儿童和成人髓母细胞瘤免疫组织化学对比分析

徐欣,张国臣,夏庆欣,刘晓萌,王翦,陈忠平

(1.郑州大学附属肿瘤医院/河南省肿瘤医院 a.神经外科;b.病理科,河南 郑州 450008;2.中山大学肿瘤防治中心 神经外科/神经肿瘤科,广东 广州 510060)

髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是原发于中枢神经系统的一种恶性程度极高的神经上皮性肿瘤,由于肿瘤细胞形态很像胚胎时期的髓母细胞而得名,是一种胚胎残余细胞性肿瘤,儿童和成人均可发病,儿童多见,目前影响MB发病年龄的机制尚不明确[1]。本文回顾性分析MB患者的病理免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果,旨在初步探索影响MB发病年龄的因素,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源

收集郑州大学附属肿瘤医院神经外科和中山大学肿瘤防治中心神经外科/神经肿瘤科2014年1月至2022年6月手术切除经病理证实的76例MB患者,男50例,女26例,年龄1～49[12(8.25,22.50)]岁。根据WHO中枢神经系统肿瘤[2]分类分级:经典型41例,促纤维增生/结节型14例,广泛结节型8例,大细胞/间变型10例,非定类3例,均为WHO Ⅳ级。病理类型非定类。

1.2 分组

以18周岁为界分为儿童组(50例)和成人组(26例),见表1。两组年龄差异有统计学意义(P<0.05),符合以年龄分组的实际;两组肿瘤部位之间差异有统计学意义(P<0.05),为了排除肿瘤部位对两组IHC比较的影响,进一步将患者分为儿童中线组(47例)、儿童非中线组(3例)、成人中线组(15例)、成人非中线组(11例),使数据具有可比性。

表1 儿童和成人MB患者一般资料分析

1.3 IHC项目

由于每例患者IHC项目不完全相同,结合文献[3-4]选取以下IHC指标进行分析:上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)、细胞角蛋白(cytokeratin,CK)、突触素(synapsin,Syn)、嗜铬素A(chromogranin A,CgA)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、少突胶质细胞转录因子-2(oligodendrocyte transcription factor-2,Oligo-2)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、S-100蛋白,以上试剂购自丹麦Dako公司;CD99、CD34、p53基因购自北京中杉金桥公司。

1.4 IHC检测

所有标本均经10%中性甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,4 μm厚切片,行EnVision二步法IHC染色,实验步骤按试剂盒说明书进行,设阳性和阴性对照,染色完成后,用酒精进行脱水、清洗,二甲苯透明,以中性树胶和盖玻片封片。

1.5 判断标准

在光学显微镜高倍视野下寻找对应IHC阳性细胞,随机选取5个高倍视野分别计算阳性细胞占比,以5个占比的平均值作最终判断。阳性细胞占比<10%定义为阴性,占比≥10%为阳性。

1.6 统计学方法

2 结果

儿童中线组和成人中线组、儿童非中线组和成人非中线组所有IHC指标之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 儿童和成人MB患者IHC对比分析

3 讨论

MB最早是由Bailey和Cushing于1925年命名的一种专指幕下的恶性神经上皮肿瘤,属于原始神经外胚层肿瘤,儿童患者占全部MB的70%左右,男性多见,本研究儿童患者占65.8%,男女比例约为1.92∶1,与文献数据相符。通过数据产生一些疑问:同为MB,为何发病年龄可以从几月龄至成年?影响MB发病年龄的因素是什么?儿童和成人MB之间的差异是什么?如果能找到一个突破点将儿童MB患者发病年龄延迟至成年,或将极大改善MB患者的预后。

本研究从最基础的MB的IHC结果进行探讨,分析儿童和成人MB组织学之间的差异性,文献中探讨MB患者IHC指标表达意义的研究并不少见,但是比较儿童和成人之间差异的文献不多。

EMA是上皮细胞分泌的一种乳脂小球膜糖蛋白,广泛存在于人体各种上皮细胞中;CK是角质细胞中的一种骨架蛋白,主要分布于上皮细胞,与上皮细胞的增殖分化有关。虽然MB普遍被认为是一种神经上皮性肿瘤,但是上皮细胞IHC指标EMA和CK阳性率却很低,分别为1.81%(1/55)和5.26%(3/57),儿童和成人之间差异无统计学意义,具体原因和机制暂不明确。

Syn是一种与突触囊泡相连的突触前酸性转膜蛋白,具有特异性,可在大多数神经源性和神经内分泌肿瘤中表达;CgA是一组存在于嗜铬细胞分泌颗粒中的可溶性酸性蛋白,常用来标记各种神经内分泌细胞及其来源的肿瘤,确切功能仍不十分清楚;NSE是参与糖酵解途径的烯醇化酶中的一种,广泛存在于神经元和神经内分泌细胞的胞质内,对神经元具有营养和保护功能,在MB中Syn比CgA更敏感,比NSE更特异。苗娜等[5]研究85例MB患者病理发现Syn阳性率达64%,马海涵等[6]报道NSE在成人小脑MB中大部分呈强阳性。本研究Syn、CgA、NSE阳性率分别为95.95%(71/74)、43.14%(22/51)、96.88%(62/64),高于文献报道。另外,NeuN是一种可溶性核蛋白,主要表达于发育成熟的神经细胞和神经内分泌细胞的细胞核和细胞质内,本研究NeuN阳性率为66.67%(22/33)。从神经内分泌IHC指标可以看出,MB被认为是神经内分泌肿瘤的说法合乎规范。但是各组之间差异无统计学意义,并不能解释MB患者发病年龄的差异性。

CD99是一种细胞黏附因子,其功能尚未完全了解,张鹏等[7-8]报道CD99在MB的阳性率为57.94%(62/107),CD99的表达与MB预后负相关,并推测CD99有可能成为治疗MB的一个新靶点,但是CD99与患者性别、年龄、肿瘤的组织学分型和分子分型均无相关性。另一种细胞黏附因子CD34,可以选择性地表达于人类及其他哺乳动物造血干/祖细胞表面,并随细胞的成熟逐渐减弱至消失[9]。本研究中CD99阳性率为73.17%(30/41),CD34阳性率为71.43%(25/35),且两组间差异无统计学意义。可见CD99和CD34阳性率均较高,两者阳性率极为接近,MB的发生发展可能与两者未随细胞的成熟逐渐消失有关,且两者可能起协同作用,但是具体机制目前尚不清楚。S-100蛋白是一种酸性钙结合蛋白,主要存在于中枢神经系统各部星状神经胶质细胞的胞液中,因在饱和硫酸铵中100%溶解而得名[10],Yilmaz等[11]发现S-100蛋白在后颅窝MB和室管膜瘤中的阳性率为43%,且两种肿瘤间差异无统计学意义。本研究S-100蛋白阳性率为55.88%(38/68),各组之间差异无统计学意义,可以认为S-100蛋白在成人MB中的作用与儿童MB相似,机制亦不明确。Oligo-2主要在少突胶质细胞前体细胞早期定向分化中起重要作用,确切作用及调控机制尚不清楚[12]。李涛等[13]报道儿童后颅窝MB中Oligo-2表达阳性率为66.6%(74/111),但未进行后续分析,本研究Oligo-2表达阳性率为55.88%(12/28),各组差异无统计学意义,Oligo-2在MB患者发生发展中的作用有待进一步研究。GFAP主要分布于中枢神经系统的星形胶质细胞,参与细胞骨架的构成并维持其张力强度。p53基因为人体抑癌基因,野生型促使癌细胞凋亡,从而防止癌变,p53的突变型会提高癌变。本研究两者阳性率分别为66.67%(50/75)、50.00%(13/26),各组差异无统计学意义,GFAP在MB的发生发展中作用不详,而p53基因突变可能在非中线MB患者中起作用,机制不详。

4 结论

目前常见的IHC指标在MB中均未见明显差异,从IHC角度不能解释儿童和成人MB患者发病年龄的差别,影响MB发病年龄的原因目前仍不确定。不过,随着MB分子分型研究的进一步成熟[14],未来一定会发现影响MB发病年龄的突破点,并针对性研发治疗方案,从而延缓MB患者尤其是儿童患者的发病年龄,争取更好的预后。