧化物歧化酶(SOD)活性变化趋势持续上升; 第14 天6.4 组与7.7 组无差异性, 显著高于7.1 组(P<0.05), 显著低于对照组(P<0.05), 7.1 组显著低于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 组显著低于其他组(P<0.05), 7.1 组与对照组无差异性, 显著低于7.7组(P<0.05); 第42 天6.4 组和7.1 组与对照组无差异性, 皆显著低于7.7 组(P<0.05)。

图6 pH 对菲律宾蛤仔鳃组织抗氧化酶活性的影响Fig.6 Effect of pH on antioxidant enzyme activity in gill of R. philippinarum

过氧化氢酶(CAT)活性变化趋势各组不相同; 第14 天6.4 组显著高于7.1 组(P<0.05), 显著低于7.7 和对照组(P<0.05), 7.1 组显著低于其他组(P<0.05), 7.7组显著高于其他酸化组(P<0.05), 显著低于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 与7.1 组无差异性, 皆显著低于7.7 和对照组(P<0.05), 7.7 与对照组间无差异性;第42 天6.4 与7.1 组无差异性, 皆显著低于7.7 组(P<0.05), 显著高于对照组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05)。

总抗氧化能力(T-AOC)变化趋势各组不相同; 第14 天6.4 组显著低于其他组(P<0.05), 7.1 组显著高于对照组(P<0.05), 显著低于7.7 组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 组显著低于其他组(P<0.05), 7.1 与对照组无差异性, 皆显著低于7.7 组(P<0.05); 第42 天6.4 与7.1 组无差异性, 皆显著低于7.7 组(P<0.05), 显著高于对照组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05)。

丙二醛(MDA)含量变化趋势各组不相同; 第14天各组间无差异性; 第28 天6.4 组显著高于7.1 组(P<0.05), 显著低于7.7 和对照组(P<0.05), 7.1 组显著低于其他组(P<0.05), 7.7 与对照组无差异性; 第42 天酸化组间无差异性, 皆显著低于对照组(P<0.05)。

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性变化趋势为持续上升; 第14 天6.4 组显著高于7.1 组(P<0.05), 显著低于7.7 和对照组(P<0.05), 7.1 组显著低于其他组(P<0.05), 7.7 组与对照组无差异性; 第28、42 天6.4组显著低于其他组(P<0.05), 7.1 组与对照组无差异性,皆显著低于7.7 组(P<0.05)。

2.3.4 pH 对菲律宾蛤仔内脏团抗氧化酶活性的影响 由图7 可得, 内脏团组织SOD 活性变化趋势为持续下降; 第14、42 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著高于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05),7.1、7.7 组和对照组无差异性。

综上所述，在对心血管疾病患者进行临床治疗的同时，应加强护理方面的工作，减慢其身体机能下降的速度，避免治疗过程中出现护理风险事件的概率。长期临床护理实践表明，采用全程健康教育模式与风险护理联合的护理方式，能够有效避免护理风险的发生，提高护理工作的整体质量，对心血管患者及医护人员都具有非常重要的临床价值。

图7 pH 对菲律宾蛤仔内脏团抗氧化酶活性的影响Fig.7 Effect of pH on antioxidant enzyme activity in visceral mass of R. philippinarum

CAT 活性变化趋势呈下降趋势; 第14 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著高于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1、 7.7 组和对照组无差异性; 第42天各组间无差异性。

4)底板未支护。76-2号专用回风巷原支护方案只考虑顶板和两帮的支护，巷道底板无支护，导致底板在高应力作用下碎碎，自由变形严重。

T-AOC 变化趋势各组不相同; 第14 天酸化组间无差异性, 显著高于对照组(P<0.05); 第28 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05), 7.1 组显著高于7.7 与对照组(P<0.05), 7.7 与对照组间无差异性; 第42 天6.4 组显著低于其他酸化组(P<0.05), 显著高于对照组(P<0.05), 7.1 组显著高于7.7 组(P<0.05), 7.7 组显著高于对照组(P<0.05)。

海岛是我国海洋国土的重要组成部分，也是海洋经济发展及国防建设的重要基点。海岛工业污染源较少，生活垃圾和生活污水是海岛的主要污染来源；随着海岛的开发和建设大力推进，生活垃圾和污水产量日益增加[1-3]。海岛生活垃圾处理方式和设施的选择，必须根据海岛生活垃圾产生现状和理化特征等基本资料和实际情况进行设计。国内对生活污染源的研究主要集中于内陆农村地区，海岛地区生活污染物排放规律、理化特性研究较少。我国海岛大部分面积较小，多为村镇级海岛。笔者以广东省2个村镇级海岛(外伶仃岛、东澳岛)为研究地点，对生活垃圾产生量、理化特性和生活污水排放系数、污染物浓度进行研究。

MDA 含量变化趋势为持续下降; 第14 天6.4 组显著低于 7.1 组(P<0.05), 显著高于 7.7 和对照组(P<0.05), 7.7 与对照组无差异性; 第28 天酸化组间无差异性, 皆显著高于对照组(P<0.05); 第42 天6.4 组显著高于其他酸化组(P<0.05), 与对照组无差异性,7.1 组与7.7 组无差异性, 皆显著低于对照组(P<0.05)。GSH-Px 活性变化趋势为先升后降; 第14、42 天各组间无差异性; 第28 天6.4 组显著高于其他组(P<0.05),7.1 与7.7 组无差异性, 皆显著高于对照组(P<0.05)。

3 讨论

耗氧率和排氨率是研究贝类基础新陈代谢的重要内容之一, 能够为水产养殖和生态学研究提供基础性的资料, 已知有多种环境因素能够影响新陈代谢的过程。已有多项研究各种因素影响滤食性贝类耗氧率和排氨率的影响(胥贤等, 2015; 刘傲东等, 2016;王静等, 2019; 卢王梯等, 2020; 江天棋等, 2020), 但是并未发现有关于pH 对菲律宾蛤仔耗氧率和排氨率影响的研究。pH 的升高或降低都有可能会导致蛤仔组织的损伤从而影响了生理代谢; 黑唇鲍(Haliotis rubra)(Harriset al, 1999)、长肋日月贝(Amusium pleuronectes)(严俊贤等, 2018)和东方小藤壶(Chthamalus challengeri)(曹善茂等, 2013)在低pH 时的耗氧率和排氨率低, 本文中当pH 低于8.0 时, 耗氧率和排氨率随之降低, 说明低pH 不利于贝类的呼吸代谢; 本研究蛤仔的耗氧率和排氨率在pH 8.0 时达到顶峰, 一般贝类的耗氧率和排氨率在 8.0～8.5 时出现最大值, 如尖紫蛤(Soletellina acuta) (黄洋等, 2013)在pH 8.4 时达到最大值、合浦珠母贝(Pinctada fucata) (刘建业等, 2011)的最大值在pH 8.0 时出现; 当pH 过高时, 贝类的生理活动也会受到影响, 当pH 9.0 时耗氧率和排氨率呈显著下降的趋势。说明贝类的生理活动与pH 的变化息息相关。

免疫防御和抗氧化防御系统是软体动物防御系统的一部分。免疫防御分为细胞免疫和体液免疫(Lokeret al, 2004), 细胞免疫主要依赖血细胞的吞噬作用, 体液免疫主要依靠凝集素、溶血素、溶酶体酶和酚氧化酶等各种非特异性的酶和免疫因子的共同作用(刘志鸿等, 2003)。酸性磷酸酶和碱性磷酸酶是溶酶体的重要的组成部分, 在酸性环境下, ACP 进行水解作用, 把表面带有磷酸酯的异物水解掉, 防止机体受到感染(Cheng, 1978); AKP 调节膜运输, 参与转磷酸作用, 促进体内的钙磷代谢, 维持体内适宜的钙磷比例(Beedham, 1958; 郑艺杰, 2006)。在李晓梅等(2016)的研究中发现近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)鳃组织中的LZM 活性会随着pH 的降低而降低; 在梁健等(2017)的研究中发现青蛤(Cyclina sinensis)的LZM 活性随着时间呈先升后降的趋势。本研究中内脏团中ACP 和AKP 活性相对高于鳃组织, 可以猜测内脏团是机体防御免疫的主要场所; 在42 d 的胁迫中,免疫酶活性趋势为先上升后下降, 推测可能是由于前期的胁迫导致蛤仔产生应激反应, 从而产生大量的酶来抵御环境的变化; 第42 天免疫酶活性下降, 说明蛤仔对环境已经趋于适应, 但在42 d 的pH 胁迫后蛤仔组织已经损伤了, 酶活性不能恢复到原有水平。

抗氧化防御系统是应对环境污染胁迫做出快速响应的一类物质总称, 主要包括非酶类抗氧化剂和酶类抗氧化剂(蒋国萍, 2016)。在贝类的防御系统中,酶类抗氧化剂起着不断清除活性氧以维持机体活性氧动态平衡的作用。环境因子的胁迫可能会导致机体组织器官受损产生大量的活性氧(谭志军, 2006), 导致机体产生过氧反应, 严重可能会导致细胞坏死。在Wang 等(2016)的研究中发现经过28 d 的酸化胁迫后酸化组鳃组织中的抗氧化酶活性低于对照组; 马广智等(2001)的研究中发现在草鱼(Ctenopharyngodon idella)在酸化条件下SOD 的活性随着酸化时间的延长而降低; 通过Matozzo 等(2013)的研究发现在低pH时鸡帘蛤(Chamelea gallina)鳃组织中SOD 和CAT 的活性高于对照组; 但在本研究中第 14 天鳃组织中SOD 和CAT 活性均低于对照组。鳃组织的CAT 和SOD 的活性均为先降后升, 说明在前期酸化组所设pH 能够抑制这两种酶类的分泌, 但是在经过长期的胁迫后组织可能出现了损伤导致这两种酶活性的升高。在内脏团中, 这两种酶类的活性为下降趋势, 说明pH 降低抑制内脏团中这两种酶的释放。

谷胱甘肽过氧化物酶作为抗氧化系统中非酶类抗氧化剂的组成部分, 能够清除动物机体内过氧化产物, 保证细胞膜结构和功能的完整性(Wanget al,2008; Pacittiet al, 2013), 维持机体内的正常氧化还原反应(Hussainet al, 2004)。在彭玲等(2015)的研究中发现, 厚壳贻贝(Mytilus coruscus)在不同浓度Cd 的胁迫下GSH-Px 的活性为先升后降的趋势; 在邓思平等(2012)和于庆云等(2013)的研究中也体现了尖紫蛤和菲律宾蛤仔在重金属的胁迫下GSH-Px 的活性为先升后降的趋势; 这都与本文的研究成果相似。说明在机体受到外界的胁迫时主要依靠GSH-Px 来清除体内的自由基, 使机体内环境保持平衡。

树立人的尊严。并且,习总书记还强调:“伟大斗争,伟大工程,伟大事业,伟大梦想,紧密联系、相互贯通、相互作用,其中起决定性作用的是党的建设新的伟大工程。确保党……在坚持和发展中国特色社会主义的历史进程中始终成为坚强领导核心。”[6]这就更加说明在发展中国特色社会主义事业中党的领导的重要性,因为只有代表着人民利益的无产阶级政党才能在物化的社会中“不忘初心,牢记使命”,才能坚定自己的“阶级意识”,坚持马克思主义理论在意识形态上的指导地位,坚定社会主义方向,坚持共产主义信仰,才能带领人民走出一条以人为本、和谐发展的康庄大道。

4 结论

(1) pH 的变化对菲律宾蛤仔的生理活动有着较大影响, 蛤仔的排氨率和耗氧率随着pH 升高先增后降, 均在pH 8.0 时达到最大值。

(2) 菲律宾蛤仔在经过42 d 的pH 胁迫后, 其鳃组织在不同的酸化组中出现了不同程度的组织损伤,在6.4 酸化组中组织损伤得更加严重。

(3) 在鳃组织中低pH 对免疫和抗氧化酶活性有较为明显的抑制作用; 而且随着胁迫时间的增加, 原有的代谢水平被打破, 虽然蛤仔经过较长时间的适应后, 其酶活性水平有所回升, 但仍达不到原有的水平。另外, 长时间的酸化胁迫还可能使蛤仔的抗病力降低, 使其更容易死亡。