胃癌组织中UHRF1、YAP1 和FOXP3 表达及与患者临床病理特征的关系

朱文娟

胃癌是常见的一种恶性肿瘤，随着人们生活方式及饮食结构的变化，其发病率呈不断上升趋势，严重影响人们身心健康[1-2]，手术切除是当前治疗胃癌的主要方式，但患者预后并不理想[3]。因此，研究肿瘤相关基因将成为治疗癌症的突破口。类泛素样含环指域蛋白1（ubiquitin-like containing PHD and ring finger domain protein 1，UHRF1）具有多个功能域，在多种肿瘤组织中高表达[4]。Yes 相关蛋白1（Yes associated protein 1，YAP1）主要参与DNA 修复、细胞生长等过程，具有促癌作用，在结直肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤中高表达[5]。叉头翼状螺旋转录因子3（forkhead box protein 3，FOXP3）被认为是调控T 细胞分化及其功能的一种关键因子，作为机体抗肿瘤系统中的核转录因子，在多种恶性肿瘤中均高表达[6]。目前，关于UHRF1、YAP1和FOXP3 在胃癌组织中表达的研究较少。本研究旨在探讨胃癌组织中UHRF1、YAP1 和FOXP3 蛋白表达及与患者临床病理特征的关系，以期为临床诊治胃癌提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象 收集2021 年1 至12 月湖州市第一人民医院经手术切除的85 例胃癌患者的标本，包括癌组织和配对癌旁组织。纳入标准：（1）经病理检查证实为胃癌；（2）均为初诊且未接受抗肿瘤治疗者。排除标准：（1）合并全身感染者；（2）合并其他恶性肿瘤者；（3）严重肝肾、心肺功能损害者；（4）既往有胃部手术史者。本研究经本院医学伦理委员会审查通过，患者或家属均知情同意。

1.2 方法 采用免疫组化法测定胃癌组织和癌旁组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率。取经中性甲醛溶液固定的各标本，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片，厚度为4 μm。经60 ℃烤片30 min，二甲苯脱蜡，采用3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，抗原采用柠檬酸钠缓冲液煮沸修复，室温环境下自然冷却。再以5%山羊血清室温封闭30 min，滴加UHRF1、YAP1 和FOXP3 蛋白一抗，4 ℃孵育过夜。再滴加辣根过氧化物酶标记的二抗，放置于37 ℃孵育20 min。采用二氨基邻苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，自来水冲洗，苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性表达情况。

1.3 结果判定 UHRF1、YAP1 和FOXP3 均定位于细胞核，染色后主要呈浅黄色至棕黄色颗粒状。每张切片随机选取5 个不重叠视野，200 倍显微镜下观察并计数染色细胞数和细胞总数，计算染色细胞比例。按照染色细胞比例和染色强度评分乘积综合评价，无染色细胞为0 分，染色细胞比例≤10%为1 分，10%～＜30%为2 分，30%～＜50%为3 分，＞50%为4 分；细胞无着色为0 分，浅黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。两项评分相乘所得总分值即为最终评分：≤3分表示阴性（-），4～6 分表示弱阳性（+），7～9 分表示中阳性（++），≥10 分表示强阳性（+++）。阳性率=（弱阳性+中阳性+强阳性）切片数/总切片数×100%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 25.0 统计软件。计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织与癌旁组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 表达的比较 胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率均显著高于癌旁组织，差异均有统计学意义（均P＜0.01），见表1。

表1 胃癌组织与癌旁组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率的比较[例（%）]

2.2 不同临床病理特征胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 表达的比较 不同性别、年龄、BMI 和肿瘤直径胃癌患者的胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率比较，差异均无统计意义（均P＞0.05）；低分化胃癌患者的胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率高于高、中分化胃癌患者；Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者的胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者；淋巴结转移胃癌患者的胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率高于无淋巴结转移胃癌患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 不同临床病理特征胃癌患者组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率比较[例（%）]

3 讨论

大部分胃癌患者早期无明显症状，并很容易出现转移，预后较差[7-9]。目前，关于胃癌发病分子机制尚未完全阐明[10-11]。

UHRF1 主要通过不同功能域识别不同染色质修饰，从而发挥不同生物学功能。UHRF1 属于UHRF 蛋白家族，在细胞放射敏感性、DNA 损伤与修复、细胞增殖及周期调控等方面发挥重要作用。研究发现，UHRF1 表达与细胞增殖能力和分化程度呈正相关，即细胞增殖能力越强、分化程度越低，其阳性率越高[12]。研究发现，UHRF1 参与细胞周期调控[13]。景皓月等[14]研究表明，结肠癌组织UHRF1 阳性率显著高于癌旁组织，且与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关。本研究结果显示，胃癌组织UHRF1 阳性率显著高于癌旁组织；UHRF1 阳性率低分化胃癌患者高于高、中分化患者，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移患者，可见胃癌组织UHRF1 表达与分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关，分化程度越低、临床分期越高及淋巴结转移患者UHRF1 阳性率越高。

YAP1 活性增加、过度表达可导致细胞异常增殖[15-16]。YAP1 在多种恶性肿瘤中高表达，但在胃癌中研究甚少。丁家宝等[17]研究发现，相比于肺良性病变组织，肺癌组织YAP1 阳性率较高，YAP1 表达与非小细胞肺癌患者的病理类型、年龄和性别无关，但与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移、临床分期和肿瘤直径相关。本研究结果显示，胃癌组织YAP1 阳性率显著高于癌旁组织；YAP1 阳性率低分化胃癌患者高于高、中分化患者，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移患者，可见胃癌组织YAP1 表达与分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关，分化程度越低、临床分期越高及淋巴结转移患者YAP1 阳性率越高。

胃局部微环境免疫监视功能低下所致的免疫逃逸是导致胃癌发生、发展的主要原因。FOXP3 可参与机体免疫调节，通过调控Treg 细胞的发育、分化及成熟产生免疫抑制作用。FOXP3 主要通过参与抑制肿瘤免疫反应促进病情发展[18-19]。尹婕等[20]研究显示，非小细胞肺癌组织FOXP3 蛋白表达水平高于正常肺组织，且与患者某些临床病理特征有关。本研究结果显示，胃癌组织FOXP3 阳性率显著高于癌旁组织；FOXP3 阳性率低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者，Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移患者，可见胃癌组织中FOXP3 表达与分化程度、临床分期和淋巴结转移密切相关，分化程度越低、临床分期越高及淋巴结转移患者FOXP3 阳性率越高。

综上所述，胃癌组织UHRF1、YAP1 和FOXP3 阳性率高，并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征相关。