DCLK1、FOXC1在乳腺癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系

杨红,张亚磊,丁怡馨,王子仪

(平煤神马医疗集团总医院 病理科,河南 平顶山 467099)

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤,且其发病率呈逐年上升趋势,但早期乳腺癌症状多不明显,极易被忽视而未及时就医,导致多数患者确诊时已出现淋巴结转移,增加治疗难度,影响患者预后[1-2]。因此,寻找有效指标辅助评估乳腺癌病情程度、预后情况并为治疗提供新靶点有重要意义。双皮质素样激酶1(doublecortin like kinase 1,DCLK1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,且有研究指出,抑制DCLK1活性便可抑制肿瘤细胞生长,且DCLK1在多种癌症组织中阳性表达[3-4]。叉头框蛋白C1(forkhead box protein C1,FOXC1)是forkhead box转录因子超家族的重要成员,可参与肿瘤细胞生长、分化和迁移,且可调控细胞活性,从而调控肿瘤细胞的侵袭与转移[5]。由此,推测DCLK1、FOXC1的表达可能与淋巴结转移存在一定关系。基于此,本研究观察乳腺癌组织中DCLK1、FOXC1的表达情况,并分析其与淋巴结转移的关系,旨在为乳腺癌早期诊疗提供思路。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取平煤神马医疗集团总医院病理科2020年1月至2022年12月乳腺癌患者手术标本,对其进行常规病理检查及病理分析,采用免疫组化染色的方法对其进行DCLK1、FOXC1检测,同时选取距离癌组织5 cm的癌旁组织做对照。本研究方案经医院医学伦理委员会批准。(1)纳入标准:①符合《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2017年版)》[6]中相关诊断标准,经病理学检查确诊为非浸润性癌或浸润性癌;②根据《实用肿瘤内科治疗》[7]中乳腺癌T临床分期诊断为T1、T2;③初诊初治;④单侧肿瘤;⑤认知功能正常;⑥患者知情并签署同意书。(2)排除标准:① 2个月内接受过化疗、放疗等抗肿瘤治疗;②合并其他恶性肿瘤;③合并免疫系统疾病;④合并严重精神疾病;⑤合并血液系统疾病;⑥合并严重感染;⑦合并重要器官功能衰竭。根据上述纳入、排除标准共纳入86例乳腺癌患者,年龄45～68(57.48±4.61)岁;转移情况淋巴结转移45例,无淋巴结转移41例;T临床分期T131例,T255例;病理类型非浸润性癌21例,浸润性癌65例。

1.2 一般资料收集方法

设计一般资料调查表,详细调查并统计86例乳腺癌患者的临床资料。包括:年龄(<45岁、≥45岁)、体重指数(<24 kg·m-2,≥24 kg·m-2)、肿瘤家族病史(有、无)、淋巴结转移情况(未转移、转移)、T临床分期(T1、T2)、病理类型(非浸润性癌、浸润性癌)、病理组织分级(Ⅰ级+Ⅱ级、Ⅲ级)、肿瘤部位(右侧、左侧)。

1.3 DCLK1、FOXC1检测方法

采用免疫组织化学SP法对所有组织标本进行检测,免疫组织化学染色均使用全自动免疫组化仪(上海华雅思创生物科技有限公司,型号Autosttainer360),所有操作过程严格按照说明书步骤进行。使用体积分数10%的中性缓冲福尔马林液对所有组织标本进行固定,上脱水机前不少于6 h,采用石蜡包埋,石蜡组织切成3 μm,连续切片3张,一张做HE染色,其余2张分别做DCLK1、FOXC1检测。石蜡切片在60 ℃烤箱内烘烤60 min,脱蜡液脱蜡,乙醇化,蒸馏水冲洗干净,浸入磷酸盐缓冲液中备用;使用过氧化氢溶液在37 ℃下孵育10 min;加热修复60 min,滴加一抗原在37 ℃下孵育60 min;DCLK1采用兔抗人单克隆抗体,FOXC1采用兔抗人多克隆抗体(抗体购于abcam公司,均为浓缩型试剂,DCLK1 1∶100稀释,FOXC1 1∶500稀释),二抗为免疫显色试剂,每张切片检测都用已知的阳性组织做阳性对照,以磷酸盐缓冲溶液代替一抗做阴性对照,机器完成染色后,自来水冲洗,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固,光镜下观察。

1.4 结果判定

所有病理切片均由2名高年资病理科医生采用双盲法阅片,在显微镜下观察组织染色情况。DCLK1染色阳性定位于细胞质,FOXC1染色阳性定位于细胞核,呈棕褐色,呈颗粒状。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 DCLK1、FOXC1在乳腺癌组织中的表达情况

癌组织中DCLK1、FOXC1阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 DCLK1、FOXC1在乳腺癌组织中的表达情况[n(%)]

2.2 不同临床资料患者癌组织中DCLK1表达情况

有淋巴结转移、T临床分期为T2患者癌组织中DCLK1阳性表达率高于无淋巴结转移、T临床分期为T1患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、体重指数、肿瘤家族病史、疾病类型、病理组织分级、肿瘤部位的患者癌组织中DCLK1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同临床资料患者癌组织中DCLK1表达情况[n(%)]

2.3 不同临床资料患者癌组织中FOXC1表达情况

有淋巴结转移、T临床分期为T2患者癌组织中FOXC1阳性表达率高于无淋巴结转移、T临床分期为T1患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、体重指数、肿瘤家族病史、疾病类型、病理组织分级、肿瘤部位的患者癌组织中FOXC1阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同临床资料患者癌组织中FOXC1表达情况[n(%)]

2.4 DCLK1表达与淋巴结转移、T临床分期的关系

Phi相关分析结果显示,DCLK1表达与淋巴结转移、T临床分期呈正相关(Phi>0,P<0.05)。见表4。

表4 DCLK1表达与淋巴结转移、T临床分期的关系

2.5 FOXC1表达与淋巴结转移、T临床分期的关系

Phi相关分析结果显示,FOXC1表达与淋巴结转移、T临床分期呈正相关(Phi>0,P<0.05)。见表5。

表5 FOXC1表达与淋巴结转移、T临床分期的关系

3 讨论

多数乳腺癌患者确诊时已伴有淋巴结转移,不利于治疗的顺利推进,影响患者预后。因此,寻找与乳腺癌淋巴结转移的相关标志物对于临床及时制定治疗方案、改善患者预后具有重要意义。DCLK1是在神经元有丝分裂后期发现的一种微管相关激酶,且研究表明其可调节癌基因的表达,与肿瘤细胞的侵袭能力有关[8-9]。FOXC1广泛存在于人体多种组织和器官中,吴东雅等[10]研究指出,FOXC1的表达与肿瘤组织增殖及转移密切相关。因此,本研究分析DCLK1、FOXC1在乳腺癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系。

本研究结果显示,乳腺癌患者癌组织中DCLK1、FOXC1阳性表达率均高于癌旁组织,提示乳腺癌的发生和发展可能与DCLK1、FOXC1的阳性表达升高有关。分析原因在于,DCLK1属于微管蛋白超家族成员,其通过与Doublecortin的微管蛋白结合,激活肿瘤相关信号通路,共同参与细胞的生成、增殖、分化和迁移,从而对肿瘤细胞及癌基因的表达起到调节作用[11]。FOXC1是一个具有高度保守DNA结合结构域的一类转录因子,且FOXC1的作用较为复杂,既有生长刺激的功能,又能起到生长抑制的作用。FOXC1可通过诱导及抑制侵袭表型,增强雌激素受体与靶基因的结合,从而调控胚胎发育、细胞分化等生物学过程,进而起到对肿瘤靶基因表达的调控作用[12-13]。因此,当DCLK1、 FOXC1阳性表达升高时,预示着可能存在大量癌细胞。另外本研究结果显示,DCLK1、FOXC1阳性表达与淋巴结转移及T临床分期具有相关性,提示DCLK1、FOXC1或可作为评估乳腺癌病理特征的潜在指标,其表达的升高可加剧乳腺癌的浸润和转移,可用于评估淋巴结转移情况。分析原因,有研究指出,DCLK1参与上皮间质转化的过程,而上皮间质转化参与肿瘤的恶性进展,可赋予肿瘤细胞转移和入侵的能力[14-15]。早期肿瘤细胞可呈上皮样状态,通过上皮间质转化,上皮细胞失去细胞极性,获得较高的迁移与侵袭能力的间质表型,从而使细胞运动性和迁移能力增强[16-17]。当乳腺癌患者DCLK1的阳性表达升高时,则表明上皮间质转化被激活,从而促进癌细胞转移和入侵。因此,存在淋巴结转移和临床分期为T2的乳腺癌患者DCLK1阳性表达率较高。FOXC1可调控MMP10的表达,MMP10是由癌症干细胞样细胞分泌的一种生长因子,可导致干细胞生成形成肿瘤的能力,刺激癌症干细胞的生长,还可刺激转移潜能。因此,FOXC1的阳性表达使MMP10激活,从而在乳腺癌的转移中发挥促进作用[18]。且FOXC1通过转录激活MMP10、SOX4、SOX13等下游靶基因,可诱导癌细胞发生上皮间质转化,发生淋巴结转移。

4 结论

乳腺癌组织中DCLK1和FOXC1阳性表达率较高,且淋巴结转移、临床分期与DCLK1和FOXC1的阳性表达密切相关。